Protective Effect of Aqueous Crude

Protective Effect of Aqueous Crude Extract of Neem(Azadirachta indica) Leaves on Plasmodium berghei-Induced
Renal Damage in Mice.

2. Materials and Methods
2.1. Crude Extract Preparation. The neem leaves were collected from Kanchanaburi province, Thailand. The plants
were identified in the Faculty of Pharmacy, Payap University.The leaves were cleaned and dried using hot air oven at 55∘C for 6 h and then they were powdered. The powder was used for the preparation of aqueous crude extract according to the procedure previously described with some modification [10]. The dried powders of neem leaves were boiled with
distilled water (plant :water = 1 : 20, w/v) for 6 h and then filtered. The filtrate was evaporated to dryness in a vacuum
evaporator to yield the aqueous crude extract of neem leaf. Before experiment, the neem leaf extract was dissolved in
20% Tween-80 at the doses of 500, 1,000, and 2,000mg/kg.

2.2. Mice. Female ICR mice obtained from the National Laboratory Animal Center,Mahidol University,Thailand, 4– 6weeks old,weighing 25 to 30gwere used for the study.They were given clean tap water and pelleted diet ad libitum. Allmouse procedures were approved by the Ethical Committee on Animal Experimentation, Faculty ofMedical Technology,Western University,Thailand.

2.3. Parasite Strain and Infection of Animals. Plasmodium bergheiANKA(PbANKA) obtained fromDr.ChairatUthaipibull from BIOTEC, NSTDA, Thailand, was used. Na¨ıve ICR mice were inoculated with 1 × 107 parasitized erythrocytes of PbANKA by intraperitoneal (IP) injection. Parasitemia was daily monitored by microscopy of Giemsa stained thin
blood smear. Additionally, renal markers including BUN and creatinine levels were also measured.

2.4. Measurements of Renal Markers. For determination of renal damage, BUN and creatinine levels were used as
markers in this study. Blood was collected from tail vein of mice into heparinized hematocrit tubes. Centrifugation was
then performed with 10,000 g for 10 min. Next, plasma was collected into a new 1.5-mL tube for measurement of BUN
and creatinine using commercially available diagnostic kits (BioSystems S. A. Costa Brava, Barcelona, Spain) according
to the manufacturer’s instructions.

2.5. Efficacy Test In Vivo. The standard 4-day suppressive test against PbANKA infection in mice was employed [21].
Groups of na¨ıve ICR mice (5 mice of each) were inoculated with 1 × 107 parasitized erythrocytes of PbANKA by IP
injection. They were subsequently treated with 500, 1,000, and 2,000mg/kg of neem leaf extract orally by gavage twice
a day for 4 consecutive days. Normal mice treated with or without 2,000mg/kg of extract were used as healthy controls,
while PbANKA infected mice treated with 20% Tween-80 were used as disease controls. On day 5 of experiment, blood
was collected for measurement of BUN and creatinine levels.

2.6. Statistical Analysis. The one-way ANOVA was used to analyze and compare the results at a 95% confidence level.
Values of

