The inhibition of NA enzyme activit

The inhibition of NA enzyme activity by mAbs was measured by
enzyme-linked lectin assay (ELLA) and 20-(4-methylumbelliferyl)-a-D-N-acetylneuraminic acid (Mu-NANA) assay.
ELLA was carried out in a 96-well plate. Briefly, mixtures of
predetermined amount of virus and serial dilutions of antibody
were incubated in duplicate wells of a fetuin-coated plate
overnight at 37 "C. Plates were washed with PBST, followed by
the addition of peanut agglutinin conjugated to horseradish
peroxidase (PNA-HRP) (Sigma, Aldrich, USA). Plates were incubated
at room temperature for 2 h and then washed with PBST,
followed by addition of o-phenylenediamine dihydrochloride
(OPD) substrate. The reaction was stopped, and OD490 values
were read. The Mu-NANA assay was carried out with a
commercially available kit (Applied Biosystems, USA) according
the manufacturer’s instruction. Briefly, mixtures of predetermined
amount of virus and serial dilutions of antibody were incubated in
a 96-well plate for 30 min at 37 "C. Mu-NANA was added and
incubated for 1 h at 37 "C. The reaction was stopped and the plate
was read using an excitation wavelength range of 350 nm to
365 nm and an emission wavelength range of 440 nm to 460 nm.
Median inhibition concentration (IC50) was determined by
quadratic curve fitting (GraphPad Prism).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

โดยวัดจากการยับยั้งเอนไซม์นาโดย mAbsศึกษาเอนไซม์ลิงค์ทดสอบ (ELLA) และทดสอบกรด 20-(4-methylumbelliferyl)-a-D-N-acetylneuraminic (หมู-นานา)เอลลาได้ดำเนินการในแผ่น 96 หลุม สั้น ๆ ส่วนผสมกำหนดจำนวนไวรัสและ dilutions อนุกรมของแอนติบอดีได้รับการกกในบ่อซ้ำจานที่เคลือบ fetuinค้างคืนที่ 37 "แผ่น C. ถูกล้างด้วย PBST ตามด้วยการเพิ่มของ agglutinin ถั่วลิสงรวมกันฮอร์สฮอส (PNA-HRP) (ซิกม่า Aldrich สหรัฐอเมริกา) แผ่นได้รับการกกที่อุณหภูมิห้อง 2 ชั่วโมงแล้ว ซัก ด้วย PBSTตาม ด้วยของ o-phenylenediamine dihydrochlorideพื้นผิว (OPD) หยุดปฏิกิริยา และค่า OD490ถูกอ่าน ทดสอบ Mu-นานาถูกดำเนินการด้วยการตามชุดจำหน่าย (ใช้ศาสตร์เชิงชีวภาพ สหรัฐอเมริกา)คำแนะนำของผู้ผลิต สั้น ๆ ส่วนผสมที่กำหนดได้รับการกกจำนวนไวรัสและ dilutions อนุกรมของแอนติบอดีในจานดี 96 30 นาที 37 "เพิ่ม C. หมู่-นานา และได้รับการกก 1 ชั่วโมงที่ 37 c " หยุดปฏิกิริยา และจานถูกอ่านโดยใช้ช่วงความยาวคลื่นกระตุ้นที่ 350 nm ถึง365 nm และมีช่วงความยาวคลื่นปล่อย 440 nm ถึง 460 nmกำหนดความเข้มข้นเฉลี่ยยับยั้ง (IC50) โดยกำลังสองเส้นโค้ง (GraphPad ปริซึม)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

