Fluorescence anisotropy measurement

Fluorescence anisotropy measurement has been widely employed
for the study of model membranes. The lipophilic fluorescent probes,
1,6-diphenyl-1,3,5-hexatriene (DPH) and its cationic derivative 1-[4-
(trimethylamino)pheny]-6-phenyl-1,3,5-hexatriene (TMA-DPH), are
commonly used for such analyses. When added to model membranes
or natural membranes, DPH primarily distributes perpendicular to the
bilayer plane near the center of the membrane, but partially distributes
parallel to it within the acyl chain tails [17]. The use of DPH in natural
membranes requires special care because it can form granules in some
cells even at low concentrations, making interpretation of the results
difficult [19]. TMA-DPH is distributed to the lipid–water interface due
to its charged moiety and thereby reflects only the interfacial region
of themembrane. These probes should not disturb membrane dynamics
and hence they are typically incorporated into model lipid bilayers in a
molar ratio of 1/1000–1/500, or are used for labeling natural cell membranes
at 0.5–5 μM.
Time-resolved fluorescence anisotropy measurement based on
time-correlated single-photon counting (TCSPC) provides quantitative
information on membrane order and rotational motion of acyl
chains in a single measurement. Fluorescence anisotropy is described
by Eq. (1), where IVV and IVH are the fluorescence intensities
(the two subscripts indicate the orientation of the excitation and
emission polarizer, respectively, with H indicating horizontal and
V indicating vertical) and G =IHV / IHH is the instrumental factor.
rðtÞ ¼ ½IVVðtÞ–G IVHðtÞ=½IVVðtÞ þ 2GIVHðtÞ: ð1Þ
The simplest model of the restricted motion of fluorochromes in the
membrane, based on the Brownian diffusion of the label in a conewith a
wobbling diffusion constant, leads to the following single exponential
approximation of the anisotropy decay with time, r(t) [20]:
r t ð Þ¼ r0−r∞ ð Þ⋅expð−t=θÞ þ r∞ ð2Þ
where r∞ stands for limiting anisotropy, and θ (ns) for rotational correlation
time. The order parameter (S) is calculated to obtain structural
information on the membrane according to the following equation:
S ¼ r∞=r0 ð Þ1=2
: ð3Þ
The rotational (wobbling) diffusion coefficient (Dw) is calculated to
obtain the dynamic nature of the membrane according to the following
equation:
Dw
¼ r0
−r∞ ð Þ=6θr0:

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ลูกจ้างการ fluorescence anisotropy ประเมินอย่างกว้างขวางสำหรับการศึกษาแบบจำลองเพื่อช่วย Lipophilic ฟลูออเรสคลิปปากตะเข้1,6-ฟีนิลได-1,3,5-hexatriene (ดีพีเอช) และอนุพันธ์ของ cationic 1- [4(trimethylamino) pheny] -6-phenyl-1,3,5-hexatriene (TMA-ดีพีเอช), มีโดยทั่วไปใช้สำหรับการวิเคราะห์ดังกล่าว เมื่อเพิ่มสารจำลองหรือสารจากธรรมชาติ ดีพีเอชหลักกระจายเส้นตั้งฉากกับการbilayer บินใกล้ศูนย์กลางของเมมเบรน แต่บางส่วนกระจายพร้อมกันนั้นภายในหางโซ่ของ acyl [17] ใช้ของดีพีเอชในธรรมชาติสารจำเป็นต้องดูแลเป็นพิเศษเนื่องจากมันสามารถฟอร์มเม็ดในบางเซลล์แม้ที่ความเข้มข้นต่ำ การตีความผลยาก [19] ดีพีเอช TMA กระจายอินเทอร์เฟซสำหรับไขมัน – น้ำเนื่องmoiety คิดค่าธรรมเนียม และผลสะท้อนเฉพาะภูมิภาค interfacialของ themembrane คลิปปากตะเข้เหล่านี้ไม่ควรรบกวนเยื่อ dynamicsและดังนั้น พวกเขาจะมักจะเป็นรุ่น bilayers ไขมันในตัวอัตราส่วน 1/1000 – 1/500 สบ หรือใช้สำหรับติดฉลากเยื่อหุ้มเซลล์ตามธรรมชาติที่ 0.5 – 5 μMแก้ไขเวลา fluorescence anisotropy วัดเวลา correlated โฟตอนเดี่ยวนับ (TCSPC) มีปริมาณข้อมูลในเมมเบรนสั่งและเคลื่อนไหวในการหมุนของ acylโซ่ในวัดเดียว อธิบาย fluorescence anisotropyโดย Eq. (1), IVV และ IVH ปลดปล่อยก๊าซ fluorescence(ตัวห้อย 2 ระบุการวางแนวของการในการกระตุ้น และส่วนมลพิษ ตามลำดับ กับ H แสดงแนวนอน และV แสดงแนวตั้ง) และ G = IHV IHH เป็น ตัวบรรเลงrðtÞ ¼ ½IVVðtÞ – G IVHðtÞ = ½IVVðtÞ þ 2GIVHðtÞ: ð1Þรูปแบบที่ง่ายที่สุดของการเคลื่อนไหวที่จำกัดของ fluorochromes ในการเมมเบรน ตามแพร่ Brownian ของป้ายชื่อใน conewith เป็นการwobbling คงแพร่ นำไปเดี่ยวต่อเนนประมาณผุ anisotropy ด้วยเวลา r(t) [20]:r t ðÞ¼ r0−r∞ ð Þ⋅expð−t =θÞþ r∞ ð2Þที่จำกัด anisotropy และθ (ns) สำหรับความสัมพันธ์ในการหมุนถึง are∞เวลา มีคำนวณปริมาณ (S) เพื่อให้ได้โครงสร้างข้อมูลในเมมเบรนตามสมการต่อไปนี้:S ¼ r∞ = r0 ð Þ1 = 2: ð3Þมีคำนวณค่าในการหมุน (wobbling) แพร่สัมประสิทธิ์ (Dw)รับธรรมชาติแบบไดนามิกของเมมเบรนตามต่อไปนี้สมการ:Dw¼ r0−r∞ ðÞ = 6θr0:

