Molecularmethod : DNA extraction, a

Molecularmethod : DNA extraction, amplificationand sequencing.Yeast cells from the pure cultures of the representative isolates were
transferred to 1.5 ml microcentrifuging tubes containing 500 µL MilliQ
water using a 4 mm inoculation rod. The mixture was used as a
template for the PCR after being frozen at−81 °C for about 30 min
and warmed up at 65 °C for 1 h.The fungus-specific universal primers ITS1 (5′-TCCGTAGGTGAACC-TGCGG-3′) and ITS4 (5′-GCATATCAATAAGCGGAGGA-3′) were used to amplify genes encoding the ITS region (White et al., 1990). Ready-to-go-PCR beads (Amersham bioscience, 2003) containing reagents
PuReTaq polymerase, 200 µM dNTP (dATP, dCTP, dGTP, and dTTP),BSA, stabilizers and reaction buffer (10 mM Tris–HCl pH 9.0, 50 mM
KCl, 1.5 mM MgCl2) were used. PCR was performed in a total reaction
volume of 25 µL, which consisted of 2 µL of target DNA solution, 3 µL of
each of the primers and 17 µL of MilliQ water. PCR amplification and
sequencing were performed according to the protocols described in
Asefa et al. (2009). Sequence comparisons were performed using the
basic local alignment search tool (BLAST) in GenBank (www.ncbi.nlm.
nih.gov/blast) after editing and trimming the sequences by BioEdit
sequence alignment editor, version 7.0.0. The yeast isolates were
identified based on a 99–100% similarity criterion. All the sequences of
the present study have been assigned GenBank accession numbers
from FJ573044 to FJ573144.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

molecularmethod เซลล์สกัดดีเอ็นเอ, amplificationand sequencing.yeast จากวัฒนธรรมอันบริสุทธิ์ของสายพันธุ์เป็นตัวแทน
ย้ายไป 1.5 มล. หลอด microcentrifuging มี 500 ไมโครลิตร milliq
น้ำใช้ 4 มม. ก้านฉีดวัคซีน ส่วนผสมที่ถูกนำมาใช้เป็นแม่แบบสำหรับ
pcr หลังจากที่ถูกแช่แข็งที่-81 ° C ประมาณ 30 นาที
และอบอุ่นขึ้นที่ 65 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 1 ชั่วโมงเชื้อราเฉพาะไพรเมอร์สากล ITS1 (5'-tccgtaggtgaacc-tgcgg-3 ') และ its4 (5'-gcatatcaataagcggagga-3') ถูกนำมาใช้ในการขยายยีนการเข้ารหัสภูมิภาค (สีขาวและคณะ. 1990) ลูกปัดพร้อมที่จะไป pcr (Amersham Bioscience, 2003) สารเคมีที่มีส่วนผสมของโพลีเมอ
puretaq 200 ไมโครเมตร dntp (dATP, dctp, dgtp และ dttp) BSA ความคงตัวและการเกิดปฏิกิริยาบัฟเฟอร์ (10 มิลลิเมตร tris-hcl ph 9.0, 50
kcl มม. 15 มม. MgCl2) ถูกนำมาใช้ pcr ได้รับการดำเนินการในการเกิดปฏิกิริยารวม
ปริมาณ 25 ไมโครลิตรซึ่งประกอบไปด้วย 2 ไมโครลิตรของการแก้ปัญหา dna เป้าหมาย 3 ไมโครลิตรของ
แต่ละไพรเมอร์และ 17 ไมโครลิตรของน้ำ milliq ขยาย pcr และ
ลำดับได้ดำเนินการตามโปรโตคอลที่อธิบายไว้ใน
Asefa ตอัล (2009) การเปรียบเทียบลำดับถูกดำเนินการโดยใช้พื้นฐาน
เครื่องมือในการค้นหาการจัดตำแหน่งท้องถิ่น (ระเบิด) ใน genbank (www.ncbinlm.
nih.gov / ระเบิด) หลังจากแก้ไขและการตัดแต่งลำดับโดยบรรณ​​าธิการ bioedit
จัดเรียงลำดับรุ่น 7.0.0 เชื้อยีสต์ถูก
ระบุขึ้นอยู่กับเกณฑ์ความคล้ายคลึงกัน 99-100% ลำดับทั้งหมดของ
การศึกษานี้ได้รับการกำหนดตัวเลข genbank เข้า
จาก fj573044 จะ fj573144.

