Cellobiose 2-epimerase from the the

Cellobiose 2-epimerase from the thermophile Caldicellulosiruptor saccharolyticus (CsCE) catalyzes the
isomerization of lactose into lactulose, a non-digestible disaccharide widely used in food and pharmaceutical
industries. Semi-rational approaches were applied to enhance the thermostability of CsCE. A total
of eight single-site mutants were designed, and five of them showed prolonged half-life of inactivation
at 80 ◦C. Combinatorial mutations were subsequently introduced, and the superior mutant was double
mutant E161D/N365P. The half-life was approximately 4-fold higher than that of the wild type enzyme.
In addition, the reaction temperature for maximum activity increased from 80 ◦C to 87.5 ◦C, and catalytic
efficiency (kcat/Km) for lactulose production was increased 29%. Moreover, this mutant E161D/N365P was
more stable against chemical denaturation and showed also a broader pH profile. The second most stable
variant were mutant E161D/S180P/S351G with a 3.3-fold increase in half-life. These results provided
new insights into the thermostability of CsCE and suggested further potential industrial applications.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

Catalyzes epimerase 2 cellobiose จาก thermophile Caldicellulosiruptor saccharolyticus (CsCE)isomerization ของแล็กโทสเป็น lactulose ไดแซ็กคาไรด์ไม่ digestible ใช้ในอาหารและยาอุตสาหกรรม วิธีกึ่งเชือดถูกนำไปใช้ในการเพิ่ม thermostability ของ CsCE ทั้งหมดแปดแบบสายพันธุ์ถูกออกแบบ และออกแสดงนาน half-life ของยกเลิกการเรียกที่ 80 ◦C ในเวลาต่อมาได้นำปัญหาการกลายพันธุ์ และ mutant ซูถูกคู่mutant E161D/N365P ฮาล์ฟ-ไลฟ์มีประมาณ 4-fold สูงกว่าของเอนไซม์ชนิดป่านอกจากนี้ อุณหภูมิปฏิกิริยาสำหรับกิจกรรมสูงสุดเพิ่มขึ้นจาก 80 ◦C 87.5 ◦C และตัวเร่งปฏิกิริยาประสิทธิภาพ (kcat/Km) สำหรับผลิต lactulose ถูกเพิ่มขึ้น 29% นอกจากนี้ นี้ mutant E161D/N365P ได้มั่นคงกับ denaturation เคมี และแสดงให้เห็นส่วนกำหนดค่า pH กว้างยังขึ้น คอกที่สองส่วนใหญ่ตัวแปรมี mutant E161D/S180P/S351G ด้วยการเพิ่ม 3.3-fold ฮาล์ฟ-ไลฟ์ ผลลัพธ์เหล่านี้ให้ลึก thermostability CsCE และแนะนำเพิ่มเติมอาจใช้งานในอุตสาหกรรมใหม่

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

Cellobiose 2 epimerase จาก thermophile Caldicellulosiruptor saccharolyticus (CsCE) กระตุ้น
isomerization ของแลคโตสเข้า lactulose
เป็นไดแซ็กคาไรด์ที่ไม่ย่อยใช้กันอย่างแพร่หลายในอาหารและยาอุตสาหกรรม วิธีกึ่งเหตุผลถูกนำไปใช้เพื่อเพิ่มความทนร้อนของ CsCE รวมแปดกลายพันธุ์เดียวเว็บไซต์ได้รับการออกแบบและห้าของพวกเขาแสดงให้เห็นว่าเป็นเวลานานครึ่งชีวิตของการใช้งานที่80 ◦C การกลายพันธุ์ Combinatorial ถูกนำมาต่อมาและกลายพันธุ์ที่เหนือกว่าเป็นคู่กลายพันธุ์E161D / N365P ครึ่งชีวิตประมาณ 4 เท่าสูงกว่าของเอนไซม์ชนิดป่า. นอกจากนี้อุณหภูมิสำหรับกิจกรรมสูงสุดเพิ่มขึ้นจาก 80 ◦Cไป 87.5 ◦Cและตัวเร่งปฏิกิริยาที่มีประสิทธิภาพ(kcat / กิโลเมตร) สำหรับการผลิต lactulose เพิ่มขึ้น 29% นอกจากนี้กลายพันธุ์นี้ E161D / N365P เป็นมีเสถียรภาพมากขึ้นกับการสูญเสียสภาพธรรมชาติทางเคมีและแสดงให้เห็นว่ายังมีรายละเอียดค่าpH ที่กว้างขึ้น มีเสถียรภาพมากที่สุดสองตัวแปรเป็นมนุษย์กลายพันธุ์ E161D / S180P / S351G กับการเพิ่มขึ้น 3.3 เท่าในครึ่งชีวิต ผลลัพธ์เหล่านี้ให้ข้อมูลเชิงลึกใหม่เข้าสู่ทนร้อนของ CsCE และแนะนำการใช้งานในโรงงานอุตสาหกรรมที่มีศักยภาพต่อไป

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ที่ 2-epimerase จาก saccharolyticus caldicellulosiruptor เทอร์โมไฟล์ ( csce ) และไอโซเมอไรเซชันของแลคโตสแลคทูโลส
เข้าไปไม่ย่อย , เว็บไซต์ที่ใช้กันอย่างแพร่หลายในอาหารและอุตสาหกรรมยา

กึ่งแนวเหตุผล เพื่อใช้ในการเพิ่มประสิทธิภาพของ csce ทดล . รวมสายพันธุ์เดียว
8 เว็บไซต์ถูกออกแบบและห้าของพวกเขามีครึ่งชีวิตนานของการยับยั้ง
80 ◦ C . การมิวเตชั่น จัดการแนะนำและ superior กลายพันธุ์เป็นคู่
e161d กลายพันธุ์ / n365p . ครึ่งชีวิตประมาณ 4 เท่าสูงกว่าที่ของเอนไซม์ชนิดป่า
นอกจากนี้ อุณหภูมิของปฏิกิริยาเอนไซม์สูงสุดเพิ่มขึ้นจาก 80 ◦ C ถึง 87.5 ◦และ catalytic
Cประสิทธิภาพ ( kcat / km ) สำหรับการผลิตแลคทูโลสเพิ่มขึ้น 29 เปอร์เซ็นต์ นอกจาก นี้กลายพันธุ์ e161d / n365p คือ
มั่นคงกับ ( เคมีและพบโปรไฟล์ของ pH ที่กว้างขึ้น ตัวแปรคงที่
ที่สุดที่สอง กลายพันธุ์ e161d / s180p / s351g กับ 3.3-fold เพิ่มในครึ่งชีวิต ผลลัพธ์เหล่านี้ให้
ใหม่และข้อมูลเชิงลึกในทดล csce แนะนำเพิ่มเติมศักยภาพของอุตสาหกรรม .