4.2.1. Identification of a RBD of M

4.2.1. Identification of a RBD of MERS-CoV S protein as anessential target for MERS vaccine development To identify the RBD of MERS-CoV, we initially aligned thesequences of MERS-CoV S protein with those of SARS-CoV Sprotein and found that residues 377–662 in the MERS-CoV S pro-tein shared similar core structures with SARS-CoV RBD, increasing the likelihood that the RBD of MERS-CoV might be located in thisregion (Jiang et al., 2013). A recombinant protein (S377-662-Fc)containing residues 377–662 of MERS-CoV S protein fused with Fcfragment of human IgG was expressed in the culture supernatant of mammalian cell 293T for the purpose of forming conformational structures and, thus, increasing immunogenicity (Du et al., 2013c).As expected, the expressed recombinant protein was able toform a high molecular-weight molecule, as shown in nonboiled samples in SDS-PAGE (Fig. 3A, left), which was recognized byMERS-CoV S1-specific antibodies (Fig. 3A, right). Detection of thebinding of S377-662-Fc with the receptor of MERS-CoV, DPP4, byco-immunoprecipitation assay revealed that this protein boundsignificantly to soluble DPP4 (sDPP4) and cell-associated DPP4 inDPP4-expressing Huh-7 cells, being recognized by anti-DPP4 andanti-MERS-CoV-S1 antibodies, respectively (Fig. 3B). ELISA and flowcytometry analyses indicated that S377-662-Fc bound to sDPP4 andHuh-7 in a dose-dependent manner (Du et al., 2013c). These datasuggest that the expressed recombinant protein formed conforma-tional structures and that the predicted 286-amino acid fragment contained MERS-CoV RBD.Further evaluation of the immunogenicity of the identified MERS-CoV RBD demonstrated that the expressed recombinantS377-662-Fc protein induced MERS-CoV RBD-specific antibodiesin mice subcutaneously (s.c.) immunized after two vaccinations,resulting in the effective neutralization of MERS-CoV infection inVero E6 cells in vitro (Du et al., 2013c), indicating that this regionmay serve as an essential target for developing MERS subunit vac-cines.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

4.2.1. รหัสโปรตีน S RBD MERS CoV anessential เป้าหมายสำหรับการพัฒนาวัคซีน MERS ระบุการ RBD ของ MERS-CoV เราเริ่มชิด thesequences MERS CoV S โปรตีนกับโรคนี้ CoV Sprotein และพบการตกค้าง 377 – 662 ใน S MERS CoV pro-นี้ร่วมโครงสร้างหลักคล้ายกับ SARS CoV RBD เพิ่มโอกาสที่การ RBD ของ MERS-CoV อาจอยู่ในเรื่องนี้ภูมิภาค (Jiang et al , 2013) วททชโปรตีน (S377-662-Fc) ตกค้างมี 377 – 662 S MERS CoV โปรตีนพร้อม Fcfragment ของ IgG มนุษย์ถูกแสดงใน supernatant วัฒนธรรมของ mammalian เซลล์ 293T เพื่อขึ้นรูปโครงสร้าง conformational และ จึง เพิ่ม immunogenicity (ดู et al., 2013 c) ตามที่คาดไว้ แสดง recombinant โปรตีนถูกสามารถ toform โมเลกุลมีน้ำหนักโมเลกุลสูง เป็นแสดงในตัวอย่าง nonboiled ในองค์กรหน้า (Fig. 3A ซ้าย), ซึ่งถูกรับรู้เฉพาะ CoV S1 byMERS แอนตี้ (Fig. 3A ขวา) ตรวจพบ thebinding ของ S377-662-Fc กับตัวรับของ MERS CoV, DPP4, byco-immunoprecipitation วิเคราะห์เปิดเผยที่นี้ boundsignificantly โปรตีนจะละลายน้ำ DPP4 (sDPP4) และเชื่อมโยงเซลล์ DPP4 inDPP4 แสดง Huh-7 ได้รับการรับรอง โดยแอนตี้ต่อต้าน-DPP4 andanti-MERS-CoV-S1 ตามลำดับ (Fig. 3B) วิเคราะห์ ELISA และ flowcytometry ระบุว่า S377-662-Fc กับ sDPP4 andHuh-7 อย่างขึ้นอยู่กับปริมาณรังสี (ดู et al., 2013c) Datasuggest เหล่านี้ว่า recombinant โปรตีนแสดงรูปแบบโครงสร้าง conforma tional และให้กรดอะมิโน 286 เคลื่อนแยกส่วนอยู่ MERS CoV RBD ประเมินเพิ่มเติมของ immunogenicity ของ RBD MERS CoV ระบุแสดงว่า โปรตีน recombinantS377-662-Fc แสดงเกิดหนู antibodiesin MERS CoV RBD เฉพาะ subcutaneously (เอส) immunized หลังวัคซีนสอง เกิดปฏิกิริยาสะเทินมีประสิทธิภาพ MERS CoV เชื้อ inVero E6 เซลล์เพาะเลี้ยง (ดู et al., 2013c) ระบุที่ regionmay นี้เป็นเป้าหมายจำเป็นสำหรับการพัฒนา MERS ย่อย vac-cines

