- ข้อความ
- ประวัติศาสตร์
2.5.2. SDS-polyacrylamide gel elect
2.5.2. SDS-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE)
SDSePAGE was performed by the method of Laemmli (1970).
Gel samples were dissolved in 50 g L1 SDS solution. The mixtures
were then heated at 85 C for 1 h using a temperature controlled
water bath model W350 (Memmert, Schwabach, Germany). The
mixtures were centrifuged at 8500 g for 5 min using a microcentrifuge
(MIKRO20, Hettich Zentrifugan,170 Germany) to remove
undissolved debris. Solubilized samples were mixed at 1:1 (v/v)
ratio with the sample buffer (0.5 mol L1 TriseHCl, pH 6.8 containing
5 g 100 mL1 SDS and 200 mL L1 glycerol). Samples (15 mg
protein) were loaded onto a polyacrylamide gel made of 75 g L1
separating gel and 40 g L1 stacking gel and subjected to electrophoresis
at a constant current of 20 mA gel1. After electrophoresis,
the gels were stained with 0.5 mL L1 (w/v) Coomassie Blue R-250
in 150 mL L1 methanol and 50 mL L1 acetic acid for 30 min.
Finally, they were destained with a mixture of 300 mL L1 methanol
and 100 mL L1 acetic acid for 1 h and destained again with the
same solution for 30 min. High-molecular-weight protein markers
were used to estimate the molecular weight of proteins.
2.5.3. Determination of color of gelatin gel
The color of gelatin gels was determined using a Hunter lab
colorimeter (Color Flex, Hunter Lab Inc., Reston, VA, USA). L*, a* and
b* values indicating lightness/brightness, redness/greenness and
yellowness/blueness, respectively, were recorded. The colorimeter
was warmed for 10 min and calibrated with a white standard.
The total difference in color (DE*) was calculated according to
the following equation (Gennadios, Weller, Hanna, & Froning,
1996):
DE* ¼
ffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffi
ðDL*Þ2 þ ðDa*Þ2 þ ðDb*Þ2
q
where DL*, Da* and Db* are the differences between the corresponding
color parameter of the sample and that of the white
standard (L* ¼ 93.6, a* ¼ 0.94 and b* ¼ 0.40).
2.6. Characterization of gelatin and gel incorporated with the
selected EECH levels
2.6.1. Determination of gelling and melting temperatures
Gelling and melting temperatures of gelatin solutions containing
EECH at the selected concentrations (0.5 and 5 mg g1) were
measured following the method of Boran, Mulvaney, and
Regenstein (2010) using a controlled stress rheometer (Rheo-
Stress 1, HAAKE, Karlsruhe, Germany). The gelatin solutions
(6.67 g 100 mL1) without and with EECH were prepared in the
same manner as described previously. The solution was preheated
at 35 C for 30 min. The measuring geometry included a 3.5 cm
parallel plate and the gap was set at 1.0 mm. The measurement was
performed at a scan rate of 0.5 C min1, frequency of 1 Hz,
oscillating applied stress of 3 Pa during cooling from 35 to 5 C and
heating from 5 to 35 C. The gelling and melting temperatures were
calculated, where tan d became 1 or d was 45.
2.6.2. Determination of microstructure
The microstructure of gelatin gel without and with EECH (0.5
and 5 mg g1) were visualized using a scanning electron microscopy
(SEM). Gelatin gels having a thickness of 2e3 mmwere fixed
with 2.5 mL 100 mL1 glutaraldehyde in 0.2 M phosphate buffer
(pH 7.2) for 12 h. The samples were then rinsed with distilled water
for 1 h and dehydrated in ethanol with a serial concentration of 25,
50, 70, 80, 90 and 100 mL1. Dried samples were mounted on a
bronze stub and sputter-coated with gold (Sputter coater SPIModule,
West Chester, PA, USA). The specimens were observed
SDSePAGE was performed by the method of Laemmli (1970).
Gel samples were dissolved in 50 g L1 SDS solution. The mixtures
were then heated at 85 C for 1 h using a temperature controlled
water bath model W350 (Memmert, Schwabach, Germany). The
mixtures were centrifuged at 8500 g for 5 min using a microcentrifuge
(MIKRO20, Hettich Zentrifugan,170 Germany) to remove
undissolved debris. Solubilized samples were mixed at 1:1 (v/v)
ratio with the sample buffer (0.5 mol L1 TriseHCl, pH 6.8 containing
5 g 100 mL1 SDS and 200 mL L1 glycerol). Samples (15 mg
protein) were loaded onto a polyacrylamide gel made of 75 g L1
separating gel and 40 g L1 stacking gel and subjected to electrophoresis
at a constant current of 20 mA gel1. After electrophoresis,
the gels were stained with 0.5 mL L1 (w/v) Coomassie Blue R-250
in 150 mL L1 methanol and 50 mL L1 acetic acid for 30 min.
Finally, they were destained with a mixture of 300 mL L1 methanol
and 100 mL L1 acetic acid for 1 h and destained again with the
same solution for 30 min. High-molecular-weight protein markers
were used to estimate the molecular weight of proteins.
