Study design
This study was a prospective audit of NSDG use on a single
orthopaedic ward. Ten boxes of powder-free latex NSDG
(USL Medical, Auckland, New Zealand; 100 gloves/box) were
placed in randomly selected rooms (identified using a
random number generator) on a 32-bed general
orthopaedic ward at Dunedin Public Hospital (Dunedin, New
Zealand). The ward carries both elective and non-elective
orthopaedic cases of both surgical and non-surgical origin. It
is staffed by six full-time nurses, one full-time nurse aide,
four house surgeons, seven registrars and 11 consultants.
Staff were not informed of the research purpose and
continued to use the gloves for routine purposes during the
study period. Existing handwashing procedures were
congruent with the WHO guidelines.3 This means washing
hands before and after individual patient contact,
regardless of whether gloves were used or not.Unused glove samples (three gloves from each box on each
occasion) were aseptically removed by one investigator (KH)
from the boxes on opening (day 0) and on days 3, 6 and 9
thereafter. Collection occurred over a five-week period to
ensure samples were not biased by staff roster or use over a
short time period. Sterile forceps were used to withdraw
glove samples from boxes; these were placed in sterile
Whirlpool bags (Simport, Belloell, QC, Quebec, Canada)
before being transported to the laboratory on ice.
Bacteria were eluted from the glove samples and plated
onto different culture media for preliminary identification
and viable counts. Enrichment culture to recover small
numbers of bacteria was also carried out. Following
presumptive identification, unidentifiable colonies and non-
Bacillus species were identified using 16S rDNA
amplification and sequencing. Staphylococci were
investigated for methicillin resistance. In a separate
experiment, two of the isolated bacteria were inoculated
onto glove samples and their viability monitored over a twoweek
period.
J-CT (Professor and Head of Orthopaedic Surgery) and J.
Stoddart (Infection Control, Dunedin Public Hospital) gave
permission for the study; ethical approval was not required.
Bacterial culture of glove samples
Once the sterile Whirlpool bags containing gloves were
transported to the laboratory, diluent (40 mL PBS with 1%
tryptone [Bacto™, Becton Dickinson & Co., Sparks MD,
USA]) was added to each bag and the contents mixed using
a stomacher for 30 seconds. Triplicate 333L and 10L samples
were cultured on Columbia sheep blood, Mannitol Salt and
MacConkey agar plates (Fort Richard Laboratories Ltd.,
Auckland, New Zealand) incubated aerobically at 35±2oC
and examined for growth after 24 and 48 h. The limit of
detection for the plating method was 40 cfu/glove; counts
below 8 x 102 cfu/glove (< 20 cfu/plate) were regarded as
approximate. Enrichment cultures (10mL) were prepared in
Brain Heart Infusion broth (Bacto™, Becton Dickinson & Co.,
Sparks MD, USA) and subcultured as for primary cultures.
For Clostridium perfringens spores, sample diluent (1 mL)
was heat-treated and cultured anaerobically in cooked meat
medium (Fort Richard Laboratories Ltd., Auckland, New
Zealand).
Multiple representatives of each morphological type were
subcultured for identification tests. Isolates were
presumptively identified by standard microbiological tests.
Unidentifiable isolates and non-Bacillus species were stored
in Brain Heart Infusion broth (Bacto™, Becton Dickinson &Co., Sparks MD, USA) with 20% glycerol (Sigma-Aldrich,
Castle Hill, NSW, Australia) at -80oC for further study.
