2.4. Extraction and assay of peptid

2.4. Extraction and assay of peptidase activity
Assay of peptidase activitywas performed based on the method
of Nieri et al. (1998). Petals were homogenized in 3mL of ice-cold
extraction buffer (50mmolL.1 Tris.HCl, pH 7.4), whereas 5mL of
extraction buffer was added for columns. The homogenates were
centrifuged at 10,000~g for 10min at 4 .C and the supernatant
was collected and kept at .70 .C until peptidase assay. Duplicates
of each sample in 1.5-mL microcentrifuge tubes containing 400L
incubation buffer (50mmolL.1 Na-acetate, pH5.0 with 0.5% azocasein,
from Fluka), and 200L crude extractwere used for the assay.
Preliminarymeasurements at various pHs showed that pH 5.0 was
close to optimal in the present assay. All sample tubes were incubated
at 37 .C for 24 h. Reactions were stopped by adding 100L
of 50% TCA to sample tubes. Sample and reference tubes were then
incubated on ice for 1 h and centrifuged at 10,000~g for 3min at
4 .C. The supernatantswere alkalinized by adding 100L of 10mol
L.1 NaOH and absorbance was then measured at 492 nm. Peptidase
activity was defined using arbitrary units; one unit is equal to
a change of 0.01 absorbance units per hour at 492 nm.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.4 การสกัดและวิเคราะห์กิจกรรม peptidaseวิเคราะห์ของ activitywas peptidase ที่ดำเนินตามวิธีการของ Nieri et al. (1998) กลีบมี homogenized เป็นกลุ่มใน 3mL ของฉ่ำแยกบัฟเฟอร์ (50mmolL.1 Tris.HCl ค่า pH 7.4), ในขณะที่ 5mL ของแยกบัฟเฟอร์ถูกเพิ่มสำหรับคอลัมน์ ได้ homogenatescentrifuged ที่ 10000 ~ g ใน 10 นาทีที่ 4C และ supernatantรวบรวม และเก็บไว้ที่.70C จนกระทั่งทดสอบ peptidase ซ้ำของแต่ละอย่างในท่อ microcentrifuge 1.5 mL ประกอบด้วย 400 ลิตรคณะทันตแพทยศาสตร์บัฟเฟอร์ (50mmolL.1 นา-acetate, pH5.0 กับ azocasein 0.5%จาก Fluka), และ extractwere น้ำมันขนาด 200 ลิตรใช้สำหรับการวิเคราะห์Preliminarymeasurements ที่ pHs ต่าง ๆ พบว่า ที่ค่า pH 5.0 มีปิดให้เหมาะสมที่สุดในวิเคราะห์ปัจจุบัน ท่อตัวอย่างทั้งหมดถูก incubatedที่ 37C สำหรับปฏิกิริยา 24 h. ถูกหยุด โดยเพิ่ม 100 L50% TCA อย่างท่อ หลอดตัวอย่างและอ้างอิงได้แล้วincubated บนน้ำแข็งสำหรับ 1 h และ centrifuged ที่ 10000 ~ g สำหรับ 3 นาทีที่4C. การ supernatantswere alkalinized โดยการเพิ่ม 100 L 10molL.1 NaOH และ absorbance แล้ววัดที่ 492 nm Peptidaseกิจกรรมถูกกำหนดโดยใช้หน่วยที่กำหนด หนึ่งหน่วยจะเท่ากับการเปลี่ยนแปลงของ 0.01 absorbance หน่วยต่อชั่วโมงที่ 492 nm

