Staphylococcus aureus is one of the

Staphylococcus aureus is one of the most successful bacterial pathogens, harboring a vast
repertoire of virulence factors in its arsenal. As such, the genetic manipulation of S. aureus
chromosomal DNA is an important tool for the study of genes involved in virulence and
survival in the host. Previously reported allelic exchange vectors for S. aureus are shuttle
vectors that can be propagated in Escherichia coli, so that standard genetic manipulations
can be carried out. Most of the vectors currently in use carry the temperature-sensitive
replicon (pE194ts) that was originally developed for use in Bacillus subtilis. Here we show
that in S. aureus, the thermosensitivity of a pE194ts vector is incomplete at standard nonpermissive
temperatures (42 °C), and replication of the plasmid is impaired but not abolished.
We report rpsL-based counterselection vectors, with an improved temperature-sensitive
replicon (pT181 repC3) that is completely blocked for replication in S. aureus at nonpermissive
and standard growth temperature (37 °C).We also describe a set of temperaturesensitive
vectors that can be cured at standard growth temperature. These vectors provide
highly effective tools for rapidly generating allelic replacement mutations and curing expression
plasmids, and expand the genetic tool set available for the study of S. aureus.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

หมอเทศข้างลาย staphylococcus เป็นหนึ่งประสบความสำเร็จมากที่สุดจากแบคทีเรียโรค harboring มากมายละครของปัจจัย virulence ของอาร์เซนอล เป็นเช่น การจัดการทางพันธุกรรมของ S. หมอเทศข้างลายของโครโมโซมดีเอ็นเอเป็นเครื่องมือสำคัญสำหรับการศึกษายีนที่เกี่ยวข้องกับ virulence และการอยู่รอดในโฮสต์ ก่อนหน้านี้ แลกเปลี่ยน allelic รายงานเวกเตอร์สำหรับ S. หมอเทศข้างลายมีรถรับส่งเวกเตอร์ซึ่งสามารถนำไปใน Escherichia coli ดังนั้น manipulations ภาพทางพันธุกรรมที่มาตรฐานสามารถทำ เวกเตอร์ใช้อยู่ในปัจจุบันส่วนใหญ่ดำเนินการตรงตามอุณหภูมิreplicon (pE194ts) ที่ถูกพัฒนาขึ้นเพื่อใช้ในการคัด subtilis เดิม ที่นี่เราแสดงในหมอเทศข้างลาย S., thermosensitivity ของเวกเตอร์ pE194ts ว่าไม่สมบูรณ์ในมาตรฐาน nonpermissiveอุณหภูมิ (42 ° C), และการจำลองแบบของ plasmid มีความบกพร่องทางด้าน แต่ไม่ยุติเรารายงานตาม rpsL counterselection เวกเตอร์ มีการปรับปรุงอุณหภูมิความreplicon (pT181 repC3) ที่ทั้งหมดถูกบล็อคสำหรับการจำลองแบบในหมอเทศข้างลาย S. ที่ nonpermissiveและมาตรฐานการเจริญเติบโตอุณหภูมิ (37 ° C)นอกจากนี้เรายังอธิบายชุดของ temperaturesensitiveเวกเตอร์ที่สามารถรักษาอุณหภูมิมาตรฐานการเจริญเติบโต เวกเตอร์เหล่านี้ให้เครื่องมือที่มีประสิทธิภาพสูงสำหรับสร้างแทน allelic กลายพันธุ์อย่างรวดเร็ว และบ่มนิพจน์plasmids ขยายเครื่องมือทางพันธุกรรมที่ตั้งสำหรับการศึกษาของ S. หมอเทศข้างลาย

