Formalin- Ether Concentration Techn

Formalin- Ether Concentration Technique
Purpose:
Parasitic Elements are concentrated through sedimentation to enhance the recovery in fecal specimens.
Principle:
Formalin acts both a fixative and preservative of protozoan eggs, larvae and cysts. The specific gravity of protozoan cysts and helminth eggs is greater than that of water. Fecal debris is extracted into the ether phase so that the parasitic forms can be separated and then sedimented by centrifugation.
Procedure:
Mix a small portion of the stool, about the size of a marble, in 10 ml 5% – 10% formalin or saline in a flat-bottomed waxed paper cup, carton, or 16x 125 mm test tube. Allow to stand 30 minutes for fixation.
Strain about 10 ml of this suspension through a small funnel (or pointed paper cup with end cut off) containing wet gauze or cheesecloth into a 15 ml centrifuge tube. Use two layers of wide- mesh gauze or one layer of narrow- mesh gauze.
Add physiological saline or 5%- 10% formalin to within ½ inch of the top of the test tube. Centrifuge for 10 minutes at 500g.
Decant supernatant, leaving 0.5- 1.5 ml of sedimented material
Resuspend the sediment in saline to within ½ inch of the top of the tube. Centrifuge again for 10 minutes at 500g. This second wash is not needed if the first supernatant wash is light tan or clear in color.
About 1 ml sediment should remain. If the amount is much larger or smaller, adjust to the correct quantity as follows:
Amount too large: resuspend the sediment in saline and pour out a portion. For example, if the amount is twice that needed, pour out slightly less than half the suspension. Then, add saline to bring the volume up to 10ml, and centrifuge again.
Amount too small: pour off the supernatant and strain a second portion of the original fecal suspension into the tube. The amount to be strained depends on the amount of sediment. For example, if it is half the amount obtained from the first centrifugation, strain another 10ml into the tube. Centrifuge again.
After adjustment, if necessary, decant and resuspend the sediment in 5%-10% formalin, filling the tube about one- half full.
Add approximately 3 ml ethyl acetate, insert stopper, and shake vigorously for a minimum of 30 seconds. Carefully remove the stopper by holding tube away from yourself to avoid spraying as the stopper is removed and pressure is released.
Centrifuge at 500g for 10 minutes. Four layers should result:
1-Top layer of ethyl acetate
2- Plug of fecal debris
3- Layer of formalin
4- Sediment with parasitic eggs, cysts or larvae.
Free the plug of debris from the sides of the tube with an applicator stick. Carefully decant the three layers.Use a cotton swab to clean debris from the walls of the tube to prevent it from settling down into the sediment.
Using a pipette, mix the remaining sediment with a small amount of the fluid that drains from the sides of the tube.
Mix the sediment well, and prepare a wet mount for examination.
Examination of sediment:
Prepare a saline mount by adding 1 drop sediment to 1 drop saline. Add a coverslip. Scan the entire area under the coverslip under low power (10x) objective for eggs and larvae.
Add 1 drop iodine to the edge of the coverslip to assist in the observation of cysts. Examine under the high- dry objective (40x- 45x).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

เทคนิคสมาธิ formalin - อีเทอร์วัตถุประสงค์:องค์ประกอบของเสียงฟู่เหมือนกาฝากเข้มข้นผ่านการตกตะกอนเพื่อเพิ่มประสิทธิภาพการฟื้น fecal specimensหลักการ:Formalin ทำหน้าที่ตรึงและ preservative protozoan ไข่ ตัวอ่อน และซีสต์ ถ่วงของซีสต์ protozoan และ helminth ไข่มากกว่าของน้ำได้ คุณสามารถสกัดเศษ fecal เข้าเฟสอีเทอร์ให้แบบเสียงฟู่เหมือนกาฝากสามารถแยก และ sedimented แล้ว โดย centrifugationขั้นตอน:ผสมส่วนของอุจจาระ เกี่ยวกับขนาดของตัวอ่อน 10 ml 5% – 10% formalin หรือน้ำเกลือในกระดาษ waxed flat-bottomed ถ้วย กล่อง หรือ 16 x 125 mm ทดสอบหลอดเล็ก อนุญาตให้ยืน 30 นาทีสำหรับเบีสายพันธุ์นี้ระงับแบบกรวยขนาดเล็ก (หรือถ้วยกระดาษชี้กับปลายตัด) ประกอบด้วยผ้าพันแผลเปียกหรือ cheesecloth เป็นหลอดเครื่องหมุนเหวี่ยง 15 ml ประมาณ 10 ml ใช้ผ้าพันแผลทั้งตาข่ายสองชั้นหรือชั้นหนึ่งของผ้าตาข่ายแคบเพิ่มน้ำเกลือ physiological หรือ 5% - 10% formalin เพื่อภายใน½นิ้วด้านบนของหลอดทดสอบ เครื่องหมุนเหวี่ยง 10 นาทีที่ 500 กรัมริน supernatant ออก 0.5-1.5 ml sedimented วัสดุResuspend ตะกอนในน้ำเกลือเพื่อภายใน½นิ้วด้านบนของท่อ เครื่องหมุนเหวี่ยงอีกครั้งในนาทีที่ 500 กรัม ไม่ต้องล้างสองนี้ถ้าล้าง supernatant แรก ตาลสี หรือล้างสีประมาณ 1 ml ควรยังคงตะกอน ถ้ายอดมีขนาดใหญ่มาก หรือเล็ก ปรับปริมาณถูกต้องเป็นดังนี้:ยอดเงินที่เกิน: resuspend การตะกอนในน้ำเกลือ และเทออกบางส่วน สำหรับตัวอย่าง ถ้ายอดเงินเป็นสองเท่าที่จำเป็น เทออกเล็กน้อยน้อยกว่าครึ่งการระงับ จากนั้น เพิ่มน้ำเกลือนำปริมาตร 10 ml และเครื่องหมุนเหวี่ยงอีกครั้งยอดมาก: เทปิด supernatant และส่วนที่สองของการระงับ fecal เดิมสายพันธุ์เข้าไปในท่อ ยอดเงินจะถูกย้ำขึ้นอยู่กับจำนวนของตะกอน ตัวอย่าง ถ้าเป็นยอดเงินรับจาก centrifugation แรกครึ่ง สายพันธุ์อื่น 10ml ลงในหลอด เครื่องหมุนเหวี่ยงอีกครั้งหลังจากปรับปรุง ถ้าจำเป็น ริน และ resuspend ตะกอนใน 5% - 10% formalin ไส้หลอดประมาณหนึ่ง-ครึ่งเพิ่มประมาณ 3 มิลลิลิตรเอทิล acetate แทรกจุก และเขย่าโยคะอย่างน้อย 30 วินาที อย่างระมัดระวังเอาจุกที่ โดยถือหลอดจากตัวเองเพื่อหลีกเลี่ยงการฉีดพ่นเป็นจุกที่ถูกเอาออก และปล่อยแรงดันเครื่องหมุนเหวี่ยงที่ 500 กรัม 10 นาที ชั้นที่ 4 ควรทำ: ชั้น 1 ด้านบนของเอทิล acetate 2 - ปลั๊กของเศษ fecal 3 - ชั้นของ formalin 4 - ตะกอนไข่เสียงฟู่เหมือนกาฝาก ซีสต์ หรือตัวอ่อนฟรีปลั๊กของเศษจากด้านข้างของหลอดด้วยการติดตรา อย่างรินชั้นสาม ใช้เป็นไม้พันสำลีทำความสะอาดเศษจากผนังของท่อเพื่อป้องกันไม่ให้มันตกตะกอนลงในตะกอนใช้เป็นเปตต์ ผสมตะกอนที่เหลือกับจำนวนน้ำที่ท่อระบายน้ำจากด้านข้างของหลอดผสมตะกอนดี และเตรียมเขาเปียกสำหรับตรวจสอบตรวจสอบตะกอน:เตรียมเมาท์ saline โดยการเพิ่มตะกอน 1 หล่นน้ำเกลือหล่น 1 เพิ่มเป็น coverslip สแกนพื้นที่ทั้งหมดภายใต้ coverslip ภายใต้วัตถุประสงค์ (10 x) พลังงานต่ำสำหรับไข่และตัวอ่อนเพิ่มไอโอดีน 1 หล่นไปขอบของ coverslip เพื่อช่วยในการสังเกตของซีสต์ ตรวจสอบภายใต้วัตถุประสงค์สูงแห้ง (40 x 45 x)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ฟอร์มาลิน - อีเทอร์เทคนิค :

มีความเข้มข้นขององค์ประกอบปรสิตเข้มข้นผ่านการตกตะกอนเพื่อเพิ่มการกู้คืนในตัวอย่างอุจจาระหลักการ :
.