Polymerase chain reactions and sequencing
Full identification of unidentifiable isolates and non-Bacillus
species was achieved by 16s rDNA amplification and
sequencing of multiple isolates of each colony type.9 For
potential MRSA isolates, the SCCmec and orfX regions were
amplified.10 MRSA NZCC 3529 (New Zealand Culture
Collection, ESR, Porirua, New Zealand) was used as a
positive control for both reactions. Sequencing was
performed by the Genetic Analysis Services (Department of
Anatomy, University of Otago, Dunedin, New Zealand) using
an ABI 3730xl DNA analyser with the BigDye® Terminator
Version 3.1 Ready Reaction Cycle Sequencing Kit (Applied
Biosystems®, Life Technologies Ltd., Mulgrave, Victoria,
Australia). Sequences were subjected to BLAST alignment
searches within the GenBank DNA and/or the Ribosomal
Database project (RDP) databases. To assist with data
analysis, bacteria were assigned to one of three categories
on completion of the identification tests: (i) bacteria
primarily of environmental origin; (ii) skin commensals; (iii)
pathogens associated with outbreaks of NI.
Methicillin susceptibility testing
The oxacillin disc diffusion test was performed on
staphylococcal isolates as previously described.11 Methicillin
resistance was confirmed using Oxacillin M.I.C.E E-test strips
(Oxoid, Basingstoke, Hampshire, UK) according to the
manufacturer’s instructions. CSLI breakpoints were applied
for both tests.12
Glove Inoculation trial
NSDG aseptically removed from newly opened boxes were
inoculated with either 1x105 cfu/glove of Staphylococcus
epidermidis (isolate N-13-1) or 1x105 cfu/glove of Klebsiella
pneumoniae (isolate ML-18-12). On days 0, 2, 4, 7 and 14 of
the room temperature incubation period, samples were
processed and viable counts performed on Columbia sheep
blood agar plates (Fort Richard Laboratories Ltd.).
Uninoculated gloves were the negative control.
Statistical analysis
P values were determined by Fisher’s exact probability test,
with significance at P < 0.05.
การออกแบบการศึกษา การศึกษานี้เป็นการตรวจสอบในอนาคตของ nsdg ใช้ในเดียว
ศัลยกรรมกระดูก วอร์ด 10 กล่องฟรีผงยาง nsdg
( USL ทางการแพทย์ , โอ๊คแลนด์ , นิวซีแลนด์ ; 100 ถุงมือ / กล่อง )
วางไว้ในห้องที่สุ่มเลือก ( ระบุใช้
การสร้างเลขสุ่ม ) ใน 32 เตียงทั่วไป
ออร์โธปิดิกส์โรงพยาบาลวอร์ดที่ Dunedin ( Dunedin , New
นิวซีแลนด์ ) วอร์ดมีทั้งวิชาเลือกและไม่ใช่วิชาเลือก
และกรณีของทั้งการผ่าตัดและไม่ผ่าตัดที่มา มัน
คือ harmen โดยหกพยาบาลเต็มเวลาหนึ่งเต็ม พยาบาลพี่เลี้ยง
ศัลยแพทย์บ้านสี่ , เจ็ดและเจ้าหน้าที่ 11 ที่ปรึกษา เจ้าหน้าที่ไม่ได้แจ้ง