2.5.3. Determination of color of gelatin gel
The color of gelatin gels was determined using a Hunter lab
colorimeter (Color Flex, Hunter Lab Inc., Reston, VA, USA). L*, a* and
b* values indicating lightness/brightness, redness/greenness and
yellowness/blueness, respectively, were recorded. The colorimeter
was warmed for 10 min and calibrated with a white standard.
The total difference in color (DE*) was calculated according to
the following equation (Gennadios, Weller, Hanna, & Froning,
1996):
DE* ¼
ffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffi
ðDL*Þ2 þ ðDa*Þ2 þ ðDb*Þ2
q
where DL*, Da* and Db* are the differences between the corresponding
color parameter of the sample and that of the white
standard (L* ¼ 93.6, a* ¼ 0.94 and b* ¼ 0.40).
2.6. Characterization of gelatin and gel incorporated with the
selected EECH levels
2.6.1. Determination of gelling and melting temperatures
Gelling and melting temperatures of gelatin solutions containing
EECH at the selected concentrations (0.5 and 5 mg g1) were
measured following the method of Boran, Mulvaney, and
Regenstein (2010) using a controlled stress rheometer (Rheo-
Stress 1, HAAKE, Karlsruhe, Germany). The gelatin solutions
(6.67 g 100 mL1) without and with EECH were prepared in the
same manner as described previously. The solution was preheated
at 35 C for 30 min. The measuring geometry included a 3.5 cm
parallel plate and the gap was set at 1.0 mm. The measurement was
performed at a scan rate of 0.5 C min1, frequency of 1 Hz,
oscillating applied stress of 3 Pa during cooling from 35 to 5 C and
heating from 5 to 35 C. The gelling and melting temperatures were
calculated, where tan d became 1 or d was 45.
2.6.2. Determination of microstructure
The microstructure of gelatin gel without and with EECH (0.5
and 5 mg g1) were visualized using a scanning electron microscopy
(SEM). Gelatin gels having a thickness of 2e3 mmwere fixed
with 2.5 mL 100 mL1 glutaraldehyde in 0.2 M phosphate buffer
(pH 7.2) for 12 h. The samples were then rinsed with distilled water
for 1 h and dehydrated in ethanol with a serial concentration of 25,
50, 70, 80, 90 and 100 mL1. Dried samples were mounted on a
bronze stub and sputter-coated with gold (Sputter coater SPIModule,
West Chester, PA, USA). The specimens were observed
0/5000
2.5.2 การ SDS polyacrylamide เจ electrophoresis (SDS-หน้า)SDSePAGE ที่ดำเนินการ โดยวิธีการของ Laemmli (1970)ตัวอย่างของเจได้ละลายใน 50 g L 1 SDS โซลูชัน ส่วนผสมถูกความร้อนแล้วที่ C 85 สำหรับ h 1 ที่ใช้อุณหภูมิในการควบคุมน้ำอ่างอาบน้ำรุ่น W350 (ความ Schwabach เยอรมนี) ที่ส่วนผสมมี centrifuged ที่ g 8500 สำหรับ 5 นาทีโดยใช้การ microcentrifuge(MIKRO20, Hettich Zentrifugan เยอรมนี 170) เอาเศษ undissolved ตัวอย่าง solubilized ถูกผสม 1:1 (v/v)อัตราส่วนกับบัฟเฟอร์ตัวอย่าง (โมล 0.5 L 1 TriseHCl ที่ประกอบด้วย pH 6.85 g 