BACKGROUND: Mutations in the p53 tu

BACKGROUND: Mutations in the p53 tumor suppressor gene have been identified in breast and many other carcinomas. It is not clear, however, when these mutations occur during breast carcinogenesis. Overexpression of 53 protein has been reported in some ductal carcinoma in situ (DCIS) lesions. To further study the overexpression of p53 in DCIS of the breast and correlate these findings with changes at the molecular level, we performed p53 immunostaining and direct sequencing in noncomedo and comedo DCIS.

EXPERIMENTAL DESIGN: Archival blocks were obtained on cases of noncomedo DCIS, (including encysted, noninvasive papillary carcinoma) and comedo DCIS. Immunohistochemical staining with the p53 antibody DO7 was performed on all cases. Polymerase chain reaction (PCR) amplification of exons 5, 6, and 7 of the p53 gene was performed and the PCR products were directly sequenced. Four comedo DCIS cases that were p53 immunopositive were further screened for p53 mutations by PCR/single strand conformation polymorphism in exons 8 and 9 of the p53 gene. One of these cases showing a mobility shift was directly sequenced.

RESULTS: We examined 39 lesions including comedo DCIS (N = 12) and noncomedo DCIS (N = 27), the latter including 17 encysted noninvasive papillary carcinomas. Immunostaining with DO7 was positive in 4 of 12 comedo DCIS lesions (33%) while all noncomedo lesions including encysted noninvasive papillary carcinomas were negative. Direct sequencing of PCR products confirmed wild-type DNA in exons 5 and 6 in all noninvasive papillary carcinomas, 3 randomly selected noncomedo DCIS lesions, and 4 p53 antibody-positive comedo DCIS lesions. In these latter 4 cases, wild-type DNA sequences were preserved in exon 7 for all cases. A single case had a conformational shift in exon 8 within the four cases screened in exons 8 and 9. Direct DNA sequencing of this exon revealed a G to A point mutation resulting in an arginine-to-histidine substitution at codon 273 of the protein.

CONCLUSIONS: Our results suggest that mutant p53 protein accumulation in preinvasive lesions is limited to comedo (high grade) DCIS and that p53 positivity by immunohistochemistry does not correlate in all cases with specific p53 mutations in exons 5 to 9, the most highly conserved regions of this gene.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

พื้นหลัง: ได้รับการระบุกลายพันธุ์ในยีนตัวป้องกันไฟเกินเนื้องอก p53 ในเต้านมและมะเร็งอื่น ๆ ไม่ชัดเจน อย่างไรก็ตาม เมื่อกลายพันธุ์เหล่านี้เกิดขึ้นระหว่าง carcinogenesis เต้านม Overexpression ของโปรตีน 53 มีการรายงานในบาง carcinoma ductal ในซิ (DCIS) ได้ เพื่อศึกษา overexpression ของ p53 ใน DCIS ของเต้านม และการเชื่อมโยงเหล่านี้พบกับการเปลี่ยนแปลงในระดับโมเลกุล เราทำ p53 immunostaining และจัดลำดับโดยตรง noncomedo และ comedo DCIS.

ออกแบบการทดลอง: บล็อกถาวรได้รับในกรณีของ noncomedo DCIS, (รวม encysted, noninvasive papillary carcinoma) และ comedo DCIS Immunohistochemical ย้อมสี ด้วยแอนติบอดี p53 DO7 ที่ดำเนินการในทุกกรณี มีดำเนินการพอลิเมอเรสปฏิกิริยาลูกโซ่ (PCR) ขยายของ exons 5, 6 และ 7 ของยีน p53 และผลิตภัณฑ์ PCR ถูกเรียงลำดับโดยตรง เพิ่มเติมกรณี DCIS comedo สี่ที่ p53 immunopositive ถูกฉายการกลายพันธุ์ใน p53 โดยโพลิมอร์ฟิซึม conformation ของสแตรนด์คนเดียว PCR ใน exons 8 และ 9 ของยีน p53 กรณีเหล่านี้แสดงกะเคลื่อนไหวอย่างใดอย่างหนึ่งโดยตรงถูกเรียงลำดับ