จุดประสงค์การวิจัยและต่อเนื่องในการใช้ถุงมือเพื่อวัตถุประสงค์ขั้นตอนในระหว่าง
ระยะเวลาการศึกษา ที่มีอยู่การขั้นตอน
สอดคล้องกับที่แนวทาง3 หมายถึง ล้างมือก่อนและหลังสัมผัสผู้ป่วย
ไม่ว่าบุคคล ถุงมือที่ใช้หรือไม่ ตัวอย่าง ถุงมือที่ไม่ได้ใช้ ( สามถุงมือจากแต่ละกล่องในแต่ละ
โอกาส ) aseptically ลบออกโดยนักสืบคนหนึ่ง ( KH )
จากช่องเปิด ( วันที่ 0 ) และในวันที่ 3 , 6 และ 9
หลังจากนั้น คอลเลกชันที่เกิดขึ้นตลอดระยะเวลา 5 สัปดาห์
ให้แน่ใจว่าจำนวนไม่ลำเอียง โดยเจ้าหน้าที่บัญชีหรือใช้มากกว่า
ในระยะเวลาอันสั้น คีมเป็นหมันถูกใช้เพื่อถอน
ตัวอย่างถุงมือจากกล่อง ; เหล่านี้ถูกวางไว้ในถุงปลอดเชื้อ
( simport belloell , วังวน , QC , ควิเบก , แคนาดา )
ก่อนที่จะส่งไปยังห้องปฏิบัติการบนน้ำแข็ง
แบคทีเรียในตัวอย่างจากตัวอย่างถุงมือและชุบ
บนสื่อวัฒนธรรมแตกต่างกัน
การจำแนกเบื้องต้นและทำงานได้นับ ส่งเสริมวัฒนธรรมเพื่อกู้ตัวเลขขนาดเล็ก
ของแบคทีเรียได้ . ต่อไปนี้
ระบุความเป็นไปได้ที่ไม่สามารถพิสูจน์ได้ และไม่มีโคโลนี , Bacillus สายพันธุ์ถูกระบุด้วย
และ 16S rDNA ( ของ และถูก
สอบสวนเมทิซิลลินต้านทาน ในการทดลองแยก
2 จากแยกแบคทีเรียที่เป็นเชื้อ
ลงบนตัวอย่างถุงมือและสามารถตรวจสอบผ่าน twoweek
ช่วงนี้ j-ct ( ศาสตราจารย์และหัวหน้าของการผ่าตัดศัลยกรรมกระดูก ) และ J .
สตั๊ดดาร์ต ( ควบคุมการติดเชื้อโรงพยาบาลสาธารณะเดอนีดิน ) ให้
อนุญาตการศึกษา อนุมัติจริยธรรมไม่ต้องเพาะเชื้อจากตัวอย่าง
เมื่อถุงมือปลอดเชื้อถุงที่มีถุงมือถูก
วังวน ส่งไปยังห้องปฏิบัติการ เจือจาง ( 40 มล. 1 %
PBS ด้วยทริพโทน [ Bacto ™เบคตอนดิกคินสัน& Co . , ประกายไฟ , MD ,
USA ] ) ที่ถูกเพิ่มเข้าไปในแต่ละถุง และเนื้อหาผสมโดยใช้ : แผงประดับหน้าอกเป็นเวลา 30 วินาที ทำสำเนาสามฉบับ และ 333l ไลน์ตัวอย่าง
เพาะเลี้ยงในเลือดแกะ โคลัมเบีย เกลือและแมนนิทอล
Lynx จาน ( ป้อม ริชาร์ด ห้องปฏิบัติการ จำกัด ,
, นิวซีแลนด์ ) บ่ม aerobically 35 ± 2oc
และตรวจสอบสำหรับการเจริญเติบโตในช่วงเวลา 24 และ 48 ชั่วโมง ของ
จำกัดการตรวจหาโลหะวิธีคือ 40 CFU / ถุงมือ ; นับ
ด้านล่าง 8 x 102 CFU / ถุงมือ ( < 20 CFU / จาน ) ถือว่า
ประมาณ ส่งเสริมวัฒนธรรม ( 10 ) เตรียมน้ำแช่ใน
สมอง หัวใจ ( Bacto ™เบคตอนดิกคินสัน , & Co . ,
ประกายไฟแมรี่แลนด์สหรัฐอเมริกา ) และ subcultured เป็นวัฒนธรรมหลัก .
สำหรับ Clostridium perfringens สปอร์ตัวอย่างเจือจาง ( 1 มล. )
คือความร้อนในเนื้อสุกปานกลาง และเพาะเลี้ยงพ
( ป้อม ริชาร์ด ห้องปฏิบัติการ จำกัด , โอ๊คแลนด์ , นิวซีแลนด์ใหม่
) ตัวแทนแต่ละประเภทหลาย ๆ
subcultured สำหรับการทดสอบรหัส ไอโซเลท
presumptively ระบุการทดสอบทางจุลชีววิทยา ตามมาตรฐาน และสายพันธุ์ Bacillus สายพันธุ์ที่ไม่สามารถพิสูจน์ได้
ไม่เก็บไว้ใน สมอง หัวใจ ™ infusion broth ( Bacto ,เบคตอนดิกคินสัน& Co . , ประกายไฟแมรี่แลนด์ สหรัฐอเมริกา ) 20 % กลีเซอรอล ( ซิกม่า Aldrich
Castle Hill , NSW , ออสเตรเลีย ) - 80oc เพื่อการศึกษา .
