abacterial inactivation correspondi

a
bacterial inactivation corresponding to ca. 5 to 6 log reductions
(from ~9 initial logs), ATCC 6538 strain was pressurized at 600 MPa
for 30 min at 20
C and the strains 2065 MA and 2153 MA were
pressurized at 600 MPa for 15 min at 20
C in a hydrostatic press
(High pressure system U33, Institute of High Pressure Physics,
Warsaw, Poland). The pressurization liquid was a mixture of 60%
water and 40% propylene glycol (DOWCAL™, Dow). With such a
procedure, it was intended to obtain a sizeable number of colonies,
which were used to study the possible development of resistance
and bacterial recovery. Non-pressurized controls were also
included in the experiments.
2.3. Enumeration of viable cells
For each sub-sample treated and for untreated samples 10-fold
serial dilutions (101
e108
) were made in sterile PBS. One milliliter
of each dilution was plated on plate count agar medium (PCA,
LIOFILCHEM, Italy) in duplicate. The plates were incubated at 37
C
for 48 h and the number of colonies was counted for each sample.
The number of survivors was reported as log CFU mL1
. The
reduction efficiency (RE) of high pressure inactivation of the
pathogen strains was calculated using the equation RE ¼ log
N0 log N, where N0 represents the average number of viable cells
in the untreated suspensions and N the number of viable cells in the
pressurized suspensions.
2.4. HPP resistance assays
To verify the development of resistance to HPP, a new set of
toxigenic and non-toxigenic bacterial cultures was produced from
an isolated colony obtained after each cycle of exposure to HPP
treatment. In order to obtain a bacterial inactivation corresponding
to ca. 5 log of reductions, the bacterial suspension was exposed to
HPP in the same conditions of the aforementioned HPP assay. This
allowed to test if the bacteria affected by HPP were able to develop
resistance to HPP. After each cycle, survivor colonies were removed
from PCA and incubated in BHI at 37
C for 22 h at 170 rpm. Nonpressurized
controls were also included in the experiments. This
procedure was repeated for ten consecutive cycles. For each strain,
and for each of the 10 cycles, three independent samples were used
and for each sample three sub-samples were done (n ¼ 9).
2.5. HPP viability recovery assay
In order to evaluate if pressurized cells could recover viability
after HPP treatments, toxigenic and non-toxigenic bacterial suspensions
were subjected to HPP in the conditions described above.
After the initial enumeration (48 h), the plates used to count viable
cells were incubated for 14 days at 37
C and the colonies were recounted
after 5, 8, 11 and 14 days of incubation. This counting
strategy was used after each pressurization cycle and the concentration
of viable bacteria was determined. For each strain, three
independent samples were counted, each one with three subsamples
(n ¼ 9).
2.6. Statistical analysis