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ป้องกันผลของสารละลายน้ำมันดิบแยกของ Neem(Azadirachta indica) ใบบน berghei เกิดพลาสโมเดียมความเสียหายไตในหนู2. วัสดุและวิธีการ2.1. ดิบแยกเตรียม ใบสะเดาถูกรวบรวมจากจังหวัดกาญจนบุรี ประเทศไทย พืชมีระบุในการเภสัชศาสตร์ ใบ University.The พายัพถูกทำความสะอาด และแห้งโดยใช้เตาอบลมร้อนที่ 55∘C สำหรับ 6 h และพวกเขาผงแล้ว ผงที่ใช้สำหรับการเตรียมสารละลายน้ำมันดิบแยกตามขั้นตอนอธิบายไว้ก่อนหน้านี้ กับการปรับเปลี่ยนบางอย่าง [10] ผงแห้งของใบสะเดาถูกต้มด้วยน้ำกลั่น (พืช: น้ำ = 1:20, w/v) สำหรับ 6 h แล้ว ถูกกรอง การกรองถูกระเหยให้แห้งในสุญญากาศระเหยให้ผลดิบละลายสารสกัดของใบสะเดา ก่อนทดลอง สารสกัดจากใบสะเดาที่ละลายใน20% 80 แต่ที่ปริมาณของ 500, 1,000 และ 2, 000mg/kg 2.2. หนู เมาส์ ICR หญิงที่ได้รับจากศูนย์แห่งชาติห้องปฏิบัติการสัตว์ มหาวิทยาลัยมหิดล ประเทศไทย 4 – 6weeks 25 เก่า ชั่งน้ำหนักเพื่อ 30gwere ที่ใช้สำหรับการศึกษา พวกเขาได้รับน้ำสะอาดและอาหารสัตว์ ad libitum กระบวนการ Allmouse ได้รับการอนุมัติจากคณะกรรมการจริยธรรมในสัตว์ทดลอง ofMedical คณะเทคโนโลยี มหาวิทยาลัยเวสเทิร์น ไทย2.3. พยาธิสายพันธุ์และการติดเชื้อของสัตว์ ใช้ bergheiANKA(PbANKA) พลาสโมเดียมที่ได้รับ fromDr.ChairatUthaipibull จาก BIOTEC สวทช. ไทย เมาส์ Na¨ıve ICR ได้ inoculated กับเม็ดเลือดแดง 1 × 107 parasitized ของ PbANKA โดยการฉีด intraperitoneal (IP) แก้ไข Parasitemia วันที่ตรวจสอบ ด้วยกล้องจุลทรรศน์ของ Giemsa ย้อมบาง ๆเลอะเปื้อนเลือด นอกจากนี้ ไตหมายรวมถึงระดับ BUN และ creatinine ที่วัด2.4. การวัดของเครื่องหมายไต สำหรับการกำหนดความเสียหายไต ระดับ BUN และ creatinine ถูกใช้เป็นเครื่องหมายในการศึกษานี้ เลือดถูกรวบรวมจากหลอดเลือดดำหางของเมาส์ลงในหลอด heparinized hematocrit ถูกหมุนเหวี่ยงแล้ว ดำเนินการกับ 10,000 g 10 นาที ถัดไป เก็บพลาสม่าเข้าไปในหลอด 1.5 มิลลิลิตรใหม่วัดบุญและ creatinine ที่ใช้ในเชิงพาณิชย์ที่มีการวินิจฉัยชุด (ศาสตร์เชิงชีวภาพ S. A. มาดริด บาร์เซโลนา สเปน) ตามให้คำแนะนำของผู้ผลิต2.5. ประสิทธิภาพการทดสอบใน Vivo มาตรฐาน 4 วันทดสอบ suppressive กับติดเชื้อ PbANKA ในหนูแก้ไขส่วน [21]กลุ่มของ na¨ıve ICR ไมซ์ (mice 5 ของแต่ละ) ถูก inoculated กับเม็ดเลือดแดง 1 × 107 parasitized ของ PbANKA โดย IPฉีด พวกเขาในเวลาต่อมาได้รับการรักษา ด้วย 500, 1,000 และ 2, 000 มิลลิกรัม/กิโลกรัมของสะเดาใบแยกรับประทาน โดยทางหลอดอาหารสองครั้งวัน 4 วันติดต่อกัน หนูปกติถือว่ามี หรือไม่ มี 2, 000 มิลลิกรัม/กิโลกรัมของสารสกัดถูกใช้เป็นตัวควบคุมเพื่อสุขภาพในขณะที่ติดเชื้อ PbANKA หนูรักษา ด้วย 20% ใช้ 80 แต่เป็นการควบคุมโรค ในวันที่ 5 ของการทดลอง เลือดถูกรวบรวมสำหรับวัดระดับ BUN และ creatinine2.6. สถิติวิเคราะห์ ANOVA เดียวถูกใช้เพื่อวิเคราะห์ และเปรียบเทียบผลลัพธ์ที่ระดับความเชื่อมั่น 95%ค่า