100 มล 1 SDS และกลีเซอร 200 mL L 1) ตัวอย่าง (15 มิลลิกรัมโปรตีนถูกโหลดลงเจ polyacrylamide ทำ 75 g L 1แยกเจและ 40 g L 1 ซ้อนเจ และอยู่ภายใต้การ electrophoresisที่กระแส 20 mA เจล 1 คง หลังจาก electrophoresisเจมีสี ด้วย 0.5 mL L 1 (w/v) Coomassie Blue R-250ใน 150 mL L 1 เมทานอลและ 50 mL L 1 กรดอะซิติกใน 30 นาทีในที่สุด พวกเขาได้ destained ด้วยส่วนผสมของเมทานอล 300 มล. L 1และกรดอะซิติก 100 มล L 1 1 h และ destained อีกครั้งโดยการโซลูชั่นเดียวกันสำหรับเครื่องหมายโปรตีนสูงโมเลกุลน้ำหนัก 30 นาทีใช้ในการประเมินน้ำหนักโมเลกุลของโปรตีน2.5.3 การกำหนดสีของตุ๋นเจกำหนดสีของเจตุ๋นใช้แล็บฮันเตอร์เครื่อง (สี Flex ฮันเตอร์แล็บ Inc., Reston, VA สหรัฐอเมริกา) L * การ * และb * ค่าบ่งชี้ความสว่าง/ความสว่าง แดง/greenness และyellowness/blueness ตามลำดับ บันทึกการ เครื่องwarmed ใน 10 นาที และปรับเทียบมาตรฐานสีขาวผลต่างรวมสี (เดอ *) ได้คำนวณตามสมการต่อไปนี้ (Gennadios เวลเลอร์ Hanna, & Froning1996):เด * ¼ffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiðDL * Þ2 þ ðDa * Þ2 þ ðDb * Þ2qที่ DL * Da * และ Db * มีความแตกต่างระหว่างการให้สอดคล้องกับสีที่ขาวและพารามิเตอร์ของตัวอย่างมาตรฐาน (L * ¼ 93.6 เป็น * ¼ 0.94 และ b * ¼ 0.40)2.6. คุณสมบัติของเจลและตุ๋นรวมกับการเลือกระดับ EECH2.6.1 การกำหนด gelling และละลายอุณหภูมิGelling และละลายอุณหภูมิของตุ๋นโซลูชั่นที่ประกอบด้วยมี EECH ที่ความเข้มข้นที่เลือก (0.5 และ 5 mg g 1)วัดตามวิธีโบราณ Mulvaney และRegenstein (2010) ใช้ลารี่รีโอมควบคุมความเครียด (Rheo-ความเครียด 1, HAAKE คาร์ลส์รูเออ เยอรมนี) โซลูชั่นตุ๋น(6.67 กรัม 100 มล 1) ไม่มี และ EECH ได้เตรียมพร้อมในการลักษณะเดียวกันตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ การแก้ปัญหาได้ต่ำที่ 35 C สำหรับ 30 นาที เรขาคณิตการวัดรวม 3.5 ซมแผ่นขนานและช่องว่างถูกกำหนดที่ 1.0 มม. มีการประเมินดำเนินการในอัตราการสแกน C 0.5 นาที 1 ความถี่ 1 Hzเครียดใช้ 3 ขาป่าในระหว่างการทำความเย็นจาก 35 ถึง 5 C และความร้อนจาก 5 ไปราว 35 อุณหภูมิ gelling และละลายได้คำนวณ ที่ tan d เป็น 1 หรือ d เป็น 452.6.2 การกำหนดต่อโครงสร้างจุลภาคต่อโครงสร้างจุลภาคของตุ๋นเจมี และไม่ มี EECH (0.5และ 5 mg g 1) มี visualized ใช้ microscopy อิเล็กตรอนแบบสแกน(SEM) เจตุ๋นที่มีความหนาของ mmwere 2e3 ถาวรมี 2.5 mL 100 mL 1 glutaraldehyde ในบัฟเฟอร์ฟอสเฟต 0.2 M(pH 7.2) สำหรับ 12 h ตัวอย่างถูก rinsed ด้วยน้ำกลั่นแล้วสำหรับ 1 h และอบแห้งในเอทานอลกับสมาธิประจำ 2550, 70, 80, 90 และ 100 มล. 1 ตัวอย่างแห้งถูกติดตั้งบนตัวขั้วทองแดง และ sputter เคลือบทอง (Sputter coater SPIModuleเวสต์เชสเตอร์ PA สหรัฐอเมริกา) ไว้เป็นตัวอย่างถูกสังเกต
การแปล กรุณารอสักครู่..
2.5.2 ข่าวคราว SDS-อะคริเลต (SDS-PAGE)
SDSePAGE ได้ดำเนินการโดยวิธีการ Laemmli (1970).