HPP inactivation data from the resistance and recovery assays
were statistically analyzed using analysis of variance (ANOVA) and
the post-hoc Tukey test, with the SPSS 20.0 (IBM, New York, USA).
Statistical significance was considered for p < 0.05.
3. Results
3.1. HPP resistance assays
The application of HPP treatment produced reductions in the
counts of the three strains, being the magnitude dependent on each
strain under study (p < 0.05). In each cycle, no significant differences
among the 3 independent samples (ANOVA, p > 0.05) was
observed for the three strains. Though, the efficiency of bacterial
inactivation after the first treatment was almost the same
(p > 0.05), the HPP treatment time was different for the non-
516 I. Baptista et al. / Food Microbiology 46 (2015) 515e520

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

การเชื้อแบคทีเรียยกเลิกการเรียกที่สอดคล้องกับ ca 5 ถึง 6 ระบบลด(จาก ~ 9 เริ่มต้นบันทึก), ต้องใช้ ATCC 6538 ถูกหนีที่แรง 600ใน 30 นาทีที่ 20 C และสายพันธุ์ 2065 MA 2153 MA นำหนีที่แรง 600 สำหรับ 15 นาทีที่ 20 C ในกดหยุดนิ่ง(แรงดันสูงระบบ U33 สถาบันของสูงดันฟิสิกส์วอร์ซอ โปแลนด์) ของเหลว pressurization มีส่วนผสมของ 60%40% และน้ำโพรพิลีน glycol (DOWCAL ™ ดาว) ด้วยเช่นการขั้นตอน สร้างขึ้นเพื่อรับตัวเลขสำหรับผู้พิการของอาณานิคมซึ่งใช้ในการศึกษาการพัฒนาเป็นไปได้ของความต้านทานและกู้คืนแบคทีเรีย ยังควบคุมหนีไม่ได้รวมอยู่ในการทดลอง2.3 การแจงนับของเซลล์ทำงานได้สำหรับแต่ละย่อยตัวอย่างบำบัด และ สำหรับตัวอย่างที่ไม่ถูกรักษา 10-foldประจำ dilutions (101e108) ที่เกิดขึ้นใน PBS กอซ Milliliter หนึ่งของแต่ละการเจือจางถูกเคลือบบนจานนับ agar ปานกลาง (PCALIOFILCHEM อิตาลี) ในซ้ำ แผ่นก็ incubated ที่ 37 C48 h และหมายเลขของอาณานิคมถูกนับในแต่ละตัวอย่างรายงานจำนวนผู้รอดชีวิตเป็นล็อก CFU mL1. ที่ประสิทธิภาพลดลง (RE) ของยกเลิกการเรียกแรงดันสูงของการการศึกษาสายพันธุ์ถูกคำนวณโดยใช้สมการกำลังล็อก¼ล็อก N0 N ที่ N0 แสดงจำนวนค่าเฉลี่ยของเซลล์ทำงานได้ในการบริการไม่ถูกรักษาและ N จำนวนของเซลล์ทำงานได้ในการบริการทางหนี2.4. HPP assays ต้านทานการตรวจสอบการพัฒนาความต้านทานการ HPP ชุดใหม่วัฒนธรรมเชื้อแบคทีเรีย toxigenic และ toxigenic ไม่ได้ผลิตจากโคโลนีที่แยกได้หลังจากแต่ละรอบของการสัมผัสกับ HPPการรักษา การขอรับที่เกี่ยวข้องยกเลิกการเรียกแบคทีเรียca. 5 ล็อกของการลด การระงับแบคทีเรียถูกเปิดHPP ในเงื่อนไขเดียวกันการทดสอบ HPP ดังกล่าว นี้อนุญาตให้ใช้เพื่อทดสอบว่าแบคทีเรียที่ได้รับผลกระทบ โดย HPP สามารถพัฒนาความต้านทานการ HPP หลังจากแต่ละรอบ อาณานิคมผู้รอดชีวิตถูกเอาออกจากสมาคมและ incubated ใน BHI ที่ 37 C สำหรับ h 22 ที่ 170 รอบต่อนาที Nonpressurizedควบคุมยังรวมอยู่ในการทดลอง นี้ขั้นตอนที่ซ้ำสำหรับรอบ 10 ติดต่อกัน สำหรับแต่ละต้องใช้และสำหรับแต่ละรอบ 10 ใช้สามตัวอย่างอิสระและสำหรับตัวอย่างแต่ละ ตัวอย่างย่อยที่สามถูกทำ (n ¼ 9)2.5 ทดสอบการกู้คืนชีวิต HPPการประเมินถ้าหนีเซลล์ฟื้นชีวิตหลังจากรักษา HPP, toxigenic และ toxigenic ไม่ใช่บริการจากแบคทีเรียถูกต้อง HPP ในเงื่อนไขที่อธิบายไว้ข้างต้นหลังจากที่เริ่มต้นการแจงนับ (48 h), แผ่นที่ใช้ในการนับได้เซลล์ถูก incubated 14 วันที่ 37 C และอาณานิคมถูก recountedหลังจาก 5, 8, 11 และ 14 วันของคณะทันตแพทยศาสตร์ นี้นับใช้กลยุทธ์แต่ละรอบ pressurization และความเข้มข้นของแบคทีเรียทำงานได้ถูกกำหนด สำหรับแต่ละต้องใช้ 3ตัวอย่างอิสระนับได้ แต่ละคน ด้วย subsamples สาม(n ¼ 9)2.6. สถิติวิเคราะห์ข้อมูลยกเลิกการเรียก HPP assays ต้านทานและการกู้คืนได้ทางสถิติวิเคราะห์โดยใช้การวิเคราะห์ผลต่างของ (การวิเคราะห์ความแปรปรวน) และการลงรายการบัญชีเฉพาะกิจ Tukey ทดสอบ 20.0 โปรแกรม (IBM นิวยอร์ก สหรัฐอเมริกา)นัยสำคัญทางสถิติได้รับการพิจารณาสำหรับ p < 0.053. ผลลัพธ์3.1. HPP assays ต้านทานใช้รักษา HPP ผลิตลดในการจำนวนสามสายพันธุ์ มีขนาดขึ้นอยู่กับแต่ละสายพันธุ์ใต้ศึกษา (p < 0.05) ในแต่ละรอบ ไม่แตกต่างกันในตัวอย่างอิสระ 3 (การวิเคราะห์ความแปรปรวน p > 0.05) มีสังเกตสำหรับสายพันธุ์สาม ถึงแม้ว่า ประสิทธิภาพของแบคทีเรียยกเลิกการเรียกหลังจากการรักษาครั้งแรกได้เกือบเหมือนกัน(p > 0.05), HPP รักษาเวลาแตกต่างกันสำหรับการใช่516 I. Baptista et al. / จุลชีววิทยาอาหาร 46 515e520 (2015)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ยับยั้งเชื้อแบคทีเรียที่สอดคล้องกับแคลิฟอร์เนีย 5-6 ลดลงเข้าสู่ระบบ
(จาก ~ 9 บันทึกเริ่มต้น), ATCC 6538 สายพันธุ์ที่ได้รับแรงดัน 600 MPa
เป็นเวลา 30 นาทีที่ 20 องศาเซลเซียสและสายพันธุ์ 2065 และ 2153 MA MA ถูก
แรงดัน 600 MPa 15 นาทีที่ 20 องศาเซลเซียสใน กดไฮโดรลิก
(ระบบแรงดันสูง U33, สถาบันฟิสิกส์แรงดันสูง,
วอร์ซอ, โปแลนด์) ของเหลวความดันเป็นส่วนผสม 60%
น้ำ 40% และโพรพิลีนไกลคอล (DOWCAL ™, Dow) ด้วยเช่น
ขั้นตอนมันก็มีจุดมุ่งหมายที่จะได้รับเป็นจำนวนขนาดใหญ่ของอาณานิคม
ที่ถูกนำมาใช้ในการศึกษาการพัฒนาที่เป็นไปได้ของความต้านทาน
และการกู้คืนแบคทีเรีย การควบคุมแรงดันไม่นอกจากนี้ยังได้
รวมอยู่ในการทดลอง.
2.3 การแจงนับของเซลล์ทำงานได้
สำหรับแต่ละย่อยตัวอย่างได้รับการรักษาและสำหรับกลุ่มตัวอย่างได้รับการรักษา 10 เท่า
เจือจางอนุกรม (101
E108
) ได้ทำในพีบีเอสผ่านการฆ่าเชื้อ หนึ่งมิลลิลิตร
เจือจางของแต่ละคนถูกชุบบนแผ่นวุ้นนับกลาง (PCA,
LIOFILCHEM, อิตาลี) ในที่ซ้ำกัน แผ่นบ่มที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียส
เป็นเวลา 48 ชั่วโมงและจำนวนโคโลนีที่ได้รับการนับแต่ละตัวอย่าง.
จำนวนของผู้รอดชีวิตได้รับรายงานว่า log CFU
ML1
ประสิทธิภาพลดลง (RE) ของการใช้งานความดันสูงของ
สายพันธุ์เชื้อโรคที่คำนวณโดยใช้สมการ RE ¼เข้าสู่ระบบ
N0 log N ที่ N0 หมายถึงค่าเฉลี่ยของจำนวนเซลล์ที่มีชีวิต
ในสารแขวนลอยได้รับการรักษาและไม่มีจำนวนของเซลล์ที่มีชีวิตใน
สารแขวนลอยที่มีแรงดัน .
2.4 HPP การตรวจต้านทาน
ในการตรวจสอบการพัฒนาของความต้านทานต่อ HPP, ชุดใหม่ของ
วัฒนธรรมแบคทีเรีย toxigenic และไม่ toxigenic ถูกผลิตจาก
อาณานิคมแยกได้รับหลังจากแต่ละรอบของการสัมผัสกับ HPP
รักษา เพื่อให้ได้ยับยั้งแบคทีเรียที่สอดคล้อง
ไปแคลิฟอร์เนีย 5 เข้าสู่ระบบของการลด, การระงับแบคทีเรียได้สัมผัสกับ
HPP ในสภาพเดียวกันของดังกล่าวข้างต้นทดสอบ HPP นี้
ได้รับอนุญาตให้ทดสอบว่าเชื้อแบคทีเรียที่ได้รับผลกระทบโดย HPP มีความสามารถในการพัฒนา
ความต้านทานต่อ HPP หลังจากที่แต่ละรอบอาณานิคมรอดชีวิตถูกถอดออก
จาก PCA และบ่มใน BHI ที่ 37? C เป็นเวลา 22 ชั่วโมงที่อุณหภูมิ 170 รอบต่อนาที Nonpressurized
ควบคุมก็รวมอยู่ในการทดลอง นี้
ขั้นตอนซ้ำสิบรอบติดต่อกัน สำหรับแต่ละสายพันธุ์,
และสำหรับแต่ละ 10 รอบสามกลุ่มที่เป็นอิสระถูกนำมาใช้
และสำหรับแต่ละตัวอย่างสามย่อยตัวอย่าง-ได้ทำ (n ¼ 9).
