2.5. Quantification of phenolic aci

2.5. Quantification of phenolic acids by HPLC

Phenolic acids were extracted using the method reported by Xu et al. (2009) and Burgos et al. (2013) with slight modifications. Briefly, 0.100 g of sample was extracted with 3.5 mL of a methanol: water: acetic acid solution (80:19.5:0.5) using sonication for 20 min. After centrifugation of the sample at 8000 rpm for 10 min, the residue was extracted again under the same conditions, and the sample was heated to 80 °C for 5 min in the third extraction. The supernatants were collected, evaporated, adjusted to 5 mL with water and cleaned by passed through a 0.45 μm filter.

The analysis was performed using a Waters model 2995 separation system (Waters, Corp., Milford, USA) using a C18 reversed-phase column (symmetry Waters; 5 mm, 4.6 mm, 250 mm) and a gradient elution of 1% acetic acid in water (eluent A) and acetonitrile containing 0.1% acetic acid (eluent B). The gradient started with 3% B for 7 min, was increased to 5–40% B between 7 and 45 min, reached 100% B at 46 min, was maintained at this level to 51 min and was then decreased to 3% B within 6 min. The flow rate was set to 0.7 mL/min with a re-equilibration time of 13 min. Phenolics were detected with a UV–visible photodiode array detector (Waters model 2696) at the maximum absorption wavelength. Standard solutions were prepared by dissolving chlorogenic acid, caffeic acid, p-coumaric acid, and ferulic acid at concentrations ranging from 10 μg/mL to 50 μg/mL.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.5 การนับของกรดฟีนอโดย HPLCกรดฟีนอถูกสกัดด้วยวิธีการรายงาน โดย al. et Xu (2009) และ al. et เบอร์กอส (2013) ปรับเปลี่ยนเล็กน้อย สั้น ๆ 0.100 g ของตัวอย่างที่สกัด ด้วย 3.5 mL ของเมทานอลเป็น: น้ำ: กรดอะซิติกโซลูชั่น (80:19.5:0.5) ใช้ sonication 20 นาที หลังจาก centrifugation ของตัวอย่างที่ 8000 rpm สำหรับ 10 นาที สารตกค้างถูกสกัดอีกครั้งภายใต้เงื่อนไขเดียวกัน แล้วตัวอย่างที่อุณหภูมิ 80 ° C สำหรับ 5 นาทีในแยกที่สาม Supernatants ถูกเก็บรวบรวม หายไป ปรับปรุงให้ 5 mL กับน้ำ และทำความสะอาดโดยผ่านตัวกรอง 0.45 μmการวิเคราะห์ที่ดำเนินการโดยใช้น้ำรุ่น 2995 แยกระบบ (น้ำ Corp. ลฟอร์ด สหรัฐอเมริกา) โดยใช้คอลัมน์ระยะกลับ C18 (สมมาตรน้ำ 5 mm, 4.6 มม. 250 มม.) และ elution ไล่ระดับ 1% กรดอะซิติกในน้ำ (eluent A) และ acetonitrile ประกอบด้วย 0.1% กรดอะซิติก (eluent B) ไล่ระดับสีเริ่มต้น 3% B สำหรับ 7 นาที ขึ้นไป B 5-40% ระหว่างนาที 7 และ 45 ครบ 100% B 46 นาที ถูกรักษาระดับนี้ไปนาทีที่ 51 และถูกแล้วลดลง 3% B ภายใน 6 นาที ตั้งค่าอัตราการไหลการ 0.7 mL/min เวลา equilibration ใหม่ของ 13 นาที Phenolics พบกับแบบ UV – เห็น photodiode เรย์จับ (น้ำรุ่น 2696) ที่ความยาวคลื่นดูดซึมสูงสุด โซลูชั่นมาตรฐานจัดทำ โดยยุบกรด chlorogenic กรด caffeic กรด p-coumaric และกรด ferulic ที่ความเข้มข้นตั้งแต่ μg 10 mL μg 50 mL

