Amplification of the 16S rDNA gene

Amplification of the 16S rDNA gene (1500 bp) was performed using specific primers for Lactobacillus and Lactococcus genus (F: 50- AGAGTTTGATCMTGGCTCAG-30 and R: 50 -TACCTTGTTAGGACTT- CACC-30). The PCR program cycle was set as follows: denaturation for 4 min at 95 C, 32cycles for 5 min (which consisted of 94 C for 1min,58Cfor1min,and72Cfor95s),andafinalextensionat 72 C for 5 min. Amplicons were electrophoresed on 1% agarose gel. The amplified fragment was then purified from the gel using a QIAquick PCR purification kit (QIAGEN, Hilden, Germany). Purified 16S rDNA fragments were sequenced by Macrogene Company (Korean sequencing company). Each sequence was blasted with deposited sequences in GenBank, NCBI site (http://blast.ncbi.nlm. nih.gov/Blast.cgi) to molecularly identify each strain

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ขยายการ 16S rDNA ยีน (1500 bp) ที่ดำเนินการโดยใช้ไพรเมอร์เฉพาะสำหรับสกุลแลคโตบาซิลลัสและ Lactococcus (F: 50-AGAGTTTGATCMTGGCTCAG-30 และ R: 50 - TACCTTGTTAGGACTT-CACC-30) วงจรโปรแกรม PCR ถูกตั้งค่าเป็นดังนี้: denaturation ใน 4 นาทีที่ 95 C, 32cycles สำหรับ 5 นาที (ซึ่งประกอบด้วย C 94 ใน 1 นาที 58 Cfor1min, and72 Cfor95s), andafinalextensionat 72 C สำหรับ 5 นาที Amplicons มี electrophoresed บน 1% agarose เจ ส่วนเอาต์ได้แล้วบริสุทธิ์จากเจลใช้ชุดฟอก QIAquick PCR (QIAGEN, Hilden เยอรมนี) บางส่วนของบริสุทธิ์ 16S rDNA ถูกเรียงลำดับ โดย บริษัท Macrogene (บริษัทลำดับที่เกาหลี) แต่ละลำดับมีเสียหายกับลำดับนำฝากใน GenBank, NCBI ไซต์ (http://blast.ncbi.nlm. nih.gov/Blast.cgi) molecularly ระบุต้องใช้แต่ละ

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การขยายของยีน 16S rDNA (1500 bp) ได​​้รับการดำเนินการโดยใช้ไพรเมอร์ที่เฉพาะเจาะจงสำหรับแลคโตบาซิลลัสและสกุล Lactococcus (F: 50 AGAGTTTGATCMTGGCTCAG-30 และ R: 50 -TACCTTGTTAGGACTT- CACC-30) วงจรโปรแกรม PCR ถูกกำหนดดังต่อไปนี้: denaturation 4 นาทีที่ 95 ซี 32cycles เวลา 5 นาที (ซึ่งประกอบไปด้วย 94 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 1 นาที 58 Cfor1min, and72 Cfor95s?) andafinalextensionat 72 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 5 นาที? amplicons ถูก electrophoresed เมื่อวันที่ 1% agarose เจล ส่วนขยายบริสุทธิ์แล้วจากเจลโดยใช้ชุดฟอก PCR QIAquick (QIAGEN, ฮิลเดน, เยอรมนี) ชิ้นส่วน 16S rDNA บริสุทธิ์มีลำดับขั้นตอนโดย Macrogene บริษัท (บริษัท ลำดับเกาหลี) ลำดับที่แต่ละคนได้ทำลายด้วยลำดับฝากใน GenBank, เว็บไซต์ NCBI (http:. //blast.ncbi.nlm nih.gov/Blast.cgi) เพื่อระบุโมเลกุลแต่ละสายพันธุ์

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การเพิ่มปริมาณของยีน 16S rDNA ( 1500 BP ) คือการใช้ไพรเมอร์ที่จำเพาะสำหรับแลคโตบาซิลลัส และแลคโตค คัสสกุล ( F : 50 - agagtttgatcmtggctcag-30 และ R : 50 - taccttgttaggactt - cacc-30 ) ร่วมโปรแกรมวงจรไว้ดังนี้ ( สำหรับ 4 นาทีที่ 95  C 32cycles เป็นเวลา 5 นาที ( ซึ่งจำนวน 94  C 1 นาที , 58  cfor1min and72  , cfor95s ) andafinalextensionat 72  องศาเซลเซียสเป็นเวลา 5 นาทีamplicons เป็น electrophoresed บน 1% เจล . ส่วน amplified fragment ก็บริสุทธิ์จากเจลใช้ qiaquick PCR ฟอก Kit ( QIAGEN Hilden , เยอรมนี ) บริสุทธิ์ 16S rDNA ชิ้นส่วนถูกลำดับ โดยบริษัท macrogene ( บริษัทของเกาหลี ) ถูกระเบิดด้วยลำดับแต่ละลำดับได้พบ ncbi , เว็บไซต์ ( http://blast.ncbi.nlm . nih.gov/blast .CGI ) ประกอบด้วยโมเลกุลระบุแต่ละสายพันธุ์