Lysozyme/SDS/proteinase K DNA extra

Lysozyme/SDS/proteinase K DNA extraction method
Bacterial cell pellet was resuspended in 200 μl of TE and vortexed. An 8 µl of lysozyme at the
concentration of 50 mg/ml was added and the solution was incubated at 37 °C for 30 min. A volume
of 4 µl of proteinase K at the concentration of 20 mg/ml and 20 µl of 10% SDS were added in the tube,
gently mixed, and incubated at 56 °C for 1 h. A volume of 70 µl of 5 M NaCl and 55 μl of 10% CTAB
(10% CTAB/0.7M NaCl) were added and the mixture was incubated at 56 °C for 10 min. The samples
were cooled down at room temperature. The DNA extraction with phenol/chloroform/isoamyl alcohol
(25:25:1) according to standard procedure was performed twice. The DNA was precipitated by adding
an equal volume of 96% ethanol at room temperature for 10 min followed by centrifugation at 12,000 x g
for 5 min. The supernatant was discarded and the DNA pellet was washed twice with 75% ethanol. The
DNA pellet was dried and dissolved in 100 μl of TE buffer.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

วิธีการสกัดดีเอ็นเอ K lysozyme SDS/proteinaseเม็ดเซลล์แบคทีเรียถูก resuspended ใน μl 200 TE และ vortexed µL มี 8 ของ lysozyme ในการเพิ่มความเข้มข้นของ 50 mg/ml และโซลูชั่นมี incubated ที่ 37 ° C สำหรับ 30 นาที ไดรฟ์ข้อมูลของ 4 µl ของ proteinase K ความเข้มข้นของ 20 mg/ml และ 20 µl 10% SDS ที่เพิ่มในท่อค่อย ๆ ผสม และ incubated ที่ 56 ° C สำหรับ 1 h ปริมาณ 70 µl ของ 5 M NaCl และ μl 55 10% CTAB(10% CTAB / 0.7M NaCl) เพิ่ม และส่วนผสมที่ incubated ที่ 56 ° C สำหรับ 10 นาที ตัวอย่างได้ระบายความร้อนด้วยลงที่อุณหภูมิห้อง สกัดดีเอ็นเอ ด้วยแอลกอฮอล์ คลอโรฟอร์ม/วาง/isoamyl(25:25:1) ตามขั้นตอนมาตรฐานทำสองครั้ง ดีเอ็นเอมีการตกตะกอน โดยการเพิ่มมีปริมาตรเท่าของ 96% เอทานอลที่อุณหภูมิห้องใน 10 นาทีตาม ด้วย centrifugation ที่ 12000 x gใน 5 นาที Supernatant ถูกละทิ้ง และเม็ดดีเอ็นเอถูกล้างสองครั้ง ด้วยเอทานอล 75% ที่ดีเอ็นเอเม็ดแห้ง และละลายใน 100 μl บัฟเฟอร์ TE

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ไลโซไซม์ / SDS / โปร K
วิธีการสกัดดีเอ็นเอตะกอนเซลล์แบคทีเรียถูกresuspended ใน 200 ไมโครลิตรของ TE และการ vortex 8
ไมโครลิตรของไลโซไซม์ที่มีความเข้มข้น50 มิลลิกรัม / มิลลิลิตรเพิ่มและการแก้ปัญหาที่ได้รับการบ่มที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 30 นาที ไดรฟ์
4 ไมโครลิตรของโปร K ที่ความเข้มข้น 20 มิลลิกรัม / มิลลิลิตรและ 20 ไมโครลิตร 10% SDS
ถูกเพิ่มเข้ามาในหลอดผสมเบาๆ และบ่มที่ 56 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 1 ชั่วโมง ปริมาณ 70 ไมโครลิตร 5 M โซเดียมคลอไรด์และ 55 ไมโครลิตร 10% CTAB
(10% CTAB / 0.7m โซเดียมคลอไรด์) มีการเพิ่มและส่วนผสมที่ได้รับการบ่มที่ 56 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 10 นาที
กลุ่มตัวอย่างที่ได้รับการเย็นลงที่อุณหภูมิห้อง การสกัดดีเอ็นเอที่มีฟีนอล / คลอโรฟอร์ม / isoamyl เครื่องดื่มแอลกอฮอล์
(25: 25: 1) ตามขั้นตอนมาตรฐานที่ได้ดำเนินการเป็นครั้งที่สอง ดีเอ็นเอถูกเร่งโดยการเพิ่มปริมาณที่เท่ากันของเอทานอล 96% ที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 10 นาทีตามด้วยการหมุนเหวี่ยงที่ 12,000 XG เป็นเวลา 5 นาที สารละลายทิ้งและเม็ดดีเอ็นเอถูกล้างครั้งที่สองกับเอทานอล 75% เม็ดดีเอ็นเอแห้งและละลายใน 100 ไมโครลิตรของ buffer TE