วิธีปฏิกิริยาลูกโซ่โพลีเมอเรสและลำดับการเต็มรูปแบบของไอโซเลทและชนิดที่ไม่สามารถพิสูจน์เชื้อ โดยไม่ได้
( 16S rDNA และลำดับของแต่ละไอโซเลทของหลาย อาณานิคมพิมพ์ 9
ศักยภาพ MRSA เชื้อและที่ sccmec orfx ภูมิภาคถูก
amplified.10 MRSA nzcc ทดแทน ( วัฒนธรรมนิวซีแลนด์
คอลเลกชันจาก Porirua , นิวซีแลนด์ ) ถูกใช้เป็น
ควบคุมบวกทั้งปฏิกิริยา ลำดับคือ
ดำเนินการโดยการวิเคราะห์พันธุกรรมบริการ ( ภาควิชา
กายวิภาคศาสตร์ มหาวิทยาลัยโอทาโกดะนีดิน , นิวซีแลนด์ , ) ใช้เป็นดีเอ็นเอวิเคราะห์ 3730xl
ABI กับ bigdye ® Terminator
รุ่น 31 พร้อมชุดวงจรปฏิกิริยาลำดับ ( ใช้
ซึ่ง®ชีวิตเทคโนโลยี จำกัด , วิคตอเรีย ,
Mulgrave , ออสเตรเลีย ) ลำดับถูกระเบิดค้นหาแนวร่วม
ภายในพบดีเอ็นเอและ / หรือโครงการฐานข้อมูลไรโบโซมอล
( RDP ) ฐานข้อมูล เพื่อช่วยในการวิเคราะห์ข้อมูล
, แบคทีเรีย ได้รับหนึ่งในสามประเภท
เมื่อเสร็จสิ้นการสอบ (
) แบคทีเรียหลักของประเทศด้านสิ่งแวดล้อม 2 ) commensals ผิว ; ( iii )
เชื้อโรคที่เกี่ยวข้องกับการแพร่ระบาดของนิ
ต่อเมทิซิลลินไวทดสอบแผ่นทดสอบมีการกระจาย staphylococcal สายพันธุ์ต้านทานเมทิซิลลิน
เหมือนก่อนหน้านี้ described.11 ยืนยันต่อผลการ m.i.c.e แถบ
( oxoid Basingstoke Hampshire , UK ) ไปตาม
คำแนะนำของผู้ผลิต csli จุดที่ใช้สำหรับการทดสอบทั้ง 12
.
nsdg ถุงมือ ( ทดลอง aseptically เอาออกจากกล่องก็เปิดใหม่ใส่ให้
1x105 CFU / ถุงมือของ Staphylococcus
อาหาร ( แยก n-13-1 ) หรือ 1x105 CFU / ถุงมือของ Klebsiella pneumoniae ( แยก
ml-18-12 ) ในวันที่ 0 , 2 , 4 , 7 และ 14
อุณหภูมิห้อง ระยะเวลาการบ่มตัวอย่าง
,ประมวลผลและทำงานได้นับการโคลัมเบียแกะ
เลือดวุ้นแผ่น ( ป้อม ริชาร์ด ห้องปฏิบัติการจำกัด .
ถุงมือใส่ถูกควบคุมลบ สถิติที่ใช้ในการวิเคราะห์ข้อมูลค่า
P ซึ่ง Fisher ' s exact probability test
กับทางสถิติที่ p < 0.05 .
การแปล กรุณารอสักครู่..