โดยการยับยั้งการทำงานของเอนไซม์ NA โดยโคลนโดยวัดจาก
เอนไซม์ที่เชื่อมโยงการทดสอบเลคติน (เอลล่า) และ 20 (4 Methylumbelliferyl) -aDN กรดอะเซทิล (MU-นานา) การทดสอบ.
เอลล่าได้ดำเนินการในแผ่น 96 หลุม สั้น ๆ , ส่วนผสมของ
จำนวนที่กำหนดไว้ของไวรัสและเจือจางอนุกรมของแอนติบอดีที่
ถูกบ่มในหลุมที่ซ้ำกันของแผ่นเคลือบ fetuin
ค้างคืนที่ 37 "แผ่นซีถูกล้างด้วย PBST ตามด้วย
นอกเหนือจากถั่วลิสง agglutinin ผันไปมะรุม
peroxidase (PNA- HRP) (ซิกม่าดิช, สหรัฐอเมริกา). แผ่นถูกบ่ม
ที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 2 ชั่วโมงแล้วล้างด้วย PBST,
ตามด้วยนอกเหนือจาก o-Phenylenediamine dihydrochloride
(OPD) สารตั้งต้น. ปฏิกิริยาก็หยุดและค่า OD490
ถูกอ่าน. the หมู่นานาทดสอบได้ดำเนินการกับ
ชุดใช้ได้ในเชิงพาณิชย์ (Applied Biosystems, สหรัฐอเมริกา) ตาม
คำแนะนำของผู้ผลิต. สั้น ๆ , ผสมที่กำหนดไว้
จำนวนของไวรัสและเจือจางอนุกรมของแอนติบอดีที่ถูกบ่มใน
แผ่น 96 หลุมเป็นเวลา 30 นาทีที่ 37 " ซี หมู่นานาถูกบันทึกและ
บ่มเป็นเวลา 1 ชั่วโมงที่ 37 "ซีปฏิกิริยาถูกหยุดและแผ่น
ถูกอ่านได้โดยใช้ช่วงกระตุ้นความยาวคลื่น 350 นาโนเมตร
365 นาโนเมตรและช่วงการปล่อยความยาวคลื่น 440 นาโนเมตรถึง 460 นาโนเมตร.
ความเข้มข้นของการยับยั้งมัธยฐาน (IC50) ถูกกำหนดโดย
สมการกำลังสองที่เหมาะสม Curve (ปริซึม GraphPad)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การยับยั้งกิจกรรมของเอนไซม์โดยนาซึ่งวัดด้วยวิธี enzyme-linked ติน ( เอลล่า ) และ 20 ( 4-methylumbelliferyl ) - a-d-n-acetylneuraminic acid ( มูนานะ ) ตามลำดับเอลล่า ได้ทำการศึกษาใน 96 ครับจาน สั้น ๆ โดยการกำหนดจำนวนของไวรัสและวิธีการต่ออนุกรมถูกเลี้ยงในบ่อของคนเคลือบแผ่นซ้ำกันค้างคืนที่ 37 " ซีจานถูกล้างด้วย pbst ตามด้วยนอกจากนี้ ถั่วลิสงชนิด conjugated จะ .เปอร์ออกซิเดส ( pna-hrp ) ( ซิกม่า Aldrich , USA ) จานถูกบ่มที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 2 ชั่วโมง แล้วล้างด้วย pbst ,ตามมาด้วย นอกจากนี้ o-phenylenediamine :( OPD ) สาร ปฏิกิริยาที่ถูกหยุด และ od490 ค่าถูกอ่าน ( มูนานะอุ้มออกมาด้วยอาด Kit ( Applied Biosystems , USA ) ตามการสอนของผู้ผลิต สั้น ๆ , การผสมตามที่กำหนดปริมาณของไวรัสและวิธีการแอนติบอดีถูกบ่มในอนุกรมเป็น 96 ดีแผ่นสำหรับ 30 นาทีที่ 37 " ซีมูนานะ ได้เพิ่ม และบ่มที่ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 1 ชั่วโมง " ปฏิกิริยาถูกหยุด และจานถูกอ่านโดยใช้ความยาวคลื่นช่วง 350 nm เพื่อกระตุ้น365 นาโนเมตรและความยาวคลื่นเปล่งช่วง nm มา 460 nm .เฉลี่ยการยับยั้งสมาธิ ( ic50 ) ถูกกำหนดโดยการปรับเส้นโค้งกำลังสอง ( graphpad ปริซึม )