Our earlier data, showing the ribos

Our earlier data, showing the ribosome to be a GEF for RF3 [9], prompted us to re-check the binding of free EF-G to GDP or GTP. The dissociation constant (KD) for the EF-G•GDP complex was about 9
M (Figure 2a), close to an earlier estimate of 4
M [12]. Results from experiments in which [3H]-GDP in complex with EF-G was chased with unlabeled and further purified GTP [9] (see below and Figure 4a for purification details), however, show a 60-fold larger effective KD-value for the binding of EF-G to GTP than to GDP (Figure 2b). This factor of 60 provides a lower boundary to the correct value, because purified GTP solu- tions do contain some fraction of GDP from the hydrolysis of GTP. The intracellular GTP:GDP ratio has been estimated as 7:1 for Salmonella enterica serovar Typhimurium [13], and is probably similar in E. coli. This suggests that a major frac- tion of free EF-G in E. coli is bound to GDP.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ข้อมูลก่อนหน้า ไรโบโซมจะ GEF สำหรับ rf3 หรือตู้แสดง [9], ได้รับการพร้อมท์ให้ตรวจสอบรวมของฟรี EF-GDP หรือ GTP ค่าคง dissociation (KD) สำหรับคอมเพล็กซ์ EF G•GDP มีประมาณ 9 M (รูป 2a), ใกล้การประเมินก่อนหน้านี้ม. 4 [12] ผลจากการทดลองในที่ [H 3] -GDP ในคอมเพล็กซ์กับ EF G ถูกตามล่า ด้วย GTP ไม่ และบริสุทธิ์ต่อไป [9] (ดูด้านล่างและ 4a รูปรายละเอียดฟอก), ไร แสดง 60-fold ใหญ่มีประสิทธิภาพ KD-ค่าสำหรับการรวมของ EF G GTP กว่ากับ GDP (รูปที่ 2b) 60 ปัจจัยนี้มีขอบเขตล่างค่าถูกต้อง บริสุทธิ์ GTP solu-tions มีบางส่วนของ GDP จากไฮโตรไลซ์ของ GTP อัตราส่วน intracellular GTP:GDP ได้โดยประมาณ 7:1 สำหรับระดับ enterica serovar Typhimurium [13], และอาจจะคล้ายใน E. coli แนะนำว่า ที่สำคัญ frac-สเตรชันของ EF G ฟรีใน E. coli ถูกผูกไว้กับ GDP

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ข้อมูลก่อนหน้านี้ของเราแสดงให้เห็นไรโบโซมที่จะ GEF สำหรับ RF3 [9], แจ้งให้เราตรวจสอบอีกครั้งผูกพันของฟรี EF-G เพื่อ GDP หรือฉี่ การแยกตัวออกคงที่ (KD) สำหรับ EF-G • GDP ที่ซับซ้อนเป็นประมาณ 9? M (รูปที่ 2a) ใกล้กับประมาณการก่อนหน้านี้ 4? M [12] ผลจากการทดลองที่ [3H] -GDP ซับซ้อนกับ EF-G ที่ถูกไล่ที่มีฉี่ไม่มีป้ายกำกับและบริสุทธิ์ต่อไป [9] (ดูด้านล่างและรูปที่ 4a สำหรับรายละเอียดการทำให้บริสุทธิ์) แต่แสดง 60 เท่ามีประสิทธิภาพขนาดใหญ่ KD-ค่า สำหรับการรวมของ EF-G เพื่อ GTP กว่าต่อ GDP (รูปที่ 2b) ปัจจัยนี้ 60 มีขอบเขตที่ต่ำกว่าค่าที่ถูกต้องเพราะบริสุทธิ์ฉี่ tions สารละลายจะมีส่วนของ GDP จากการย่อยสลายของฉี่ เซลล์ GTP: ต่อ GDP ได้รับการประเมินเป็น 7: 1 สำหรับ Salmonella enterica serovar Typhimurium [13] และอาจจะคล้ายกันในเชื้อ E. coli นี้แสดงให้เห็นว่าการ frac- สำคัญของฟรี EF-G ในเชื้อ E. coli ถูกผูกไว้กับจีดีพี

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ข้อมูลก่อนหน้านี้ของเราแสดงไรโบโซมเป็น GEF เพื่อ rf3 [ 9 ] , แจ้งให้เราอีกครั้งตรวจสอบผลผูกพันของ ef-g ฟรี GDP หรือ GTP . การแยกออกจากกันคง ( KD ) สำหรับ ef-g - GDP ที่ซับซ้อนได้ประมาณ 9
M ( รูปที่ 2A ) ใกล้เคียงกับประมาณการก่อนหน้านี้ 4 M
[ 12 ]ผลลัพธ์ที่ได้จากการทดลองที่ [ 3 ] - GDP ในซับซ้อนกับ ef-g ถูกไล่ด้วยใกล้เคียงเพิ่มเติมบริสุทธิ์และ GTP [ 9 ] ( ดูด้านล่างสำหรับรายละเอียดและรูป 4A ฟอก ) , อย่างไรก็ตาม , แสดง 60 พับขนาดใหญ่ที่มีประสิทธิภาพและคุ้มค่าผูกพันของ ef-g กับ GTP มากกว่า GDP ( รูปที่ 2B ) นี้ปัจจัย 60 มีขอบเขตล่างค่าถูกต้องเพราะบริสุทธิ์ GTP ซูลู - ใช้งานประกอบด้วยบางส่วนของ GDP จากการย่อยสลายของ GTP . GTP เซลล์ต่อ GDP ที่ได้ถูกประเมินเป็น 7 : 1 สำหรับ Salmonella typhimurium enterica ไน [ 13 ] และอาจจะคล้ายกันใน E . coli นี้ชี้ให้เห็นว่าเป็นหลัก frac - tion ของ ef-g ฟรีใน E . coli ถูกผูกไว้กับหลัก