to shipping to the International Trichinella Reference Centre
in Rome, Italy.
Pooled sera from an additional six non-infected farmed
Nile crocodiles were used to generate anti-crocodile sera.
Four month old New Zealand rabbits were immunized with
50 g or 100 g of crocodile sera in the presence of Freund’s
complete adjuvant. In the rabbits, the immune response to
the crocodile sera was evaluated by immunoelectrophoresis.
The rabbit serum which showed the highest number
of precipitation arcs by immunoelectrophoresis was used
to produce the anti-crocodile IgG which was obtained
after treatment of the rabbit serum with the caprilic acid
(Steinbuch and Audran, 1969). The IgG was then conjugated
with horseradish peroxidase (Nakane and Kawaoi,
1974). Conjugate specificity was determined by running
a direct ELISA using serum samples from different animal
species (crocodile, pig, horse, and rabbit) to coat microtiter
ELISA plates. Only crocodile sera reacted with the rabbit
anti-crocodile IgG peroxidase labelled (R-aC-IgG-PO).
The ELISA was developed according to a published protocol
(Dawo and Mohan, 2007) with some modifications.
Since Trichinella-positive reference crocodile sera were
not available, the ELISA was preliminary set up with sera
from four crocodiles experimentally infected with T. zimbabwensis
(codes T1–T4) and four other crocodiles that
were Trichinella free (codes C1–C4). Briefly, plates were
coated with 5 g/mL of ESA in 0.1 M carbonate buffer at
pH 9.6, incubated at 37 ◦C for 60 min, and then rinsed
with 0.05% Tween 20 in phosphate buffered saline (PBS)
pH 7.2, for 3×
5 min. Identical washing procedures were
performed as required throughout the ELISA. As blocking
solution, PBS with 1% BSA and 0.05% Tween 20, was
used. Crocodile sera were diluted 1/50 in the blocking
ที่จะจัดส่งไปยังต่างประเทศชีพศูนย์อ้างอิง
ในกรุงโรม, อิตาลี.
ซีรั่มจาก Pooled เพิ่มเติมหกที่ไม่ติดเชื้อเพาะเลี้ยง
จระเข้แม่น้ำไนล์ถูกนำมาใช้ในการสร้างซีรั่มต่อต้านจระเข้.
สี่เดือนกระต่ายเก่านิวซีแลนด์ได้รับวัคซีนที่มี
50 กรัมหรือ 100 กรัม ซีรั่มของจระเข้ในการปรากฏตัวของ Freund
เสริมที่สมบูรณ์ ในกระต่าย, การตอบสนองภูมิคุ้มกันให้
ซีรั่มจระเข้ได้รับการประเมินโดย Immunoelectrophoresis.
ซีรั่มกระต่ายซึ่งแสดงให้เห็นจำนวนมากที่สุด
ของโค้งฝนโดย Immunoelectrophoresis ถูกนำมาใช้
ในการผลิต IgG ป้องกันจระเข้ที่ได้รับ
หลังการรักษาของซีรั่มกระต่ายกับ caprilic กรด
(Steinbuch และ Audran 1969) IgG ถูกผันแล้ว
กับพืชชนิดหนึ่ง peroxidase (Nakane และ Kawaoi,
1974) ความจำเพาะผันถูกกำหนดโดยการทำงาน
วิธี ELISA โดยตรงโดยใช้ตัวอย่างซีรั่มจากสัตว์ที่แตกต่าง
สปีชีส์ (จระเข้, หมู, ม้าและกระต่าย) เพื่อขนไมโคร
แผ่นวิธี ELISA ซีรั่มจระเข้เพียงปฏิกิริยากับกระต่าย
ป้องกันจระเข้ที่มีข้อความ peroxidase IgG (R-AC-IgG-PO).
วิธี ELISA ได้รับการพัฒนาตามโปรโตคอลการตีพิมพ์
(Dawo และโมฮัน 2007) ด้วยการปรับเปลี่ยนบางอย่าง.