ตัวอย่างเจลถูกกลืนหายไปใน 50 กรัม L 1 การแก้ปัญหา SDS ผสมถูกความร้อนแล้วที่ 85 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 1 ชั่วโมงโดยใช้อุณหภูมิควบคุมน้ำอาบน้ำรุ่นW350 (MEMMERT, Schwabach, เยอรมนี) ผสมถูกหมุนเหวี่ยงที่ 8,500 กรัมเป็นเวลา 5 นาทีโดยใช้ไมโคร(MIKRO20, Hettich Zentrifugan 170 เยอรมนี) เพื่อเอาเศษundissolved ตัวอย่างละลายผสมที่ 1: 1 (v / v) อัตราส่วนกับบัฟเฟอร์ตัวอย่าง (0.5 mol L 1 TriseHCl ค่า pH 6.8 ที่มี? 5 กรัม 100 มิลลิลิตร 1 SDS และ 200 มิลลิลิตร L 1 กลีเซอรอล) ตัวอย่าง (15 มิลลิกรัมโปรตีน) ถูกโหลดลงบนเจลอะคริเลตที่ทำจาก 75 กรัม L 1 แยกและเจล 40 กรัม L 1 ซ้อนและเจลภายใต้การอิเล็กในปัจจุบันคงที่ของเจล20 mA 1 หลังจากที่อิเลค, เจลที่ถูกย้อมด้วยสี 0.5 มิลลิลิตร L 1 (w / v) Coomassie สีน้ำเงิน R-250 ใน 150 มิลลิลิตร L 1 เมทานอลและ 50 มล L 1 กรดอะซิติกเป็นเวลา 30 นาที. ในที่สุดพวกเขาก็ถูก destained กับส่วนผสม 300 มิลลิลิตร L 1 เมทานอลและ100 มิลลิลิตร L 1 กรดอะซิติกเป็นเวลา 1 ชั่วโมงและ destained อีกครั้งกับการแก้ปัญหาเดียวกันเป็นเวลา30 นาที สูงน้ำหนักโมเลกุลเครื่องหมายโปรตีนที่ถูกนำมาใช้ในการประมาณน้ำหนักโมเลกุลของโปรตีน. 2.5.3 การกำหนดสีของเจลาตินเจลสีของเจลเจลาตินที่ได้รับการพิจารณาโดยใช้ห้องปฏิบัติการฮันเตอร์colorimeter (สี Flex เธ่แล็บอิงค์เรสตัน, VA, USA) L *, a * และข* แสดงให้เห็นค่าความสว่าง / ความสว่าง, สีแดง / เขียวและสีเหลือง/ สีน้ำเงินตามลำดับที่ถูกบันทึกไว้ colorimeter ได้รับความอบอุ่นเป็นเวลา 10 นาทีและสอบเทียบกับมาตรฐานสีขาว. ความแตกต่างที่รวมสี (DE *) ที่คำนวณได้ตามสมการดังต่อไปนี้(Gennadios, เวลเลอร์ฮันนาและ Froning, 1996): DE * þ DDA * TH2 þ DDB * TH2 คิวที่ DL * ดา * และ Db * ความแตกต่างระหว่างที่สอดคล้องพารามิเตอร์สีของตัวอย่างและของสีขาวมาตรฐาน(L * ¼ 93.6, a * ¼? 0.94 และ b * ¼ 0.40). 2.6 ลักษณะของเจลาตินและเจลรวมกับระดับ EECH เลือก 2.6.1 การกำหนดก่อเจลและอุณหภูมิละลายก่อเจลและอุณหภูมิละลายของโซลูชั่นเจลาตินที่มีEECH ที่ระดับความเข้มข้นที่เลือก (0.5 และ 5 มก. ก. 1) ได้รับการวัดตามวิธีของโบราณMulvaney และRegenstein (2010) โดยใช้ความเครียดควบคุม rheometer (Rheo - ความเครียด 1, HAAKE, คาร์ลส์, เยอรมนี) โซลูชั่นเจลาติน(6.67 กรัม 100 มิลลิลิตร 1) โดยไม่ EECH และได้จัดทำในลักษณะเดียวกับที่อธิบายไว้ก่อนหน้า วิธีการแก้ปัญหาที่ได้รับการอุ่นที่อุณหภูมิ 35 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 30 นาที เรขาคณิตวัดรวม 3.5 ซมแผ่นขนานและช่องว่างที่ถูกตั้งไว้ที่1.0 มม วัดที่ได้รับการดำเนินการที่มีอัตราการสแกน 0.5? C นาที 1 ความถี่ของ 1 เฮิรตซ์ความเครียดใช้การสั่นของ3 ป่าในช่วงการระบายความร้อน 35-5 องศาเซลเซียสและร้อน5-35 องศาเซลเซียส ก่อเจลและอุณหภูมิหลอมละลายได้รับการคำนวณที่กลายเป็นสีน้ำตาล d 1 หรือ d 45 ?. 2.6.2 การกำหนดจุลภาคจุลภาคของเจลเจลาตินโดยไม่ต้องมี EECH (0.5 และ 5 มก. ก. 1) ได้รับการมองเห็นโดยใช้กล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอนสแกน(SEM) เจลเจลาตินที่มีความหนาของ 2e3 mmwere คงที่2.5 มิลลิลิตร 100 มิลลิลิตร 1 glutaraldehyde ใน 0.2 M ฟอสเฟตบัฟเฟอร์(pH 7.2) สำหรับ 12 ชั่วโมง กลุ่มตัวอย่างที่ได้รับการล้างด้วยน้ำกลั่นเป็นเวลา 1 ชั่วโมงและแห้งในเอทานอลที่มีความเข้มข้นของอนุกรม 25, 50, 70, 80, 90 และ 100 มิลลิลิตร 1 ตัวอย่างแห้งที่ถูกติดตั้งอยู่บนต้นขั้วบรอนซ์และพ่นเคลือบด้วยทอง (พ่น Coater SPIModule, เวสต์เชสเตอร์, PA, สหรัฐอเมริกา) ตัวอย่างที่ถูกตั้งข้อสังเกต
SDSePAGE ได้ดำเนินการโดยวิธีการ Laemmli (1970).
