PCR amplification of markers was carried out in a PTC-200 Peltier Thermal Cycler (MJ Research, Inc.)in a total volume of 20µL with the following genotyping PCR reagents: 2µLofDNA at 20 ng/µL, 2µLof10×buffer containing 25 mM MgCl2,1µLof 2.5 mM dNTPs, 1 unit of Taq Polymerase (Intron Biotechnology,Korea), and 1µL each of forward and reverse primers (10µM).
The PCR reaction for further sequencing analysis consisted of 1 unit of ExTaq polymerase (TaKaRa) in a total reaction of 50 µL.
All amplifications were performed for a total of 35 cycles of 1 min at 95°C,30sat55°C, and 1 min at 72°C.
PCR ขยายเครื่องหมายถูกดำเนินการ PTC 200 Peltier ร้อน Cycler (MJ วิจัย Inc.)ในปริมาณรวมของ 20µL กับ reagents PCR genotyping ดังต่อไปนี้: 2µLofDNA ที่ 20 ที่ ng/µL, 2µLof10 การบัฟเฟอร์ที่ประกอบด้วย 25 มม. MgCl2, dNTPs 1µLof 2.5 mM, 1 หน่วยของพอลิเมอเรส Taq (Intron เทคโนโลยีชีวภาพ เกาหลี), และ 1µL แต่ละของไพรเมอร์ไปข้างหน้า และย้อนกลับ (10µM)
ปฏิกิริยา PCR สำหรับลำดับวิเคราะห์ประกอบด้วย 1 หน่วย ExTaq พอลิเมอเรส (TaKaRa) ในปฏิกิริยารวมของ 50 µL
amplifications ทั้งหมดได้ดำเนินการจำนวน 35 รอบ 1 นาที ที่ 95° C, 30sat55 ° C, 1 นาทีที่ 72 องศาเซลเซียส
การแปล กรุณารอสักครู่..
![](//thimg.ilovetranslation.com/pic/loading_3.gif?v=b9814dd30c1d7c59_8619)