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การวัดการเรืองแสง anisotropy ได้รับการว่าจ้างอย่างกว้างขวาง
สำหรับการศึกษาของเยื่อรูปแบบ วัดเรืองแสง lipophilic,
1,6-diphenyl-1,3,5-hexatriene (DPH) และประจุบวกของอนุพันธ์ 1 [4
(trimethylamino) pheny] -6-phenyl-1,3,5-hexatriene (TMA- DPH) จะ
ใช้สำหรับการวิเคราะห์ดังกล่าว เมื่อเข้ามาอยู่ในรูปแบบเมมเบรน
หรือเยื่อธรรมชาติ DPH ส่วนใหญ่กระจายตั้งฉากกับ
เครื่องบิน bilayer ใกล้ศูนย์กลางของเมมเบรน แต่กระจายบางส่วน
ขนานไปกับมันภายในหางห่วงโซ่ acyl [17] การใช้ DPH ในธรรมชาติ
เยื่อต้องใช้ความระมัดระวังเป็นพิเศษเพราะมันสามารถสร้างเม็ดในบาง
เซลล์แม้ในความเข้มข้นต่ำทำให้การแปลผล
ยาก [19] TMA-DPH มีการกระจายไปยังอินเตอร์เฟซไขมันน้ำเนื่องจาก
การคิดค่าบริการครึ่งหนึ่งของตนและจึงสะท้อนให้เห็นถึงเพียงภูมิภาคผิวสัมผัส
ของ themembrane ฟิวส์เหล่านี้ไม่ควรรบกวนการเจริญเติบโตและเมมเบรน
และด้วยเหตุนี้พวกเขาจะรวมโดยทั่วไปในรูปแบบ bilayers ไขมันใน
อัตราส่วน 1 / 1000-1 / 500 หรือจะใช้สำหรับการติดฉลากเยื่อหุ้มเซลล์ตามธรรมชาติ
ที่ 0.5-5 ไมครอน
วัดเรืองแสง anisotropy เวลาแก้ไข ขึ้นอยู่กับ
เวลาที่มีความสัมพันธ์นับเดียวโฟตอน (TCSPC) มีปริมาณ
ข้อมูลในการสั่งซื้อเมมเบรนและการเคลื่อนไหวหมุนของ acyl
โซ่ในการวัดเดียว เรืองแสง anisotropy อธิบาย
โดยสมการ (1), ที่ IVV และ IVH มีความเข้มของแสง
(สองห้อยบ่งบอกถึงทิศทางของการกระตุ้นและ
การปล่อยโพลาไรตามลำดับด้วย H แสดงในแนวนอนและ
แนวตั้งแสดง V) และ G = IHV / IHH เป็นปัจจัยที่มีประโยชน์
rðtÞ¼ ½IVVðtÞ-G IVHðtÞ? = ½IVVðtÞÞ2GIVHðtÞ ?: ð1Þ
รูปแบบที่ง่ายที่สุดของการเคลื่อนไหว จำกัด ของ fluorochromes ใน
เมมเบรนอยู่บนพื้นฐานของการแพร่ Brownian ของฉลากใน conewith
คงโยกเยกแพร่นำไปสู่การชี้แจงต่อไปนี้เดียว
ประมาณ anisotropy เสื่อมสลายไปตามกาลเวลา R (t) [20]:
RT ðÞ¼ R0-r∞ðÞ⋅expð-t = θÞÞr∞ð2Þ
ที่r∞ยืนสำหรับการ จำกัด anisotropy และθ (ns) สำหรับความสัมพันธ์หมุน
เวลา พารามิเตอร์เพื่อ (S) จะถูกคำนวณเพื่อให้ได้โครงสร้าง
ข้อมูลเกี่ยวกับเมมเบรนเป็นไปตามสมการต่อไปนี้:
S ¼r∞ = r0 ð TH1 = 2
: ð3Þ
หมุน (โยกเยก) ค่าสัมประสิทธิ์การแพร่ (DW) ที่มีการคำนวณเพื่อ
ให้ได้ลักษณะแบบไดนามิก ของเมมเบรนตามต่อไปนี้
สมการ:
Dw
¼ R0
-r∞ d TH = 6θr0:

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การวัด fluorescence anisotropy ได้รับอย่างกว้างขวางใช้
สำหรับการศึกษารูปแบบเยื่อ การใช้ลิโพฟิลิก (
1,6-diphenyl-1,3,5-hexatriene เรืองแสง , Inc ) และประจุบวกอนุพันธ์ 1 - [ 4
( trimethylamino ) pheny ] - 6-phenyl-1,3,5-hexatriene ( tma-dph ) ,
ที่ใช้สำหรับการวิเคราะห์ดังกล่าว เมื่อเพิ่มแบบเมมเบรน
หรือเยื่อธรรมชาติ , Inc เป็นหลักกระจายตั้งฉากกับ
โดยใช้เครื่องบินใกล้ศูนย์กลางของเยื่อ แต่บางส่วนกระจาย
ขนานภายในห่วงโซ่ , หาง [ 17 ] ใช้ Inc ในเยื่อธรรมชาติ
ต้องดูแลเป็นพิเศษ เพราะมันสามารถสร้างเม็ดในบางเซลล์ที่ความเข้มข้นต่ำ

ทำให้การแปลผลยาก [ 19 ] tma-dph แจกให้ไขมันและน้ำเนื่องจาก
อินเตอร์เฟซการเรียกเก็บเงินแน่นอน จึงสะท้อนให้เห็นเฉพาะระหว่างภูมิภาค
ของ themembrane . วัดเหล่านี้ไม่ควรรบกวนเปลี่ยนแปลงเยื่อ
และด้วยเหตุนี้พวกเขามักจะรวมอยู่ในสองชั้นของนางแบบใน
อัตราส่วนโดยโมลระหว่าง 1 / 1000 - 1 / 500 หรือจะใช้เซลล์เยื่อธรรมชาติ
ฉลาก 0.5 – 5 μเมตรเวลาแก้ไขการวัด fluorescence anisotropy

ตามเวลามีความสัมพันธ์เดียวนับโฟตอน ( tcspc ) ให้ข้อมูลเชิงปริมาณในการสั่งซื้อเยื่อและการเคลื่อนที่แบบหมุน

ของ , โซ่ในวัดเดียว fluorescence anisotropy อธิบาย
โดยอีคิว ( 1 ) ที่ ivv IVH ด้วยจะเรืองแสงและความเข้ม
( 2 subscripts บ่งชี้ทิศทางของการกระตุ้นและ
polarizer ตามลำดับ บ่งชี้และ
H แนวนอน5 แสดงในแนวตั้ง ) และ g = ihv / IHH เป็นปัจจัยบรรเลง .
r ð T Þ¼½ ivv ð T g T Þ– IVH ด้วยðÞ  = ½ ivv ð T Þþ 2givh ð T Þ  : ð 1 Þ
แบบง่ายของ จำกัด การเคลื่อนไหวของ fluorochromes ใน
พยุงตาม ที่บราวเนียนการแพร่ของป้ายชื่อใน conewith เป็น
โซเซฝน , นำไปสู่การประมาณแบบ
เดียวของแอนไอโซทรอปีผุเวลาต่อไปนี้ , r ( t ) [ 20 ] :
R T ðÞ¼ r0 − R ∞ðÞ⋅ EXP ð− t = θÞþ R ∞ð 2 Þ
ที่ R ∞ยืนจำกัด anisotropy และθ ( NS ) เวลาความสัมพันธ์
การหมุน ค่าพารามิเตอร์ ( s ) จะถูกคำนวณเพื่อให้ได้ข้อมูลโครงสร้าง
บนเยื่อตามสมการต่อไปนี้ :
s ¼ R ∞ = r0 ðÞ 1 = 2
3
: ðÞการหมุน ( โคลงเคลง ) ค่าสัมประสิทธิ์การแพร่ ( DW ) คำนวณค่า

ให้ได้ลักษณะแบบไดนามิกของเยื่อตามสมการต่อไปนี้
:


¼ DW r0 − R ∞ðÞ = 6 θ r0 :