In the multiplex PCR system, prefer

In the multiplex PCR system, preferential amplification
of one target sequence over another frequently occurs,
which could lead to uneven amplification products. In order to amplify all the specific PCR products with equal
efficiency, the concentration of individual primer pairs
was optimized. Primer concentration was increased when
intensity of the corresponding band was too low or absent,
and decreased when intensity of the bands was too high.
When the multiplex reaction is performed for the first
time, it is useful to add the primers in equimolar amounts.
The results will suggest how the individual primer concentration
and other parameters need to be changed. The
concentrations of three primer pairs in different proportions
were examined in this study. When the concentration
of primer pairs of E. coli, A. hydrophila and
Y. enterocolitica was 0.166 μM of each of the primers respectively,
primer specific for uid R gene of E. coli
excessively amplified while there was no amplification
for primer specific for A. hydrophila and Y. enterocolitica
(Figure 3 a). So the concentration of primers specific for
A. hydrophila and Y. enterocolitica was increased to
0.333 μM, keeping the concentration of the primer specific
for E. coli constant. Amplification of species specific
for 16SrRNA gene of Y. enterocolitica was significantly
favoured. Under the same primer concentration there was
no amplification for A. hydrophila (Figure 3 b). Hence the
concentration of primer specific for A. hydrophila was
increased to 0.416 μM. The experiment demonstrated that
the optimal concentration of primer pairs of E. coli,
Y. enterocolitica and A. hydrophila was 0.166, 0.333 and
0.416 μM respectively (Figure 3 c)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ในระบบ multiplex PCR ขยายสิทธิพิเศษของเป้าหมายลำดับหนึ่งมากกว่าอีกบ่อยครั้งเกิดขึ้นซึ่งอาจนำไปสู่การขยายผลิตภัณฑ์ที่ไม่สม่ำเสมอ เพื่อขยายทุกผลิตภัณฑ์ PCR ที่เฉพาะเจาะจงกับเท่ากับประสิทธิภาพความเข้มข้นของคู่ไพรเมอร์บุคคลที่ถูกปรับให้เหมาะสม ความเข้มข้นของไพรเมอร์เพิ่มขึ้นเมื่อความเข้มของวงดนตรีที่สอดคล้องกันในระดับต่ำหรือขาดเกินไปและลดลงเมื่อความเข้มของวงดนตรีที่สูงเกินไป. เมื่อปฏิกิริยา multiplex จะดำเนินการเป็นครั้งแรกเวลาที่จะเป็นประโยชน์ในการเพิ่มไพรเมอร์ในปริมาณequimolar. ผลที่ได้จะแสดงให้เห็นว่ามีความเข้มข้นไพรเมอร์ของแต่ละบุคคลและพารามิเตอร์อื่น ๆ ต้องมีการเปลี่ยนแปลง ความเข้มข้นของสามคู่ไพรเมอร์ในสัดส่วนที่แตกต่างกันมีการตรวจสอบในการศึกษานี้ เมื่อความเข้มข้นของคู่ไพรเมอร์ของเชื้อ E. coli, A. hydrophila และวาย enterocolitica เป็น 0.166 ไมครอนของแต่ละไพรเมอร์ตามลำดับไพรเมอร์ที่เฉพาะเจาะจงสำหรับยีนR uid ของเชื้อ E. coli ขยายมากเกินไปในขณะที่มีการขยายไม่มีสำหรับไพรเมอร์ที่เฉพาะเจาะจงสำหรับ hydrophila และเอวาย enterocolitica (รูปที่ 3) ดังนั้นความเข้มข้นของไพรเมอร์ที่เฉพาะเจาะจงสำหรับเอ hydrophila และ Y. enterocolitica เพิ่มขึ้นเป็น0.333 ไมครอนทำให้ความเข้มข้นของไพรเมอร์ที่เฉพาะเจาะจงสำหรับเชื้อE. coli อย่างต่อเนื่อง การขยายของสายพันธุ์ที่เฉพาะเจาะจงสำหรับยีน 16SrRNA ของ Y. enterocolitica อย่างมีนัยสำคัญได้รับการสนับสนุน ภายใต้ความเข้มข้นเดียวกันไพรเมอร์มีการขยายไม่ A. hydrophila (รูปที่ 3 ข) ดังนั้นความเข้มข้นของไพรเมอร์ที่เฉพาะเจาะจงสำหรับ hydrophila เอได้เพิ่มขึ้นเป็น0.416 ไมครอน การทดลองแสดงให้เห็นว่ามีความเข้มข้นที่เหมาะสมของคู่ไพรเมอร์ของเชื้อ E. coli, วาย enterocolitica และ A. hydrophila เป็น 0.166, 0.333 และ0.416 ตามลำดับไมครอน (รูปที่ 3 ค)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ในระบบเทคนิค multoplex PCR พิเศษ (
1 เป้าหมายลำดับกันบ่อยขึ้น ซึ่งจะนำไปสู่ผลิตภัณฑ์
ขยายไม่เท่ากัน เพื่อขยายทั้งหมด โดยเฉพาะผลิตภัณฑ์ที่มีประสิทธิภาพเท่าเทียมกัน
, ความเข้มข้นของแต่ละคู่
เป็นไพรเมอร์ที่ปรับให้เหมาะสม ไพรเมอร์มีค่าเพิ่มขึ้นเมื่อความเข้มข้นของดนตรีที่สอดคล้องกัน
ต่ำเกินไป หรือขาด
และมีค่าลดลงเมื่อความเข้มของวงสูงเกินไป .
เมื่อปฏิกิริยา multiplex จะดําเนินการครั้งแรก
มันเป็นประโยชน์ในการเพิ่มปริมาณดีเอ็นเอในๆ .
ผลลัพธ์จะแสดงให้เห็นว่าแต่ละ primer ความเข้มข้น
และพารามิเตอร์อื่น ๆต้องเปลี่ยนไป
ความเข้มข้นของทั้งสามคู่ไพรเมอร์ในสัดส่วนที่แตกต่างกัน
3 ? ในการศึกษานี้ เมื่อความเข้มข้น
คู่ไพรเมอร์ของ E . coli , A . hydrophila และ
Y enterocolitica คือ 0.166 μ M ของแต่ละชนิดตามลำดับ
รองพื้นเฉพาะยีน R uid ของ E . coli
มากเกินไปในปัจจุบัน ในขณะที่ไม่มีการขยาย
สำหรับรองพื้นเฉพาะ A . hydrophila และ y enterocolitica
( รูปที่ 3 ) ดังนั้นความเข้มข้นของ A . hydrophila โดยเฉพาะ

Y enterocolitica และเพิ่มขึ้นเป็น 0.333 μ Mการรักษาความเข้มข้นของไพรเมอร์จำเพาะ
ใน E . coli ที่คงที่ แบบเฉพาะเจาะจงชนิดของยีน 16srrna

Y enterocolitica มีความโปรดปราน ได้ที่ความเข้มข้นสีเดียวกันมีไม่สำหรับ A . hydrophila (
( รูปที่ 3 B ) ดังนั้นความเข้มข้นของไพรเมอร์จำเพาะสำหรับ

. hydrophila ได้เพิ่มขึ้น 0.416 μเมตร การทดลองแสดงให้เห็นว่า
ความเข้มข้นที่เหมาะสมของคู่ไพรเมอร์ของ E . coli , A . hydrophila เป็น enterocolitica
Y และ 0.166 , 0.333 และ
0.416 μเมตร ตามลำดับ ( รูปที่ 3 C )