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

4.2.1 บัตรประจำตัวของเมอร์สของ RBD-COV โปรตีน S เป็นเป้าหมาย anessential สำหรับการพัฒนาวัคซีนเพื่อ mers ระบุ RBD ของเมอร์ส-COV, เราเริ่มชิด thesequences ของเมอร์ส COV-S โปรตีนกับบรรดาโรคซาร์ส COV Sprotein และพบว่าสารตกค้าง 377-662 ใน mers COV-S โปรเทียนที่ใช้ร่วมกันโครงสร้างหลักคล้ายกับโรคซาร์ส COV RBD เพิ่มโอกาสว่า RBD ของเมอร์ส-COV อาจจะอยู่ใน thisregion นี้ (เจียง et al., 2013) โปรตีน recombinant (S377-662-Fc) ที่มีสารตกค้าง 377-662 ของโปรตีน mers COV-S ผสมกับ Fcfragment IgG ของมนุษย์ได้รับการแสดงในสารละลายวัฒนธรรมของเซลล์ 293T เลี้ยงลูกด้วยนมเพื่อวัตถุประสงค์ในการสร้างโครงสร้างโครงสร้างและทำให้ภูมิคุ้มกันเพิ่มขึ้น (Du et al., 2013c) .As คาดว่าโปรตีนแสดงเป็น toform สามารถโมเลกุลน้ำหนักโมเลกุลสูงดังแสดงในตัวอย่าง nonboiled ใน SDS-PAGE (รูป. 3A ซ้าย) ซึ่งได้รับการยอมรับ byMERS COV-S1 แอนติบอดี -specific (รูป. 3A, ขวา) การตรวจหา thebinding ของ S377-662-Fc กับตัวรับของเมอร์ส-COV, DPP4, ทดสอบ byco-immunoprecipitation เปิดเผยว่าโปรตีนนี้จะ boundsignificantly DPP4 ที่ละลายน้ำได้ (sDPP4) และเซลล์ที่เกี่ยวข้อง DPP4 inDPP4-แสดง Huh-7 เซลล์ได้รับการยอมรับจาก แอนติบอดีต่อต้าน DPP4 andanti-mers-COV-S1 ตามลำดับ (รูป. 3B) วิธี ELISA และ flowcytometry วิเคราะห์ชี้ให้เห็นว่า S377-662-Fc ผูกไว้กับ sDPP4 andHuh-7 ในลักษณะปริมาณขึ้นอยู่กับ (ที่ Du et al., 2013c) เหล่านี้ datasuggest แสดงว่าโปรตีนที่เกิดขึ้นโครงสร้าง Conforma-tional และที่คาดการณ์ไว้ส่วนกรดอะมิโน 286 ที่มีการประเมินผล mers-COV RBD.Further ของภูมิคุ้มกันของเมอร์สระบุ-COV RBD แสดงให้เห็นว่าที่แสดงออก recombinantS377-662-Fc เหนี่ยวนำให้เกิดโปรตีน เมอร์ส-COV หนู antibodiesin RBD เฉพาะใต้ผิวหนัง (SC) วัคซีนหลังจากที่สองการฉีดวัคซีนที่มีผลในการวางตัวเป็นกลางที่มีประสิทธิภาพของการติดเชื้อ mers-COV inVero เซลล์ E6 ในหลอดทดลอง (Du et al., 2013c) แสดงให้เห็นว่านี้ regionmay ทำหน้าที่เป็นเป้าหมายที่สำคัญ สำหรับการพัฒนา mers subunit VAC-ยาขนานใหม่ ๆ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