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

Staphylococcus เรียสเป็นหนึ่งในแบคทีเรียที่ประสบความสำเร็จมากที่สุดเยิ้มใหญ่
ละครของปัจจัยความเป็นพิเศษในคลังแสงของมัน เช่นการจัดการทางพันธุกรรมของเชื้อ S. aureus
โครโมโซมเป็นเครื่องมือสำคัญสำหรับการศึกษาของยีนที่เกี่ยวข้องกับความรุนแรงและ
ความอยู่รอดในการเป็นเจ้าภาพ ก่อนหน้านี้รายงานเวกเตอร์แลกเปลี่ยน allelic สำหรับเชื้อ S. aureus มีรถรับส่ง
เวกเตอร์ที่สามารถแพร่กระจายใน Escherichia coli เพื่อให้กิจวัตรทางพันธุกรรมมาตรฐาน
สามารถดำเนินการได้ ส่วนใหญ่ของเวกเตอร์ที่ใช้ในปัจจุบันดำเนินการไวต่ออุณหภูมิ
Replicon (pE194ts) ที่ถูกพัฒนาขึ้นมาเพื่อใช้ในเชื้อ Bacillus subtilis ที่นี่เราแสดง
ให้เห็นว่าในเชื้อ S. aureus, thermosensitivity ของเวกเตอร์ pE194ts ไม่สมบูรณ์ที่ nonpermissive มาตรฐาน
อุณหภูมิ (42 ° C), และการจำลองแบบของพลาสมิดบกพร่อง แต่ไม่ยกเลิก.
เรารายงาน rpsL ตามเวกเตอร์ counterselection กับอุณหภูมิที่เพิ่มขึ้น ที่ไวต่อแสงแดด
Replicon (pT181 repC3) ที่ถูกปิดกั้นอย่างสมบูรณ์สำหรับการจำลองแบบในเชื้อ S. aureus ที่ nonpermissive
การเจริญเติบโตและอุณหภูมิมาตรฐาน (37 ° C) นอกจากนี้เรายังอธิบายชุดของ temperaturesensitive
เวกเตอร์ที่สามารถรักษาให้หายขาดได้ที่อุณหภูมิมาตรฐานการเจริญเติบโต เวกเตอร์เหล่านี้มี
เครื่องมือที่มีประสิทธิภาพสูงสำหรับการสร้างการกลายพันธุ์อย่างรวดเร็วเปลี่ยน allelic และการบ่มการแสดงออกของ
พลาสมิดและขยายชุดเครื่องมือทางพันธุกรรมที่มีอยู่สำหรับการศึกษาของเชื้อ S. aureus

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

เชื้อ Staphylococcus aureus เป็นหนึ่งในความสำเร็จมากที่สุดของแบคทีเรียเชื้อโรค harboring ละครมากมาย
ปัจจัยที่ก่อให้เกิดความรุนแรงในอาร์เซนอล เช่น การจัดการทางพันธุกรรมของ S . aureus
โครโมโซมดีเอ็นเอเป็นเครื่องมือสำคัญในการศึกษายีนที่เกี่ยวข้องกับโรคและ
อยู่รอดในโฮสต์ รายงานว่า ก่อนหน้านี้เวกเตอร์ตรา allelic สำหรับ S . aureus คือรับส่ง
เวกเตอร์ที่สามารถขยายพันธุ์ใน Escherichia coli ดังนั้น
ตกแต่งพันธุกรรมมาตรฐานสามารถดําเนินการ ที่สุดของเวกเตอร์ที่ใช้ในปัจจุบันมีความไวต่ออุณหภูมิ
replicon ( pe194ts ) ที่ถูกพัฒนามาเพื่อใช้ใน Bacillus subtilis . ที่นี่เราแสดง
ใน S . aureus , thermosensitivity ของเวกเตอร์ pe194ts ไม่สมบูรณ์ที่อุณหภูมิมาตรฐาน nonpermissive
( 42 ° C )การจำลองแบบของพลาสมิดและความบกพร่อง แต่ไม่ยุบ
เรารายงาน rpsl ตามเวกเตอร์ counterselection มีการปรับปรุงความไวต่ออุณหภูมิ
replicon ( pt181 repc3 ) ที่ปิดสนิทสำหรับการจำลองแบบใน S . aureus ที่ nonpermissive
และอุณหภูมิมาตรฐานการเจริญเติบโต ( 37 ° C ) . นอกจากนี้เรายังอธิบายชุดของเวกเตอร์ temperaturesensitive
ที่สามารถ อุณหภูมิในการรักษาที่ได้มาตรฐานเวกเตอร์เหล่านี้ให้เครื่องมือที่มีประสิทธิภาพสูงสำหรับการสร้างอย่างรวดเร็ว
ยาฆ่าแมลงแทนการกลายพันธุ์และการบ่มพลาสการแสดงออก
, และขยายเครื่องมือทางพันธุกรรมชุดของการศึกษาของ S . aureus .