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.4 การสกัดและการทดสอบของกิจกรรม peptidase
Assay ของ activitywas peptidase ดำเนินการตามวิธีการ
ของ Nieri และคณะ (1998) กลีบถูกหดหายใน 3 mL ของเย็น
บัฟเฟอร์สกัด (50mmolL.1 Tris.HCl ค่า pH 7.4) ในขณะที่ 5 มล
สารสกัดที่ถูกเพิ่มเข้ามาสำหรับคอลัมน์ homogenates ถูก
หมุนเหวี่ยงที่ 10,000 ?? ~ กรัมสำหรับ 10 นาทีที่ 4 และ .C ใส
ถูกเก็บรวบรวมและเก็บไว้ที่ 0.70 .C จนทดสอบ peptidase รายการที่ซ้ำกัน
ของกลุ่มตัวอย่าง 1.5 มิลลิลิตรหลอดไมโครแต่ละที่มี 400? L
บัฟเฟอร์บ่ม (50mmolL.1 นาอะซิเตท, pH5.0 กับ azocasein 0.5%
จาก Fluka) และ 200 หรือไม่? น้ำมันดิบ L extractwere ใช้สำหรับการทดสอบ.
Preliminarymeasurements ที่ต่างๆ pH ของการศึกษาพบว่าค่า pH 5.0 เป็น
ใกล้เคียงกับที่ดีที่สุดในการทดสอบในปัจจุบัน หลอดตัวอย่างทั้งหมดถูกบ่ม
ที่อุณหภูมิ 37 .C เป็นเวลา 24 ชั่วโมง ปฏิกิริยาถูกหยุดการทำงานโดยการเพิ่ม 100 L
ของ TCA 50% ถึงหลอดตัวอย่าง ตัวอย่างและท่ออ้างอิงถูกแล้ว
บ่มบนน้ำแข็งเป็นเวลา 1 ชั่วโมงและหมุนเหวี่ยงที่ 10,000 ?? ~ กรัม 3min ที่
4 .C supernatantswere ด่างโดยการเพิ่ม 100 ลิตร 10mol
L.1 NaOH และการดูดกลืนแสงวัดแล้วที่ 492 นาโนเมตร peptidase
กิจกรรมที่ถูกกำหนดโดยใช้หน่วยพล; หนึ่งหน่วยจะเท่ากับ
การเปลี่ยนแปลงของการดูดกลืนแสง 0.01 หน่วยต่อชั่วโมงที่ 492 นาโนเมตร

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.4 . การสกัดและวิเคราะห์กิจกรรมของลูกเต้า
assay ของลูกเต้า activitywas ดำเนินการตามวิธี
ของ nieri et al . ( 1998 ) กลีบดอกบดในม. เย็น
การสกัดบัฟเฟอร์ ( 50mmoll 1 tris.hcl pH 7.4 ) ส่วน กของ
บัฟเฟอร์สกัด เพิ่มคอลัมน์ ซึ่งเป็นระดับ homogenates
ที่ 10 , 000 ? ~ G สำหรับวันที่ 4 องศาเซลเซียส และสูง
ถูกรวบรวมและเก็บไว้ที่ . 70C จนกระทั่งลูกเต้า ตามลำดับ ซ้ำ
ของแต่ละตัวอย่างในหลอดไมโครเซนตริฟิวจ์ 1.5-ml ที่มี 400  L
บ่มบัฟเฟอร์ ( 50mmoll 1 นา อะซีเตท ph5.0 0.5 azocasein
, จาก fluka ) และ 200  ผมดิบ extractwere ใช้ ( . . .
preliminarymeasurements ที่ PHS ต่างๆพบว่า pH 5.0 คือ
ใกล้ที่สุดใน ( ปัจจุบัน หลอดตัวอย่างทั้งหมดถูกบ่ม
ที่ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 24 ชั่วโมงปฏิกิริยาที่ถูกหยุดโดยการเพิ่ม 100  L
50 % TCA ตัวอย่างหลอด ตัวอย่างการอ้างอิงและหลอดแล้ว
บ่มแข็งเป็นเวลา 1 ชั่วโมง ไฟฟ้า 10 , 000 ? ~ g ที่ 3min
4 C supernatantswere alkalinized โดยเพิ่ม 100  l 10mol
l.1 NaOH และการดูดกลืนแสงก็วัดที่ 492 นาโนเมตร กิจกรรมลูกเต้า
ถูกกำหนดไว้โดยใช้หน่วยหนึ่ง หนึ่งหน่วยเท่ากับ
เปลี่ยน 0อย่างมีนัยสำคัญทางสถิติที่ระดับ . 01 ค่าหน่วยต่อชั่วโมงที่ 492 นาโนเมตร