4.2.1 . รหัสของเงินของ mers ปก S โปรตีนเป็นเป้าหมาย anessential เพื่อ mers วัคซีน การพัฒนาเพื่อระบุ RBD จาก mers COV เราเริ่มชิด thesequences ปกเป็นโปรตีนของ mers นั้นโรคซาร์ และพบว่ามี sprotein ตกค้าง 377 –ตอนนี้ใน mers ปกของ Pro เทียนใช้โครงสร้างหลักคล้ายกับโรคซาร์ส RBD มี ,เพิ่มโอกาสที่เงินของ mers ปกอาจจะอยู่ใน thisregion ( เจียง et al . , 2013 ) โปรตีนรีคอมบิแนนท์ ( s377-662-fc ) ที่มีสารตกค้าง 377 – 662 ของ mers ปก S โปรตีนผสมกับ fcfragment ของ IgG มนุษย์แสดงออกในวัฒนธรรมที่นำเซลล์ของสัตว์เลี้ยงลูกด้วยนม 293t เพื่อสร้างโครงสร้าง โครงสร้าง และ จึง สามารถเพิ่ม ( du et al . , 2013c )ตามที่คาดไว้ , แสดงแนนท์โปรตีนสามารถแท้จริงโมเลกุลน้ำหนักโมเลกุลสูง ดังแสดงในตัวอย่างในการศึกษา nonboiled ( รูปที่ 3A , ซ้าย ) ซึ่งเป็นที่ยอมรับว่ามี bymers S1 แอนติบอดีที่เฉพาะเจาะจง ( รูปที่ 3A , ขวา ) การตรวจหา thebinding ของ s377-662-fc กับตัวรับ ของมี dpp4 mers , ,byco immunoprecipitation assay พบว่าโปรตีนที่ละลายน้ำได้ boundsignificantly dpp4 ( sdpp4 ) และเซลล์ที่เกี่ยวข้อง dpp4 indpp4 แสดง huh-7 เซลล์ ถูกยอมรับโดย anti-dpp4 andanti-mers-cov-s1 แอนติบอดี ตามลำดับ ( รูปที่ 3B ) วิธีโฟลไซโตเมทรีและวิเคราะห์พบว่า s377-662-fc ผูก sdpp4 andhuh-7 ในลักษณะปิดกั้น ( du et al . , 2013c )เหล่านี้ datasuggest ที่แสดงแนนท์โปรตีนที่เกิดขึ้น conforma tional โครงสร้างและที่คาดการณ์ไว้ 286 กรดอะมิโนส่วนที่มีอยู่ mers RBD มีการประเมินผลเพิ่มเติมของสามารถของเงินพบว่ามีระบุ mers แสดงการ mers recombinants377-662-fc โปรตีนมีเฉพาะ antibodiesin RBD หนู subcutaneously ( ซี.) หลังจากสองวัคซีนฉีด ส่งผลให้ประสิทธิภาพของการ mers ปิดการติดเชื้อ invero E6 เซลล์ในหลอดทดลอง ( du et al . , 2013c ) แสดงว่า regionmay นี้เป็นเป้าหมายที่สำคัญสำหรับการพัฒนา mers ซึ่ง cines Vac .