ฟอร์มาลินทำหน้าที่ทั้งฟิกเซทีฟและสารกันบูดของโปรโตซัวไข่ ตัวอ่อน และขจัดเชื้อจุลินทรีย์ได้ ความถ่วงจำเพาะของไข่พยาธิและโปรโตซัวซีสต์เป็นมากกว่าน้ำเศษอุจจาระ สกัดเป็นอีเทอร์เฟสเพื่อให้รูปแบบปรสิตสามารถแยกแล้ว sedimented โดย 3 ขั้นตอน :
.
ผสมเป็นส่วนเล็ก ๆของอุจจาระ , เกี่ยวกับขนาดของหินอ่อน , 10 ml 5 % ( ฟอร์มาลิน 10% หรือน้ำเกลือในแบน bottomed แว็กซ์ ถ้วย กระดาษกล่องหรือ 16x 125 มม. หลอดทดสอบ อนุญาตให้ยืน 30 นาที การตรึง
สายพันธุ์ประมาณ 10 ml ของการระงับนี้ผ่านกรวยขนาดเล็ก ( หรือแหลมถ้วยกระดาษท้ายตัด ) ที่มีผ้าพันแผลเปียกหรือผ้าเป็น 15 ml centrifuge หลอด ใช้สองชั้นกว้าง - ผ้าโปร่งตาข่ายหรือหนึ่งชั้นของแคบ - ผ้าโปร่งตาข่าย สรีรวิทยา
เพิ่มน้ำเกลือหรือ 5% - 10% ฟอร์มาลินภายใน½นิ้วจากด้านบนของหลอด เครื่องปั่นเหวี่ยงสำหรับ 10 นาทีที่ 500 g .
รินสูง เหลือ 0.5 - 15 มล. sedimented วัสดุ
resuspend ตะกอนในน้ำเกลือภายใน½นิ้วจากด้านบนของหลอด เครื่องปั่นเหวี่ยงอีกครั้งสำหรับ 10 นาทีที่ 500 กรัม ล้างที่สองนี้คือถ้าไม่จําเป็นต้องล้างนำแรกคือแสงตัน หรือล้างสี .
1 ml ตะกอนน่าจะยังคงอยู่ ถ้าจำนวนเงินขนาดใหญ่ หรือเล็ก ปรับปริมาณที่ถูกต้องดังนี้
ปริมาณขนาดใหญ่เกินไป :resuspend ตะกอนในน้ำเกลือและเทส่วน . ตัวอย่างเช่นถ้าจำนวนเงินเป็นสองเท่าเป็นเทเล็กน้อยน้อยกว่าครึ่งหนึ่งของการระงับ จากนั้นเติมเกลือเพื่อนำปริมาณถึง 10 และเหวี่ยงอีกครั้ง .
เล็กน้อยเกินไป : เทออกสูงและความเครียดส่วนที่สองของช่วงล่าง ) เดิมเป็นหลอดเงินที่ต้องใช้ขึ้นอยู่กับปริมาณของตะกอน ตัวอย่างเช่น ถ้าเป็นครึ่งหนึ่งของเงินที่ได้จากการปั่นเหวี่ยงแรกสายพันธุ์อื่น ที่มาเป็นหลอด เครื่องหมุนอีกครั้ง
หลังจากปรับถ้าจำเป็น ริน และ resuspend ตะกอนใน 5% - 10% ฟอร์มาลิน ไส้หลอดหนึ่ง - เต็มครึ่งนึง
เพิ่มประมาณ 3 มล. ethyl acetate , อุดแทรกและเขย่าอย่างแรง เพื่ออย่างน้อย 30 วินาที อย่างเอาจุกโดยถือหลอดห่างจากตัวเองเพื่อหลีกเลี่ยงการฉีดพ่นเป็นกันชนออก และดันออก
เครื่อง 500 เป็นเวลา 10 นาที สี่ชั้นวรผล :
1-top ชั้นเอทิลอะซิเตท
-
2 ปลั๊กของเศษอุจจาระ 3 - ชั้นของฟอร์มาลิน
4 - ตะกอนที่มีไข่พยาธิ , ซีสต์ หรือตัวอ่อน
ฟรีปลั๊กของเศษซากจากด้านข้างของหลอดที่มี applicator ไม้เท้า ค่อยๆรินชั้นที่สาม ใช้ผ้าฝ้ายสะอาดเศษจากผนังของท่อเพื่อป้องกันมันจากการตกตะกอนลงไปในดินตะกอน
ใช้ปิเปตต์ ผสมตะกอนที่เหลือกับจำนวนเล็ก ๆของของเหลวที่ไหลจากด้านข้างของหลอด
ผสมตะกอนครับ