ตัวอย่างเจลถูกกลืนหายไปใน 50 กรัม L 1 การแก้ปัญหา SDS ผสมถูกความร้อนแล้วที่ 85 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 1 ชั่วโมงโดยใช้อุณหภูมิควบคุมน้ำอาบน้ำรุ่นW350 (MEMMERT, Schwabach, เยอรมนี) ผสมถูกหมุนเหวี่ยงที่ 8,500 กรัมเป็นเวลา 5 นาทีโดยใช้ไมโคร(MIKRO20, Hettich Zentrifugan 170 เยอรมนี) เพื่อเอาเศษundissolved ตัวอย่างละลายผสมที่ 1: 1 (v / v) อัตราส่วนกับบัฟเฟอร์ตัวอย่าง (0.5 mol L 1 TriseHCl ค่า pH 6.8 ที่มี? 5 กรัม 100 มิลลิลิตร 1 SDS และ 200 มิลลิลิตร L 1 กลีเซอรอล) ตัวอย่าง (15 มิลลิกรัมโปรตีน) ถูกโหลดลงบนเจลอะคริเลตที่ทำจาก 75 กรัม L 1 แยกและเจล 40 กรัม L 1 ซ้อนและเจลภายใต้การอิเล็กในปัจจุบันคงที่ของเจล20 mA 1 หลังจากที่อิเลค, เจลที่ถูกย้อมด้วยสี 0.5 มิลลิลิตร L 1 (w / v) Coomassie สีน้ำเงิน R-250 ใน 150 มิลลิลิตร L 1 เมทานอลและ 50 มล L 1 กรดอะซิติกเป็นเวลา 30 นาที. ในที่สุดพวกเขาก็ถูก destained กับส่วนผสม 300 มิลลิลิตร L 1 เมทานอลและ100 มิลลิลิตร L 1 กรดอะซิติกเป็นเวลา 1 ชั่วโมงและ destained อีกครั้งกับการแก้ปัญหาเดียวกันเป็นเวลา30 นาที สูงน้ำหนักโมเลกุลเครื่องหมายโปรตีนที่ถูกนำมาใช้ในการประมาณน้ำหนักโมเลกุลของโปรตีน. 2.5.3 การกำหนดสีของเจลาตินเจลสีของเจลเจลาตินที่ได้รับการพิจารณาโดยใช้ห้องปฏิบัติการฮันเตอร์colorimeter (สี Flex เธ่แล็บอิงค์เรสตัน, VA, USA) L *, a * และข* แสดงให้เห็นค่าความสว่าง / ความสว่าง, สีแดง / เขียวและสีเหลือง/ สีน้ำเงินตามลำดับที่ถูกบันทึกไว้ colorimeter ได้รับความอบอุ่นเป็นเวลา 10 นาทีและสอบเทียบกับมาตรฐานสีขาว. ความแตกต่างที่รวมสี (DE *) ที่คำนวณได้ตามสมการดังต่อไปนี้(Gennadios, เวลเลอร์ฮันนาและ Froning, 1996): DE * þ DDA * TH2 þ DDB * TH2 คิวที่ DL * ดา * และ Db * ความแตกต่างระหว่างที่สอดคล้องพารามิเตอร์สีของตัวอย่างและของสีขาวมาตรฐาน(L * ¼ 93.6, a * ¼? 0.94 และ b * ¼ 0.40). 2.6 ลักษณะของเจลาตินและเจลรวมกับระดับ EECH เลือก 2.6.1 การกำหนดก่อเจลและอุณหภูมิละลายก่อเจลและอุณหภูมิละลายของโซลูชั่นเจลาตินที่มีEECH ที่ระดับความเข้มข้นที่เลือก (0.5 และ 5 มก. ก. 1) ได้รับการวัดตามวิธีของโบราณMulvaney และRegenstein (2010) โดยใช้ความเครียดควบคุม rheometer (Rheo - ความเครียด 1, HAAKE, คาร์ลส์, เยอรมนี) โซลูชั่นเจลาติน(6.67 กรัม 100 มิลลิลิตร 1) โดยไม่ EECH และได้จัดทำในลักษณะเดียวกับที่อธิบายไว้ก่อนหน้า วิธีการแก้ปัญหาที่ได้รับการอุ่นที่อุณหภูมิ 35 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 30 นาที เรขาคณิตวัดรวม 3.5 ซมแผ่นขนานและช่องว่างที่ถูกตั้งไว้ที่1.0 มม วัดที่ได้รับการดำเนินการที่มีอัตราการสแกน 0.5? C นาที 1 ความถี่ของ 1 เฮิรตซ์ความเครียดใช้การสั่นของ3 ป่าในช่วงการระบายความร้อน 35-5 องศาเซลเซียสและร้อน5-35 องศาเซลเซียส ก่อเจลและอุณหภูมิหลอมละลายได้รับการคำนวณที่กลายเป็นสีน้ำตาล d 1 หรือ d 45 ?. 2.6.2 การกำหนดจุลภาคจุลภาคของเจลเจลาตินโดยไม่ต้องมี EECH (0.5 และ 5 มก. ก. 1) ได้รับการมองเห็นโดยใช้กล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอนสแกน(SEM) เจลเจลาตินที่มีความหนาของ 2e3 mmwere คงที่2.5 มิลลิลิตร 100 มิลลิลิตร 1 glutaraldehyde ใน 0.2 M ฟอสเฟตบัฟเฟอร์(pH 7.2) สำหรับ 12 ชั่วโมง กลุ่มตัวอย่างที่ได้รับการล้างด้วยน้ำกลั่นเป็นเวลา 1 ชั่วโมงและแห้งในเอทานอลที่มีความเข้มข้นของอนุกรม 25, 50, 70, 80, 90 และ 100 มิลลิลิตร 1 ตัวอย่างแห้งที่ถูกติดตั้งอยู่บนต้นขั้วบรอนซ์และพ่นเคลือบด้วยทอง (พ่น Coater SPIModule, เวสต์เชสเตอร์, PA, สหรัฐอเมริกา) ตัวอย่างที่ถูกตั้งข้อสังเกต
การแปล กรุณารอสักครู่..
