Polluted marine sediment samples were collected from an
ecosystem with considerable maritime activity and regular
crude oil spills. After isolation assays, three different colony
morphologies were identified on the agar Petri plates. The
colonies were named as OC, BC, CC. The OC colonies were
large colonies (4.0–5.0mm) round, convex with a brilliant
orange color. The second colonies, BC, were large colonies
(2.0–3.0mm), irregular and flat with a beige color. The third
type, CC, were large colonies (3.5–4.5mm), round, umbonate
with a cream color. After the isolation procedure, the isolates
were inoculated in a MM medium using PHE (100M) as a
carbon source. According to Hu et al. (2013), it is expected
that non-degrading microorganisms were displaced by other
potential PHE-degrading microorganisms.
After 10 days, only the flask that was inoculated with CC
showed microbial growth. The concentration of PHE was measured
in the culture medium and was reduced approximately
90% compared to the initial concentration. Therefore, the isolated
colony was able to use PHE as sole source of carbon and
energy. In order to characterize and identify this colony, both
biochemical and physiological characteristics were studied in
detail (Fig. 1). Gram staining was performed and the isolated
CC was examined under microscope with 1000× magnification.
The isolated was determined to be gram-positive, spore
forming, rod-shaped and without flagella (Fig. 1b). SEM micrographs
of the isolated CC were carried out in order to show
in detail its morphological appearance (Fig. 1d and e). Both
Bacillus and Streptobacillus were clearly observed in all of these
figures. The isolate showed an average size of 3–5m long
and 1m wide. Enzymatic activities of catalase and laccase
were also evaluated and it was determined that only catalase
activity was present (Fig. 1c).
To identify the phylogenetic of the isolated CC, total
genomic DNA was extracted from the cultures and the 16S
rRNA was amplified by PCR. The gel purified PCR product is
showed in the Fig. 1f, it can be clearly appreciated that the
isolated is a pure culture. The obtained fragment sequence
was composed by 1003 bp and after comparing them with
ตัวอย่างตะกอนปนเปื้อนในทะเลที่ถูกเก็บรวบรวมจากระบบนิเวศที่มีกิจกรรมทางทะเลมากและปกติการรั่วไหลของน้ำมันดิบ หลังจากการตรวจแยกสามอาณานิคมที่แตกต่างกันรูปร่างลักษณะที่ถูกระบุบนแผ่นวุ้น Petri อาณานิคมถูกเสนอชื่อเป็น OC, BC, CC อาณานิคม OC เป็นอาณานิคมขนาดใหญ่(4.0-5.0mm) กลมนูนกับสดใสสีส้ม อาณานิคมสอง, BC, เป็นอาณานิคมขนาดใหญ่(2.0-3.0mm) ที่ผิดปกติและแบนที่มีสีเบจ สามชนิด CC เป็นอาณานิคมขนาดใหญ่ (3.5-4.5mm) รอบ umbonate มีสีครีม หลังจากขั้นตอนการแยกเชื้อถูกเชื้อในกลางโดยใช้เอ็มเอ็มเพ (100M) เป็นแหล่งคาร์บอน ตามที่ Hu et al, (2013) เป็นที่คาดหวังว่าเชื้อจุลินทรีย์ที่ไม่ย่อยสลายถูกแทนที่ด้วยอื่นๆจุลินทรีย์ที่มีศักยภาพเพย่อยสลาย. หลังจาก 10 วันเพียงขวดที่ถูกเชื้อด้วยซีซีแสดงให้เห็นการเจริญเติบโตของเชื้อจุลินทรีย์ ความเข้มข้นของเพวัดในสื่อวัฒนธรรมและลดลงประมาณ90% เมื่อเทียบกับความเข้มข้นเริ่มต้น ดังนั้นการแยกอาณานิคมก็สามารถที่จะใช้เพเป็นแหล่งเดียวของคาร์บอนและพลังงาน เพื่อที่จะระบุลักษณะและอาณานิคมนี้ทั้งลักษณะทางชีวเคมีและสรีรวิทยาการศึกษาในรายละเอียด(รูปที่ 1). การย้อมสีแกรมได้ดำเนินการและแยกCC ถูกตรวจสอบภายใต้กล้องจุลทรรศน์กำลังขยาย 1000 ×. ที่แยกมุ่งมั่นจะเป็นแกรมบวก, สปอร์ขึ้นรูปรูปแท่งและไม่มีflagella (รูป. 1b) SEM ไมโครซีซีแยกได้ดำเนินการเพื่อที่จะแสดงในรายละเอียดของลักษณะทางสัณฐานวิทยา(รูป. 1 d และ e) ทั้งสองBacillus Streptobacillus และถูกตั้งข้อสังเกตอย่างชัดเจนในสิ่งเหล่านี้ตัวเลข แยกพบว่าขนาดเฉลี่ยของ 3-5m ยาวและกว้าง1 เมตร กิจกรรมของเอนไซม์ catalase และแลคเคสยังได้รับการประเมินและได้รับการพิจารณาว่ามีเพียงcatalase กิจกรรมเป็นปัจจุบัน (รูป. 1 c). เพื่อระบุสายวิวัฒนาการของ CC แยกรวมดีเอ็นเอถูกสกัดจากวัฒนธรรมและ16S rRNA ถูกขยายโดยวิธี PCR . เจลบริสุทธิ์ผลิตภัณฑ์ PCR จะแสดงให้เห็นในรูป 1f ก็สามารถได้รับการชื่นชมอย่างชัดเจนว่าแยกเป็นเชื้อบริสุทธิ์ ลำดับส่วนที่ได้รับประกอบด้วย 1,003 bp และหลังเปรียบเทียบกับ
การแปล กรุณารอสักครู่..