ผล: เราตรวจสอบได้ 39 รวม comedo DCIS (N = 12) และ noncomedo DCIS (N = 27), การรวม 17 encysted มะเร็ง papillary noninvasive หลัง Immunostaining กับ DO7 ถูกบวก 4 ได้ 12 comedo DCIS (33%) ในขณะที่ได้ noncomedo ทั้งหมดรวมทั้งมะเร็ง papillary noninvasive encysted ลบ จัดลำดับโดยตรงของผลิตภัณฑ์ PCR ยืนยันดีเอ็นเอชนิดป่าใน exons 5 และ 6 ในทั้งหมด noninvasive papillary มะเร็ง 3 สุ่มเลือกได้ DCIS noncomedo และ 4 p53 comedo แอนติบอดีบวก DCIS ได้ ในกรณี 4 หลัง ลำดับดีเอ็นเอชนิดป่าได้เก็บรักษาไว้ใน exon 7 สำหรับทุกกรณี ตัวเดียวมีกะ conformational ใน exon 8 ในกรณีสี่ซึ่งฉายใน exons 8 และ 9 ตรง G จะกลายพันธุ์เป็นจุดที่เกิดการอาร์จินีน histidine แทนที่ 273 รหัสพันธุกรรมของโปรตีนในการเปิดเผยลำดับดีเอ็นเอของ exon นี้

สรุป: ผลของเราแนะนำว่า สะสมโปรตีน p53 กลายพันธุ์ใน preinvasive ได้จำกัดให้ comedo (เกรดสูง) DCIS และ positivity p53 ที่ โดย immunohistochemistry ไม่เชื่อมโยงในกรณีที่ มีการกลายพันธุ์เฉพาะ p53 ใน exons 5 ถึง 9 สูงที่สุดอยู่ทั่วภูมิภาคของยีนนี้

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ภูมิหลัง: การกลายพันธุ์ในยีน p53 เนื้องอกซับได้รับการระบุในเต้านมและมะเร็งอื่น ๆ อีกมากมาย มันจะไม่ชัดเจน แต่เมื่อเกิดการกลายพันธุ์เหล่านี้เกิดขึ้นในระหว่างการเกิดมะเร็งเต้านม overexpression จาก 53 โปรตีนที่ได้รับรายงานในบางมะเร็ง ductal ในแหล่งกำเนิด (DCIS) แผล เพื่อศึกษาเพิ่มเติม overexpression ของ p53 ใน DCIS ของเต้านมและการค้นพบนี้มีความสัมพันธ์กับการเปลี่ยนแปลงในระดับโมเลกุลที่เราดำเนินการ immunostaining p53 และลำดับโดยตรงในการ noncomedo และคอมีโด DCIS การออกแบบการทดลอง: บล็อกเอกสารที่ได้รับในกรณีที่ของ noncomedo DCIS ( รวมทั้ง encysted มะเร็ง papillary noninvasive) และคอมีโด DCIS เทคนิค immunohistochemistry กับ DO7 p53 แอนติบอดีได้รับการดำเนินการในทุกกรณี ปฏิกิริยาลูกโซ่โพลิเมอร์ (PCR) การขยายของ exons 5, 6, และ 7 ของยีน p53 ได้รับการดำเนินการและผลิตภัณฑ์พีซีอาร์มีลำดับขั้นตอนโดยตรง สี่คอมีโด Dcis กรณีที่มี p53 immunopositive ถูกคัดกรองเพิ่มเติมสำหรับ p53 กลายพันธุ์โดยวิธี PCR / เดี่ยวสาระโครงสร้างหลายรูปแบบใน exons 8 และ 9 ของยีน p53 หนึ่งในกรณีเหล่านี้แสดงให้เห็นถึงการเปลี่ยนแปลงการเคลื่อนไหวได้ติดใจโดยตรงผลการศึกษา: เราตรวจสอบ 39 แผลรวมทั้งสิว DCIS (ยังไม่มี = 12) และ noncomedo DCIS (ยังไม่มี = 27) หลัง 17 รวมทั้ง encysted มะเร็ง papillary noninvasive การย้อมติดกับ DO7 เป็นบวกใน 4 ของ 12 สิวแผล DCIS (33%) ในขณะที่แผล noncomedo ทั้งหมดรวมทั้ง encysted มะเร็ง papillary noninvasive เป็นลบ ลำดับโดยตรงของผลิตภัณฑ์พีซีอาร์ได้รับการยืนยันชนิดป่าดีเอ็นเอใน exons ที่ 5 และ 6 ในมะเร็ง papillary ทั้งหมด noninvasive 3 สุ่มเลือกแผล noncomedo DCIS และ 4 คอมีโด p53 แอนติบอดีบวกแผล DCIS ในเหล่านี้หลัง 4 กรณีป่าประเภทลำดับดีเอ็นเอที่ถูกเก็บรักษาไว้ในเอกซ์ซอน 7 สำหรับทุกกรณี กรณีเดียวที่มีการเปลี่ยนแปลงโครงสร้างในเอกซ์ซอน 8 ภายในสี่กรณีฉายใน exons 8 และ 9 ลำดับดีเอ็นเอโดยตรงของเอกซ์ซอนนี้เปิดเผย G ที่จะเกิดการกลายพันธุ์จุดที่เกิดขึ้นในการทดแทนอาร์จินีเพื่อฮิสติดีนที่ codon 273 ของโปรตีนสรุปผลของเราแสดงให้เห็นว่าการสะสมโปรตีน p53 กลายพันธุ์ในแผล preinvasive จะถูก จำกัด ให้คอมีโด (ระดับสูง) DCIS และ positivity p53 ว่าโดย immunohistochemistry ไม่ได้มีความสัมพันธ์ในทุกกรณีที่มีการกลายพันธุ์ p53 เฉพาะใน exons 5-9 มากที่สุดป่าสงวนภูมิภาคของ ยีนนี้