งานวาง . SDS polyacrylamide gel electrophoresis ( SDS-PAGE )
sdsepage โดยใช้วิธี laemmli ( 1970 ) .
ตัวอย่างเจลละลาย 50 กรัม ผม 1 ซีโซลูชั่น ส่วนผสม
แล้วอุณหภูมิ 85 C เป็นเวลา 1 ชั่วโมง ใช้ควบคุมอุณหภูมิน้ำอาบแบบ w350
( MEMMERT Schwabach , เยอรมนี )
ผสมอยู่ระดับที่ 8500 กรัมเป็นเวลา 5 นาทีโดยใช้ไมโครเซนตริฟิวจ์ ( mikro20
,zentrifugan Hettich 170 เยอรมัน ) เพื่อเอา
undissolved เศษเล็กเศษน้อย ตัวอย่างสารละลายผสมที่อัตราส่วน 1 : 1 ( v / v )
อัตราส่วนกับจำนวนบัฟเฟอร์ ( 0.5 โมล ผม 1 trisehcl pH 6.8 ประกอบด้วย
5 G 100 ml 1 SDS และฉัน 1 รอล 200 ml ) ตัวอย่าง ( 15 มก.
โปรตีน ) ถูกโหลดไปยัง polyacrylamide gel ให้ 75 g l 1
เจล 40 กรัมต่อลิตรและแยก 1 ซ้อนภายใต้ electrophoresis
เจลและณปัจจุบันคงที่ 20 มาเจล 1 หลังจากอิเล็ก
เจลถูกย้อมด้วย 0.5 ml ผม 1 ( w / v ) เหล่านี้น่าจะเป็นสีฟ้า r-250
ใน 150 มิลลิลิตร 1 L เมทานอลและ 50 มล. กรด L 1 เป็นเวลา 30 นาที
ในที่สุด พวกเขา destained ที่มีส่วนผสมของ 300 มล. ล. 1
เมทานอลและฉัน 1 100 มล. กรดน้ำส้ม 1 H และ destained อีกครั้งกับ
โซลูชั่นเดียวกันเป็นเวลา 30 นาที สูง น้ำหนัก โมเลกุลโปรตีนเครื่องหมาย
ใช้คำนวณน้ำหนักโมเลกุลของโปรตีน .
2.5.3 . การกำหนดสี วุ้นเจล
สีวุ้นเจลจึงตัดสินใจใช้ Hunter Lab
colorimeter ( สีเฟล็กซ์ , Hunter Lab Inc , Reston , VA , USA ) L * a * b * ค่าความสว่าง /
แสดงความสว่าง , สีแดงและสีเหลือง / สีฟ้า / สีเขียว
) ถูกบันทึกไว้ พวก colorimeter
ถูกเปิด 10 นาทีและสอบเทียบกับมาตรฐานสีขาว
ความแตกต่างรวมสี ( de * ) คำนวณได้จากสมการดังนี้ (
gennadios เวลเลอร์ แฮนน่า & froning
, 1996 ) :
* ¼เดอ ffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffi ð DL * Þ 2 þðดา * Þ 2 þð * Þ
q
2 ดีบีที่ DL * ดา * db * ความแตกต่างระหว่างที่
สีพารามิเตอร์ของตัวอย่างและของมาตรฐานสีขาว
( L * ¼ 93.6 , * ¼ 0.94 และ B * ¼ 0.40 ) .
2.6 คุณสมบัติของเจลาติน และเจล รวมกับ eech ระดับ
เลือกดูแล . การกำหนดและ gelling อุณหภูมิละลาย
gelling ละลายเจลาตินและอุณหภูมิของสารละลาย
eech ที่เลือกความเข้มข้นร้อยละ 0.5 และ 5 มิลลิกรัมต่อ 1 )
วัดต่อไปนี้วิธีโบราณและมัลเวนีย์ , ,
regenstein ( 2010 ) ที่ใช้ควบคุมระบบความเครียด ( rheo -
เครียด 1 ฮาก Karlsruhe , เยอรมนี ) เจลาตินโซลูชั่น
( 6.67 กรัม 100 ml 1 ) มี eech เตรียมใน
ลักษณะเดียวกันตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ . สารละลายตั้ง
ที่ 35 C เป็นเวลา 30 นาทีการวัดเรขาคณิตรวม 3.5 cm
ขนานจานและช่องว่างไว้ที่ 1.0 มม. การวัดคือ
ดำเนินการสแกนอัตรา 0.5 C มิน 1 ความถี่ 1 Hz
สั่นใช้ความเครียดของ PA 3 ช่วงเย็น จาก 35 ถึง 5 C
ความร้อนจาก 5 ถึง 35 C และอุณหภูมิหลอม gelling
คำนวณที่ตันเป็น 1 D หรือ D คือ 45 .