2.5 HPP ทดสอบการกู้คืนที่มีศักยภาพ
ในการที่จะประเมินว่าเซลล์ที่มีแรงดันสามารถกู้คืนความมีชีวิต
หลังจากการรักษา HPP แขวนลอยแบคทีเรีย toxigenic และไม่ toxigenic
ถูกยัดเยียดให้ HPP ในสภาพที่อธิบายข้างต้น.
หลังจากการนับครั้งแรก (48 ชั่วโมง) แผ่นที่ใช้ในการทำงานได้นับ
เซลล์ถูกบ่มเป็นเวลา 14 วันที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสและอาณานิคมได้เล่าให้ฟัง
หลังจากที่ 5, 8, 11 และ 14 วันของการบ่ม นับนี้
กลยุทธ์ที่ใช้หลังจากที่วงจรแรงดันแต่ละคนและความเข้มข้น
ของเชื้อแบคทีเรียทำงานได้ถูกกำหนด สำหรับแต่ละสายพันธุ์สาม
กลุ่มที่เป็นอิสระนับหนึ่งแต่ละคนมีสาม subsamples
(n ¼ 9).
2.6 การวิเคราะห์ทางสถิติ
HPP ข้อมูลการใช้งานจากความต้านทานและการกู้คืนการตรวจ
ที่ได้มาวิเคราะห์ทางสถิติโดยใช้การวิเคราะห์ความแปรปรวน (ANOVA) และ
ทดสอบการโพสต์ทูกีเฉพาะกิจด้วยโปรแกรม SPSS 20.0 (IBM, New York, USA).
อย่างมีนัยสำคัญทางสถิติได้รับการพิจารณาสำหรับ p <0.05 .
3 ผล
3.1 ต้านทาน HPP การตรวจ
การประยุกต์ใช้การรักษา HPP ลดการผลิตใน
ข้อหาสามสายพันธุ์ที่เป็นขนาดขึ้นอยู่กับแต่ละ
สายพันธุ์ภายใต้การศึกษา (p <0.05) ในแต่ละรอบไม่มีความแตกต่างอย่างมีนัยสำคัญ
ในกลุ่ม 3 กลุ่มที่เป็นอิสระ (ANOVA, p> 0.05) ถูก
ตั้งข้อสังเกตสำหรับงวดสามสายพันธุ์ แม้ว่าประสิทธิภาพของแบคทีเรีย
ใช้งานหลังการรักษาครั้งแรกที่เกือบจะเหมือนกัน
(p> 0.05), เวลาในการรักษา HPP ที่แตกต่างกันสำหรับไม่ใช่
516 I. Baptista และคณะ / อาหารจุลชีววิทยา 46 (2015) 515e520

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

เป็นแบคทีเรียที่ CA .
เมื่อ 5 - 6 เข้าสู่ระบบ (
( ~ 9 บันทึกเริ่มต้น ) , และสายพันธุ์ที่ 6538 แรงดัน 600 เมกกะ
30 นาทีที่ 20
C และสายพันธุ์มา 1799 และมาของถูก
แรงดันที่ 600 เมกกะสำหรับ 15 นาทีที่ 20
C
กดไฮโดรสแตติก ( ใน ระบบแรงดันสูงแรงดันสูง u33 สถาบันฟิสิกส์
วอร์ซอ , โปแลนด์ ) ความดันของเหลวที่เป็นส่วนผสมของ 60 %
น้ำและ 40% โพรไพลีนไกลคอล ( dowcal ™ , ดาว ) ด้วยเช่น
ขั้นตอน วัตถุประสงค์เพื่อให้ได้จำนวนดาวของอาณานิคม
ซึ่งถูกใช้เพื่อศึกษาพัฒนาการและแบคทีเรียต้านทาน
เป็นไปได้ของการกู้คืน ไม่กดดันคุมยังรวมอยู่ในการทดลอง
.