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

Molecularmethod: การสกัดดีเอ็นเอ ลำดับ amplificationandเซลล์ยีสต์จากวัฒนธรรมบริสุทธิ์ของ isolates พนักงานถูก
โอนไป 1.5 ml microcentrifuging ท่อ µL มี 500 MilliQ
น้ำใช้เป็นร็อด inoculation มม. 4 ใช้เป็นส่วนผสม
แม่ PCR หลังจากถูกแช่แข็ง at−81 ° C ประมาณ 30 นาทีสำหรับ
และ warmed ขึ้นที่ 65 ° C สำหรับ 1 hไพรเมอร์ที่เชื้อราเฉพาะสากล ITS1 (5′-TCCGTAGGTGAACC-TGCGG-3′) และ ITS4 (5′ GCATATCAATAAGCGGAGGA 3′) ใช้ขยายยีนของภูมิภาค (สีขาวและ al., 1990) การเข้ารหัส ลูกปัดพร้อมไปไป-PCR (ซื้อ Amersham, 2003) ประกอบด้วย reagents
พอลิเม PuReTaq อเรส 200 dNTP µM (dATP, dCTP, dGTP และ dTTP), บีเอสเอ stabilizers และบัฟเฟอร์ปฏิกิริยา (10 mM Tris–HCl pH 9.0, 50 mM
KCl, 15 มม. MgCl2) ใช้ ทำ PCR ในปฏิกิริยารวม
ปริมาณ 25 µL ซึ่งประกอบด้วย 2 µL ของดีเอ็นเอเป้าหมาย µL 3 ของ
ของไพรเมอร์ที่และ µL 17 น้ำ MilliQ ขยาย PCR และ
ดำเนินตามโพรโทคอลที่ระบุไว้ในลำดับ
Asefa et al. (2009) ดำเนินการเปรียบเทียบลำดับใช้การ
ตำแหน่งพื้นฐานท้องถิ่นค้นหาเครื่องมือ (ระเบิด) ใน GenBank (www.ncbinlm.
nih.gov/blast) หลังจากแก้ไข และตัดแต่งลำดับ โดย BioEdit
ลำดับตำแหน่งแก้ไข รุ่น 7.0.0 Isolates ยีสต์ได้
ระบุตามเกณฑ์คล้าย% 99–100 ลำดับทั้งหมดของ
การศึกษาปัจจุบันได้รับการกำหนดเลขทะเบียน GenBank
จาก FJ573044 เพื่อ FJ573144.

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

molecularmethod สกัดดีเอ็นเอแล้วค่อย amplificationand .เซลล์ยีสต์จากวัฒนธรรมอันบริสุทธิ์ของตัวแทนท้องถิ่นแยกเป็น
ซึ่งจะช่วยจะพาท่านไปส่งถึงยัง 1.5 ท่อ microcentrifuging มล.ประกอบด้วย 500 μ L milliq
น้ำโดยใช้ไม้ปลูกฝี 4 มม. การผสมผสานที่ได้เคยถูกใช้เป็นเทมเพลตสำหรับ
pcr หลังจากที่มีการแช่แข็งที่ - 81 ° C ประมาณ 30 นาที
และอุ่นขึ้นที่ 65 ° C สำหรับ 1การใส่เห็ดหูหนู - เฉพาะ Universal primers ของ 1 ( 5 ' - tccgtaggtgaacc - tgcgg - 3 ')และ 4 ( 5 ' - gcatatcaataagcggagga - 3 ')ที่ได้ถูกนำมาใช้ในการเพิ่มการเข้ารหัสของยีน ภูมิภาค (สีขาว et al . 1990 ) พร้อม - GO - pcr ลูกปัด( amersham bioscience , 2003 )ประกอบด้วย reagents
puretaq polymerase , 200 μ m dntp ( datp , dctp , dgtp ,และ dttp ), BSA ,โค้งงอและปฏิกิริยา Buffer ( 10 มม.ผลิตไฟฟ้าราชบุรีโฮลดิ้งจำกัด - HCL / ph 9.0 , 50 มม.
kcl , 1 .5 มม. mgcl 2 )ได้ถูกนำมาใช้ pcr ได้ดำเนินการทั้งหมดในการตอบสนอง
ซึ่งจะช่วยลดระดับเสียงของ 25 μ L ซึ่งประกอบไปด้วย 2 μ L ของโซลูชันดีเอ็นเอเป้าหมาย 3 μ L ของ
ซึ่งจะช่วยให้แต่ละคนของ primers และ 17 μ L ของน้ำ milliq pcr
ซึ่งจะช่วยการขยายสัญญาณเสียงและการจัดลำดับนั้นดำเนินการตามโปรโตคอลที่ได้อธิบายไว้ใน
asefa et al . ( 2009 ) การเปรียบเทียบตามลำดับนั้นดำเนินการโดยใช้เครื่องมือการค้นหา
ขั้นพื้นฐานในท้องถิ่นการปรับแนว(ระเบิด)ในเลี้ยงดู( www . ncbiNLM .
nih.gov/blast) หลังจากการแก้ไขและการกันขนลำดับโดย bioedit
ซึ่งจะช่วยแก้ไขการจัดเรียงตามลำดับรุ่น 7.0.0 ยีสต์ที่แยกเป็น
ซึ่งจะช่วยระบุว่าตามที่ 99-100% อย่างเดียวกันเกณฑ์ ซีเควนซ์ทั้งหมดของการศึกษาปัจจุบัน
ซึ่งจะช่วยให้มีการกำหนดตัวเลข ภาค ยานุวัติเลี้ยงดู
จากไหม้ FJ 573044 เพื่อ fj573144 .