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.5 ปริมาณของกรดฟีนอลโดยวิธี HPLC กรดฟีโนลิกถูกสกัดโดยใช้วิธีการรายงานโดย Xu et al, (2009) และกอสและอัล (2013) ที่มีการปรับเปลี่ยนเล็กน้อย สั้น ๆ , 0.100 กรัมตัวอย่างถูกสกัดด้วย 3.5 มลเมทานอลที่อยู่: น้ำสารละลายกรดอะซิติก (80: 19.5: 0.5) โดยใช้ sonication สำหรับ 20 นาที หลังจากการหมุนเหวี่ยงของกลุ่มตัวอย่างที่ 8000 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 10 นาทีที่เหลือถูกสกัดอีกครั้งภายใต้เงื่อนไขเดียวกันและตัวอย่างถูกความร้อนถึง 80 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 5 นาทีในการสกัดที่สาม supernatants ถูกเก็บระเหยปรับ 5 มิลลิลิตรด้วยน้ำและทำความสะอาดโดยผ่าน 0.45 ไมครอนกรอง. การวิเคราะห์ที่ได้รับการดำเนินการโดยใช้รูปแบบวอเตอร์ 2995 ระบบแยก (น้ำคอร์ป, ฟอร์ดสหรัฐอเมริกา) ใช้ C18 เฟสกลับ คอลัมน์ (สมมาตรน้ำ 5 มิลลิเมตร 4.6 มมมม 250) และชะลาด 1% กรดอะซิติกในน้ำ (ชะ A) และ acetonitrile ที่มี 0.1% กรดอะซิติก (ชะ B) ลาดเริ่มต้นด้วย B 3% เป็นเวลา 7 นาที, เพิ่มขึ้นเป็น 5-40% B ระหว่างวันที่ 7 และ 45 นาทีถึง B 100% ใน 46 นาทีถูกเก็บรักษาไว้ในระดับนี้ถึง 51 นาทีและจากนั้นก็ลดลง 3% B ภายใน 6 นาที อัตราการไหลที่ได้รับการตั้งค่าให้ 0.7 มิลลิลิตร / นาทีด้วยเวลาใหม่สมดุล 13 นาที ฟีนอลถูกตรวจพบด้วยโฟโตไดโอด UV-มองเห็นเครื่องตรวจจับอาร์เรย์ (น้ำรุ่น 2696) ที่ความยาวคลื่นการดูดซึมสูงสุด โซลูชั่นมาตรฐานที่ถูกจัดทำขึ้นโดยการละลายกรด chlorogenic กรด caffeic กรดพี coumaric และกรด ferulic ที่ความเข้มข้นตั้งแต่ 10 ไมโครกรัม / มิลลิลิตรถึง 50 ไมโครกรัม / มิลลิลิตร

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.5 ปริมาณของกรดฟีนอลโดยวิธี HPLCฟีโนลิก กรดที่ใช้วิธีรายงานโดย Xu et al . ( 2009 ) และ บูร์โกส et al . ( 2013 ) ที่มีการปรับเปลี่ยนเล็กน้อย สั้น ๆ , 0.100 กรัม จำนวน 3.5 มิลลิลิตรสกัดด้วยเมทิลแอลกอฮอล์ : น้ำ : สารละลายกรดอะซิติก ( 80:19.5:0.5 ) ใช้ sonication 20 นาที หลังการปั่นเหวี่ยงของตัวอย่างที่ 8 , 000 รอบต่อนาที เป็นเวลา 10 นาที ส่วนที่เหลือถูกสกัดอีกครั้งภายใต้เงื่อนไขเดียวกัน และตัวอย่างก็อุ่นที่ 80 ° C เป็นเวลา 5 นาทีใน การสกัดที่สาม การ supernatants รวบรวมระเหยปรับ 5 มิลลิลิตร กับน้ำและทำความสะอาดโดยผ่าน 0.45 μ M ตัวกรองผลจากการวิเคราะห์โดยใช้แบบจำลองการแยกระบบน้ำ 127 ( น้ำ , คอร์ป , ฟอร์ด , USA ) ใช้ c18 reversed-phase คอลัมน์ ( สมมาตรน้ำ ; 5 มม. 4.6 มม. 250 มม. ) และการไล่ระดับสีใช้ 1% กรดอะซิติกในน้ำ ( แยก ) และไนที่ประกอบด้วย 0.1% กรดน้ำส้ม ( ตัว B ) . การไล่ระดับสีเริ่มจาก 3 % B 7 นาที เพิ่มเป็น 5 – 40 % B ระหว่าง 7 และ 45 นาทีถึง 100% B ที่ 46 นาที ไว้ที่ระดับนี้ 51 นาทีและจากนั้นลดลง 3 % B ภายใน 6 นาที อัตราการไหลเท่ากับชุด 0.7 มล. / นาทีกับ Re equilibration เวลา 13 นาที ผลตรวจพบมี UV –มองเห็นโฟโตไดโอดเรย์ตรวจจับ ( น้ำรุ่น 2696 ) ที่ความยาวคลื่นการดูดซึมสูงสุด โซลูชั่นมาตรฐานเตรียมโดยละลายกรดคลอโรจีนิก , กรด Caffeic กรด ferulic acid p-coumaric , และที่ความเข้มข้นตั้งแต่ 10 μ g / ml ถึง 50 μกรัม / มิลลิลิตร