2.7. ImmunohistochemistryTo determi

2.7. Immunohistochemistry
To determine whether primary LESCs, LESC-Vs, Venus-labeled
corneal epithelial sheets, and reconstructed corneal epithelia
expressed LESC markers, and to compare the Venus expression
profile for different regions of the reconstructed corneal epithelium,
specimens were collected and fixed in 4% paraformaldehyde
(SigmaeAldrich). Corneal tissues were embedded in tissue Tek OCT
compound for sectioning. After washing, the specimens were
incubated with Triton X-100, and blocked with 10% FBS (Hyclone,
Thermo Scientific Corporation). Specimens were incubated with a
primary antibody (Table 2) overnight at 4 C. After washing, specimens
were incubated with a Cy3-labeled secondary antibody
(1:200, Beyotime Technological Corporation, China) at 37 C for 1 h.
As a control, the primary antibody was replaced with PBS. Specimens
were treated with Hoechst 33342 (SigmaeAldrich) to stain
cell nuclei. Primary LESCs were examined with an immunohistochemistry
kit (Zhongshan Bio-Tech Co., Ltd., Beijing, China).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.7. Immunohistochemistryการตรวจสอบว่าหลัก LESCs, LESC-Vs ชื่อวีนัสแผ่น epithelial กระจกตา และ epithelia กระจกตาที่สร้างขึ้นใหม่แสดงเครื่องหมาย LESC และ การเปรียบเทียบนิพจน์วีนัสส่วนกำหนดค่าสำหรับภูมิภาคต่าง ๆ ของกระจกตา epithelium สร้างขึ้นใหม่รวบรวม และแก้ไขใน paraformaldehyde 4% ไว้เป็นตัวอย่าง(SigmaeAldrich) เนื้อเยื่อกระจกตาถูกฝังอยู่ในเนื้อเยื่อ Tek OCTบริเวณสำหรับ sectioning หลังจากซักผ้า มีไว้เป็นตัวอย่างincubated กับไตรตั้น X 100 และบล็อก 10% FBS (Hycloneเทอร์โมวิทยาศาสตร์ Corporation) ไว้เป็นตัวอย่างที่ incubated กับการแอนติบอดีหลัก (ตาราง 2) ค้างคืนที่ซี 4 หลังจากซักผ้า specimensมี incubated ด้วยแอนติบอดีรองป้าย Cy3(1: 200, Beyotime เทคโนโลยีคอร์ปอเรชั่น จีน) ที่ 37 C สำหรับ 1 hเป็นตัวควบคุม แอนติบอดีหลักถูกแทนที่ ด้วย PBS ไว้เป็นตัวอย่างได้รับการรักษาอย่างไร Hoechst 33342 (SigmaeAldrich) เพื่อติดกับแอลฟาเซลล์ หลัก LESCs ได้ตรวจสอบกับ immunohistochemistry มีชุด (จงเทคโนโลยีชีวภาพ Co., Ltd. ปักกิ่ง จีน)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.7 immunohistochemistry
การตรวจสอบว่า LESCs หลัก LESC-Vs
ศุกร์ป้ายแผ่นเยื่อบุผิวกระจกตาและสร้างขึ้นใหม่epithelia
กระจกตาแสดงเครื่องหมายLESC
และเพื่อเปรียบเทียบการแสดงออกของวีนัสรายละเอียดสำหรับภูมิภาคต่างๆของเยื่อบุผิวกระจกตาใหม่,
ตัวอย่างถูกเก็บรวบรวมและการแก้ไขใน 4% paraformaldehyde
(SigmaeAldrich) เนื้อเยื่อกระจกตาที่ถูกฝังอยู่ในเนื้อเยื่อเต็ตุลาคมสารประกอบสำหรับ sectioning
หลังจากล้างชิ้นงานที่ถูกบ่มกับ Triton X-100 และบล็อกที่มี 10% FBS (Hyclone, เทอร์โมวิทยาศาสตร์คอร์ปอเรชั่น) ตัวอย่างที่ถูกบ่มกับแอนติบอดีหลัก (ตารางที่ 2) ค้างคืนที่ 4 องศาเซลเซียสหลังจากล้างตัวอย่างถูกบ่มกับแอนติบอดีรองCy3 ติดฉลาก(1: 200 Beyotime เทคโนโลยีคอร์ปอเรชั่นจีน) ที่ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 1 ชม. ในขณะที่การควบคุม , แอนติบอดีหลักถูกแทนที่ด้วยพีบีเอส ตัวอย่างที่ได้รับการรักษาด้วย Hoechst 33342 (SigmaeAldrich) เพื่อเปื้อนนิวเคลียสของเซลล์ LESCs ประถมศึกษามีการตรวจสอบที่มี immunohistochemistry ชุด (Zhongshan ไบโอเทค จำกัด , ปักกิ่ง, จีน)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.7 . หลอด
เพื่อตรวจสอบว่า หลัก lescs lesc VS , วีนัส , ป้าย
แผ่นเยื่อกระจกตาและกระจกตามี
lesc เครื่องหมายแสดงเกียรติยศ และเปรียบเทียบรายละเอียดการแสดงออก
ดาวศุกร์สำหรับภูมิภาคต่างๆของการฟื้นฟูพิชิต
, ทำการเก็บข้อมูลและการแก้ไขด้วย 4% พาราฟอร์มาลดิไฮด์
( sigmaealdrich )เนื้อเยื่อกระจกตาถูกฝังอยู่ในบริเวณต.ค.
เต็กเนื้อวุ่น . หลังจากอาบน้ำเสร็จ ทำการ
บ่มกับ Triton X-100 และถูกปิดกั้นด้วย 10% FBS ( hyclone
, เทอร์โมวิทยาศาสตร์ Corporation ) ทำการบ่มด้วย
แอนติบอดีหลัก ( ตารางที่ 2 ) ค้างคืนที่ 4 องศาเซลเซียส หลังจากการล้างชิ้นงาน
ถูกบ่มด้วย cy3 ป้ายระดับแอนติบอดี ( 1:200
,บริษัทเทคโนโลยี beyotime , จีน ) ที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสนาน 1 ชั่วโมง
เป็นตัวควบคุม , แอนติบอดีหลักถูกแทนที่ด้วย PBS ตัวอย่าง
รักษาด้วย Hoechst 33342 ( sigmaealdrich ) คราบ
เซลล์นิวเคลียส . lescs ปฐมภูมิตรวจสอบกับหลอด
Kit ( Zhongshan ไบโอเทค จำกัด , ปักกิ่ง , จีน ) .