2.3 การใช้เซลล์
แต่ละย่อยและสารตัวอย่าง 10 ตัวอย่างการพับแบบเจือจาง ( 101

e108
) ถูกสร้างใน PBS เป็นหมัน
มิลลิลิตรของแต่ละ dilution คือชุบบนจานนับอาหารวุ้น ( PCA
liofilchem , อิตาลี ) ที่ซ้ำกัน จานถูกบ่มที่ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 48 ชั่วโมง และ

จำนวนโคโลนีถูกนับในแต่ละตัวอย่าง
จำนวนผู้รอดชีวิตมีรายงานว่า log CFU ml1


ลดประสิทธิภาพ ( อีกครั้ง ) ทำให้ความดันสูงของ
เชื้อโรคสายพันธุ์ถูกคำนวณโดยใช้สมการกําลัง¼เข้าสู่ระบบเข้าสู่ระบบ n
NO , NO ที่เป็นค่าเฉลี่ยของจำนวนเซลล์ในสารแขวนลอยได้
ดิบและจำนวนเซลล์ในสารแขวนลอยแรงดันได้
.
2.4 . ยีนต้านทานเอชพี
เพื่อตรวจสอบการพัฒนาของความต้านทานที่เอชพีชุดใหม่
toxigenic และไม่ใช่วัฒนธรรมที่ผลิตจากแบคทีเรีย toxigenic
การแยกกลุ่มที่ได้รับหลังจากแต่ละรอบการเอชพี
รักษา เพื่อที่จะได้รับแบคทีเรียทำให้สอดคล้องกัน
เพื่อ . เข้าสู่ระบบของการลดลง , bacterial suspension เปิดเผย
เอชพีในเงื่อนไขเดียวกัน ( เอชพีดังกล่าว นี้
อนุญาตเพื่อทดสอบว่าแบคทีเรียที่ได้รับผลกระทบ โดยเอชพีได้พัฒนาความต้านทานต่อเอชพี
. หลังจากแต่ละรอบเซอร์ไวเวอร์อาณานิคมได้ถูกลบออกจากระบบใน BHI
บ่มที่ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 24 ชั่วโมง ที่
170 รอบต่อนาที nonpressurized
การควบคุมยังรวมอยู่ในการทดลอง ขั้นตอนนี้ทำซ้ำ 10 รอบ
) สำหรับแต่ละสายพันธุ์
และสำหรับแต่ละ 10 รอบ สามอย่างอิสระใช้
และแต่ละตัวอย่างสามตัวอย่างย่อยเสร็จ ( N ¼ 9 ) .
2.5 เอชพีสามารถกู้คืนโดย
เพื่อประเมินว่าแรงดันเซลล์สามารถกู้คืนความมีชีวิต
หลังจากเอชพีรักษา toxigenic และไม่ toxigenic แบคทีเรียสารแขวนลอย
ถูกเอชพีในเงื่อนไขที่อธิบายไว้ข้างต้น หลังจากการเริ่มต้น
( 48 ชั่วโมง ) จาน เคยนับได้
cells บ่มเป็นเวลา 14 วัน ที่ 37
C และอาณานิคมได้ถูกเล่า
หลังจาก 5 , 8 , 11 และ 14 วันของการบ่ม นี้นับ
กลยุทธ์ที่ใช้ในแต่ละรอบ เมื่อความดันและความเข้มข้นของแบคทีเรีย
ได้กำหนดไว้ สำหรับแต่ละสายพันธุ์ สาม
อิสระจำนวนนับหนึ่งกับสาม subsamples
( N ¼ 9 ) .
2.6 สถิติที่ใช้วิเคราะห์ข้อมูลจากเอชพี
เมื่อความต้านทานและการกู้คืน )
) ผลการวิจัยพบว่า ( 1 ) วิเคราะห์ข้อมูลโดยใช้การวิเคราะห์ความแปรปรวน ( ANOVA ) และการทดสอบตูกีเอ
,ด้วยโปรแกรมสำเร็จรูป SPSS 20.0 ( IBM , นิวยอร์ก , สหรัฐอเมริกา )
ถือว่านัยสำคัญทางสถิติ P < 0.05
3 ผลลัพธ์
3.1 . ยีนต้านทานเอชพีเอชพี
ใบสมัครการผลิตลดลงใน
นับจาก 3 สายพันธุ์ มีขนาดขึ้นอยู่กับแต่ละ
สายพันธุ์ที่ศึกษา ( P < 0.05 ) ในแต่ละรอบ ไม่มีความแตกต่างระหว่างตัวอย่างอิสระ
3 ( ANOVA , P > 0.05 ) คือ
สังเกต ทั้ง 3 สายพันธุ์ แม้ว่าประสิทธิภาพในการยับยั้งแบคทีเรีย
หลังจากการรักษาครั้งแรกเป็นเกือบเดียวกัน
( P > 0.05 ) , เอชพีรักษาเวลาที่แตกต่างกันสำหรับ non -
516 . แบ็ปติสต้า et al . อาหาร / จุลชีววิทยา 46 ( 2015 ) 515e520