ดาวน์โหลด . การวิเคราะห์โครงสร้างจุลภาค
โครงสร้างของเจลลาตินมี eech ( 0.5
และ 5 มิลลิกรัมต่อ 1 ) เป็นปรากฏการณ์ที่ใช้สแกน
อิเล็กตรอนแบบส่องกราด ( SEM ) เจลาตินเจลมีความหนา 2e3 mmwere คงที่
2.5 ml 100 ml 1 glutaraldehyde ใน 0.2 M phosphate buffer pH 7.2
) 12 ชั่วโมง จำนวน แล้วล้างด้วยน้ำกลั่น
1 H และขาดน้ำในเอทานอลกับอนุกรม
ความเข้มข้น 25 , 50 , 70 , 8090 และ 100 ml 1 แห้งติดบน
ทองเหลืองและเคลือบด้วยทอง ( ก้นปะทุละล่ำละลัก spimodule
เครื่องเคลือบ , เวสต์เชสเตอร์ , PA , USA ) ทำการสังเกต
sdsepage โดยใช้วิธี laemmli ( 1970 ) .
ตัวอย่างเจลละลาย 50 กรัม ผม 1 ซีโซลูชั่น ส่วนผสม
แล้วอุณหภูมิ 85 C เป็นเวลา 1 ชั่วโมง ใช้ควบคุมอุณหภูมิน้ำอาบแบบ w350
( MEMMERT Schwabach , เยอรมนี )
ผสมอยู่ระดับที่ 8500 กรัมเป็นเวลา 5 นาทีโดยใช้ไมโครเซนตริฟิวจ์ ( mikro20
,zentrifugan Hettich 170 เยอรมัน ) เพื่อเอา
undissolved เศษเล็กเศษน้อย ตัวอย่างสารละลายผสมที่อัตราส่วน 1 : 1 ( v / v )
อัตราส่วนกับจำนวนบัฟเฟอร์ ( 0.5 โมล ผม 1 trisehcl pH 6.8 ประกอบด้วย
5 G 100 ml 1 SDS และฉัน 1 รอล 200 ml ) ตัวอย่าง ( 15 มก.
โปรตีน ) ถูกโหลดไปยัง polyacrylamide gel ให้ 75 g l 1
เจล 40 กรัมต่อลิตรและแยก 1 ซ้อนภายใต้ electrophoresis
เจลและณปัจจุบันคงที่ 20 มาเจล 1 หลังจากอิเล็ก
เจลถูกย้อมด้วย 0.5 ml ผม 1 ( w / v ) เหล่านี้น่าจะเป็นสีฟ้า r-250
ใน 150 มิลลิลิตร 1 L เมทานอลและ 50 มล. กรด L 1 เป็นเวลา 30 นาที
ในที่สุด พวกเขา destained ที่มีส่วนผสมของ 300 มล. ล. 1
เมทานอลและฉัน 1 100 มล. กรดน้ำส้ม 1 H และ destained อีกครั้งกับ
โซลูชั่นเดียวกันเป็นเวลา 30 นาที สูง น้ำหนัก โมเลกุลโปรตีนเครื่องหมาย
ใช้คำนวณน้ำหนักโมเลกุลของโปรตีน .
2.5.3 . การกำหนดสี วุ้นเจล
สีวุ้นเจลจึงตัดสินใจใช้ Hunter Lab
colorimeter ( สีเฟล็กซ์ , Hunter Lab Inc , Reston , VA , USA ) L * a * b * ค่าความสว่าง /
แสดงความสว่าง , สีแดงและสีเหลือง / สีฟ้า / สีเขียว
) ถูกบันทึกไว้ พวก colorimeter
ถูกเปิด 10 นาทีและสอบเทียบกับมาตรฐานสีขาว
ความแตกต่างรวมสี ( de * ) คำนวณได้จากสมการดังนี้ (
gennadios เวลเลอร์ แฮนน่า & froning
, 1996 ) :
* ¼เดอ ffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffi ð DL * Þ 2 þðดา * Þ 2 þð * Þ
q
2 ดีบีที่ DL * ดา * db * ความแตกต่างระหว่างที่
สีพารามิเตอร์ของตัวอย่างและของมาตรฐานสีขาว
( L * ¼ 93.6 , * ¼ 0.94 และ B * ¼ 0.40 ) .
2.6 คุณสมบัติของเจลาติน และเจล รวมกับ eech ระดับ
เลือกดูแล . การกำหนดและ gelling อุณหภูมิละลาย
gelling ละลายเจลาตินและอุณหภูมิของสารละลาย
eech ที่เลือกความเข้มข้นร้อยละ 0.5 และ 5 มิลลิกรัมต่อ 1 )
วัดต่อไปนี้วิธีโบราณและมัลเวนีย์ , ,
regenstein ( 2010 ) ที่ใช้ควบคุมระบบความเครียด ( rheo -
เครียด 1 ฮาก Karlsruhe , เยอรมนี ) เจลาตินโซลูชั่น
( 6.67 กรัม 100 ml 1 ) มี eech เตรียมใน
ลักษณะเดียวกันตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ . สารละลายตั้ง
ที่ 35 C เป็นเวลา 30 นาทีการวัดเรขาคณิตรวม 3.5 cm
ขนานจานและช่องว่างไว้ที่ 1.0 มม. การวัดคือ
ดำเนินการสแกนอัตรา 0.5 C มิน 1 ความถี่ 1 Hz
สั่นใช้ความเครียดของ PA 3 ช่วงเย็น จาก 35 ถึง 5 C
ความร้อนจาก 5 ถึง 35 C และอุณหภูมิหลอม gelling
คำนวณที่ตันเป็น 1 D หรือ D คือ 45 .