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

พื้นหลัง : การกลายพันธุ์ในยีนมะเร็งเนื้องอกเครื่องห้ามได้รับการระบุในเต้านมและมะเร็งอื่น ๆ อีกมากมาย มันยังไม่ชัดเจน อย่างไรก็ตาม เมื่อเรื่องเหล่านี้เกิดขึ้นในเต้านมมะเร็ง 53 overexpression ของโปรตีนมีรายงานในบางความเป็นมงคลในแหล่งกำเนิด ( dcis ) รอยโรคไปศึกษาต่อที่ overexpression มะเร็งใน dcis ของเต้านมและสัมพันธ์ผลการวิจัยเหล่านี้กับการเปลี่ยนแปลงระดับโมเลกุล เราทำกิจกรรม immunostaining และตรงและลำดับใน noncomedo สิวเสี้ยน dcis

ทดลอง : บล็อกจดหมายเหตุได้ในกรณีของ noncomedo dcis ( รวมถึงพระเวสสันดร noninvasive , papillary มะเร็ง ) และหาก dcis .สำหรับย้อมด้วยแอนติบอดี do7 P53 ได้ในทุกกรณี ปฏิกิริยาลูกโซ่ ( PCR ) แบบที่มี 5 , 6 และ 7 ของยีน P53 มีการปฏิบัติและผลิตภัณฑ์ PCR อยู่ตรงนี้ 4 หาก dcis คดีที่ประ immunopositive ได้คัดกรองมะเร็งการกลายพันธุ์โดยวิธี PCR / เส้นเดียวของตัวเร่งปฏิกิริยาที่มี 8 และ 9 ของยีน P53 .หนึ่งของกรณีเหล่านี้แสดงการเคลื่อนที่เปลี่ยนคือตรงนี้

ผล : เราตรวจสอบ 39 รวมถึงรอยสิวเสี้ยน dcis ( n = 12 ) และ noncomedo dcis ( n = 28 ) หลังรวม 17 พระเวสสันดร noninvasive papillary มะเร็ง . immunostaining กับ do7 เป็นบวก 4 12 หาก dcis แผล ( 33 % ) ในขณะที่แผล noncomedo ทั้งหมดรวมทั้งพระเวสสันดร noninvasive papillary มะเร็งเป็นลบจัดลำดับโดยตรงของผลิตภัณฑ์ PCR ยืนยันดีเอ็นเอที่มีความเหมือนใน 5 และ 6 ใน papillary มะเร็ง noninvasive , 3 สุ่ม noncomedo dcis รอยโรค และ 4 ตัวอย่าง ( บวกหาก dcis รอยโรค ในกรณีหลัง 4 เหล่านี้ของลำดับดีเอ็นเอ ถูกเก็บรักษาไว้ใน exon 7 ทุกกรณี กรณีเดียวกะมีโครงสร้างใน exon 8 ภายในสี่กรณีรีที่มี 8 และ 9โดยดีเอ็นเอชนิดนี้พบ G จุดกลายพันธุ์ส่งผลให้อาร์การทดแทนีนที่ codon 273 ของโปรตีน .

สรุปจากผลการศึกษานี้ กิจกรรมการสะสมโปรตีนกลายพันธุ์ในรอยโรค preinvasive จำกัดสิวเสี้ยน ( เกรดสูง ) dcis และมะเร็งทั้งโดยหลอดไม่สัมพันธ์ในทุกกรณีมีการกลายพันธุ์ มะเร็งที่เฉพาะเจาะจงในโค 5 กับ 9 มากที่สุดบริเวณอนุรักษ์ของยีนนี้