2.2.1.1. E. coli transformation.The

2.2.1.1. E. coli transformation.The resulting PCR fragment
was digested with HindIII and COlI, and the digested products were purified by using Universal DNA Purification Kit (TIAN GEN, DP214–02), cloned into the Trans 109 (de-stroyed by blunting with T4 DNA polymerase).

2.2.1.2. Protoplast preparation and transformation.
Protoplast were prepared from F.oxysporumand co-transformed with
25ll of plasmid pBC-hygro-GFP, which harbours the homologous gfp gene, using the PEG-CaCl2 mediated transfer of DNA as described previously (Bae and Knudsen, 2000).

2.2.2. Screening for GFP expression
Putative resistant transformants were transferred to PDA containing 300 mg/ml hygromycin B and screened for GFP expression. GFP expression was initially detected inF. oxysporumby microscopic screening using NIKON TS-100 with excitation filters at 450–490 nm, using 488 nm excitation line.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.2.1.1. E. coli แปลงส่วน PCR ได้ถูกต้องกับ HindIII COlI และผลิตภัณฑ์ digested ได้บริสุทธิ์ โดยใช้ดีเอ็นเอสากลฟอกชุด (GEN เทียน 02-DP214), โคลนเป็น 109 ทรานส์ (เดอ-stroyed โดย blunting กับ T4 DNA พอลิเมอเรส)2.2.1.2 การ protoplast เตรียมและการแปลงProtoplast ถูกเตรียมจาก F.oxysporumand แปลงร่วมด้วย25ll ของ plasmid pBC-hygro-GFP ที่ harbours ยีน homologous gfp ใช้ PEG CaCl2 mediated โอนของดีเอ็นเอตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ (แบ้และ Knudsen, 2000)2.2.2 การตรวจคัดกรองสำหรับนิพจน์ GFPTransformants Putative ทนถูกโอนย้ายไป PDA ประกอบด้วย 300 mg/ml hygromycin B และฉายสำหรับนิพจน์ GFP มี GFP นิพจน์แรกพบ inF กล้องจุลทรรศน์ NIKON TS-100 ด้วยตัวกรองในการกระตุ้นที่ 450-490 nm, 488 nm ในการกระตุ้นบรรทัดคัดกรอง oxysporumby

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.2.1.1 E. coli transformation.The ผลส่วน PCR
ถูกย่อยด้วย HindIII และ coli และผลิตภัณฑ์ที่ย่อยสลายได้ถูกทำให้บริสุทธิ์โดยใช้ยูนิเวอร์แซดีเอ็นเอบริสุทธิ์ Kit (เทียน GEN, DP214-02), โคลนเข้าไปในทรานส์ 109 (de-stroyed โดยลดทอนด้วย T4 ดีเอ็นเอโพลิเมอร์). 2.2.1.2 เตรียมโปรโตพลาและการเปลี่ยนแปลง. Protoplast ที่เตรียมจาก F.oxysporumand ร่วมกับเปลี่ยน25ll ของพลาสมิด PBC-Hygro-GFP ซึ่งสถิตยีน GFP คล้ายคลึงกันโดยใช้ PEG-CaCl2 โอนสื่อกลางของดีเอ็นเอตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ (แบ้และ Knudsen 2000 ). 2.2.2 การตรวจคัดกรองสำหรับการแสดงออก GFP transformants ทนสมมุติถูกโอนไปยัง PDA ที่มี 300 mg / ml ไฮ B และคัดกรองหาการแสดงออก GFP การแสดงออก GFP ถูกตรวจพบในตอนแรก INF oxysporumby การตรวจคัดกรองโดยใช้กล้องจุลทรรศน์ NIKON TS-100 ที่มีตัวกรองการกระตุ้นที่ 450-490 นาโนเมตรโดยใช้เส้นกระตุ้น 488 นาโนเมตร

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.2.1.1 . E . coli การเปลี่ยนแปลง ผล PCR ส่วน
ถูกย่อยด้วยแบคทีเรียสายพันธุ์แล้ว และย่อยผลิตภัณฑ์มีความบริสุทธิ์โดยใช้ชุดบริสุทธิ์ดีเอ็นเอสากล ( เทียน เจน dp214 ( 02 ) , โคลนในทรานส์ 109 ( เดอ stroyed โดยกระทือกับดีเอ็นเอพอลิเมอเรส T4 )

2.2.1.2 . การเตรียมโปรและการเปลี่ยนแปลง โปรโตพลาสต์ที่เตรียมจาก f.oxysporumand

เปลี่ยนกับโค25ll ของพลาสมิด PBC hygro GFP ซึ่งท่าเรือที่โฮโมโลกัสยีน GFP ใช้ peg-cacl2 โดยถ่ายทอดดีเอ็นเอตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ ( เบ และ Knudsen , 2000 ) .

2.2.2 . การคัดกรอง GFP ซึ่งการแสดงออก
ทนถูกโอนไปยัง PDA พลาสมิดที่มียีนต้านยา hygromycin B 300 มก. / มล. และการแสดงออกของ GFP จาก . การแสดงออกของ GFP ได้เริ่มตรวจพบ inf .oxysporumby กล้องจุลทรรศน์การใช้ Nikon ts-100 ด้วยตัวกรองแบบ 450 – 490 nm ใช้สายแบบ 488 นาโนเมตร