ตั้งแต่ซีรั่มจระเข้อ้างอิงชีพบวก ก็
ไม่สามารถใช้วิธี ELISA เป็นชุดเบื้องต้นขึ้นกับซีรั่ม
จากสี่จระเข้ติดเชื้อทดลองกับ T. zimbabwensis
(รหัส T1-T4) และสี่จระเข้อื่น ๆ ที่
เป็นฟรีชีพ (รหัส C1-C4) สั้น ๆ , จานถูก
เคลือบด้วย 5? g / ml ของอีเอสเอใน 0.1 M บัฟเฟอร์คาร์บอเนตที่
พีเอช 9.6, บ่มที่อุณหภูมิ 37 ◦C 60 นาทีและล้างแล้ว
กับ 0.05% Tween 20 ในฟอสเฟตบัฟเฟอร์น้ำเกลือ (PBS)
ค่า pH 7.2 สำหรับ 3 ×
5 นาที ขั้นตอนการซักผ้าที่เหมือนถูก
ดำเนินการตามที่กำหนดตลอด ELISA ในขณะที่การปิดกั้น
การแก้ปัญหาพีบีเอสกับบีเอสเอ 1% และ 0.05% Tween 20 ถูก
นำมาใช้ ซีรั่มจระเข้ถูกเจือจาง 1/50 ในการสกัดกั้น
การแปล กรุณารอสักครู่..
เพื่อจัดส่งไปยังประเทศทริคิเนลลาอ้างอิงศูนย์
ในกรุงโรม ประเทศอิตาลี รวม ( เพิ่มอีกหกไม่ติดเชื้อ farmed
ไนล์จระเข้ถูกใช้เพื่อสร้างค่าป้องกันจระเข้ .
4 เดือนเก่านิวซีแลนด์กระต่ายที่ฉีดกระตุ้นด้วย
50 กรัม หรือ 100 กรัม ( ของจระเข้ในการแสดงตนของ Freund เป็น
สมบูรณ์ ผู้ช่วย ในการตอบสนองภูมิคุ้มกัน
กระต่ายจระเข้ ( ประเมินโดย immunoelectrophoresis .
กระต่ายเซรั่ม ซึ่งมีจำนวนมากที่สุด
ฝนโค้งโดย immunoelectrophoresis ใช้
ผลิต IgG anti จระเข้ซึ่งได้รับ
หลังจากรักษากระต่ายเซรั่มด้วย
caprilic ( กรดและ steinbuch audran , 1969 ) และ IgG conjugated
กับ horseradish peroxidase แล้ว ( nakane และ kawaoi
, 1974 )คือ พิจารณาโดยเฉพาะการวิ่ง
โดยตรง ) ใช้ตัวอย่างซีรั่มจากสัตว์
สายพันธุ์ที่แตกต่างกัน ( จระเข้ สุกร ม้า และกระต่าย ) เคลือบไมโคร
3 แผ่น แต่จระเข้เซราทำปฏิกิริยากับกระต่าย
มีจระเข้ IgG anti labelled ( r-ac-igg-po )
) พัฒนาตามเผยแพร่พิธีสาร
( dawo และโม , 2007 ) กับการปรับเปลี่ยนบางอย่าง .
เนื่องจากจระเข้เป็นทริคิเนลลาบวกอ้างอิง (
ไม่สามารถใช้ได้ , ) เบื้องต้นการตั้งค่ากับเซร่า
4 จระเข้นี้ติดเชื้อ ต. zimbabwensis
( รหัส T1 ( T4 ) และสี่จระเข้อื่น
เป็นทริคิเนลลาฟรี ( รหัส C1 - C4 ) สั้น ๆ , แผ่นเคลือบด้วย )
5 g / ml ของ ESA ใน 0.1 M คาร์บอเนตบัฟเฟอร์ที่
pH 9.6 บ่มที่ 37 ◦องศาเซลเซียสเป็นเวลา 60 นาที แล้ว ล้าง
กับ 0.05 tween 20 ในฟอสเฟตบัฟเฟอร์ pH 7.2 เกลือ ( PBS )
,
3 × 5 นาที เหมือนขั้นตอนการซักผ้าถูก
ดำเนินการตามที่ต้องการตลอดวิธีอีไลซ่า เป็นบล็อก
สารละลาย PBS กับ BSA 1% และ 0.05 เปอร์เซ็นต์ Tween 20 ,
ใช้ . เซราจระเข้ลด 1 / 50 ในบล็อค
การแปล กรุณารอสักครู่..