ดาวน์โหลด . การวิเคราะห์โครงสร้างจุลภาค
โครงสร้างของเจลลาตินมี eech ( 0.5
และ 5 มิลลิกรัมต่อ 1 ) เป็นปรากฏการณ์ที่ใช้สแกน
อิเล็กตรอนแบบส่องกราด ( SEM ) เจลาตินเจลมีความหนา 2e3 mmwere คงที่
2.5 ml 100 ml 1 glutaraldehyde ใน 0.2 M phosphate buffer pH 7.2
) 12 ชั่วโมง จำนวน แล้วล้างด้วยน้ำกลั่น
1 H และขาดน้ำในเอทานอลกับอนุกรม
ความเข้มข้น 25 , 50 , 70 , 8090 และ 100 ml 1 แห้งติดบน
ทองเหลืองและเคลือบด้วยทอง ( ก้นปะทุละล่ำละลัก spimodule
เครื่องเคลือบ , เวสต์เชสเตอร์ , PA , USA ) ทำการสังเกต
การแปล กรุณารอสักครู่..
ภาษาอื่น ๆ
การสนับสนุนเครื่องมือแปลภาษา: กรีก, กันนาดา, กาลิเชียน, คลิงออน, คอร์สิกา, คาซัค, คาตาลัน, คินยารวันดา, คีร์กิซ, คุชราต, จอร์เจีย, จีน, จีนดั้งเดิม, ชวา, ชิเชวา, ซามัว, ซีบัวโน, ซุนดา, ซูลู, ญี่ปุ่น, ดัตช์, ตรวจหาภาษา, ตุรกี, ทมิฬ, ทาจิก, ทาทาร์, นอร์เวย์, บอสเนีย, บัลแกเรีย, บาสก์, ปัญจาป, ฝรั่งเศส, พาชตู, ฟริเชียน, ฟินแลนด์, ฟิลิปปินส์, ภาษาอินโดนีเซี, มองโกเลีย, มัลทีส, มาซีโดเนีย, มาราฐี, มาลากาซี, มาลายาลัม, มาเลย์, ม้ง, ยิดดิช, ยูเครน, รัสเซีย, ละติน, ลักเซมเบิร์ก, ลัตเวีย, ลาว, ลิทัวเนีย, สวาฮิลี, สวีเดน, สิงหล, สินธี, สเปน, สโลวัก, สโลวีเนีย, อังกฤษ, อัมฮาริก, อาร์เซอร์ไบจัน, อาร์เมเนีย, อาหรับ, อิกโบ, อิตาลี, อุยกูร์, อุสเบกิสถาน, อูรดู, ฮังการี, ฮัวซา, ฮาวาย, ฮินดี, ฮีบรู, เกลิกสกอต, เกาหลี, เขมร, เคิร์ด, เช็ก, เซอร์เบียน, เซโซโท, เดนมาร์ก, เตลูกู, เติร์กเมน, เนปาล, เบงกอล, เบลารุส, เปอร์เซีย, เมารี, เมียนมา (พม่า), เยอรมัน, เวลส์, เวียดนาม, เอสเปอแรนโต, เอสโทเนีย, เฮติครีโอล, แอฟริกา, แอลเบเนีย, โคซา, โครเอเชีย, โชนา, โซมาลี, โปรตุเกส, โปแลนด์, โยรูบา, โรมาเนีย, โอเดีย (โอริยา), ไทย, ไอซ์แลนด์, ไอร์แลนด์, การแปลภาษา.
- terrific
- หนทางเดียวที่จะมีวิถีชีวิตที่อิสระคือการ
- terrific
- to dampen demand by allowing prices
- แอมมี่
- There are seeds germinated 1 per day
- Think of You
- at least 3
- ไม่เห็นด้วย เพราะเขาเหมาะสมกับตำแหน่งและ
- 2.2 LIFETIME SURVEY The lifetime survey
- career
- mushrooms
- แตงกวา 1 ผลไข่ขาว 1 และมะนาว1 เสี้ยว ผสม
- intend
- ฉันรู้สึกไม่ดีฉันปวดหัวอีกแล้ว
- Hyunseung vì lý do cá nhân nên không tha
- ต้นไม้
- could you hold on please
- ถนนข้างเหลียวกับได้
- จิ๋มกระป๋อง
- Put the cheese balls in the fryer until
- ต้องการให้ผู้ป่วย
- Your Email Address entries do not match.
- I was assured of the results.
