We selected a panel of 75 bulls representing the three main
French beef breeds: Blonde d’Aquitaine (BLA, n = 30),
Charolais (CHA, n = 28) and Limousin (LIM, n = 17).
Using pedigree information obtained from the French
Centre de Traitement de l’Information Ge´ne´tique, animals
unrelated back to three generations were selected.
Genomic DNA samples were extracted from white
blood cells. Sixty microlitres of blood were distributed in
the well of a 96-well round-bottomed microtiter plate
(Thermo Fisher Scientific). After adding 150 ll of NE
buffer (10 mM NaCl, 10 mM EDTA, pH 7), the plates
were centrifuged at 1,500 9 g for 8 min. The supernatant
was discarded, and the white cells were washed with
200 ll of NE and centrifuged twice. After the last centrifugation,
the pellet was homogenized in 200 mM NaOH
(10 ll) and heated at 65 C for 30 min. The mixture was
neutralized with 100 mM Tris–HCl (10 ll; pH 7) and
diluted with 100 ll H2O. DNA concentrations were
determined by using PicoGreen quantification (Quant-IT
ds DNA Assay kit, Invitrogen). DNA samples were then
stored at -20 C.
เราเลือกแผงของวัว 75 แสดงถึงหลักสามฝรั่งเศสเนื้อสายพันธุ์: d'Aquitaine บลอนด์ (BLA, n = 30),Charolais (ชะอำ n = 28) และลีมูแซ็งทาง (LIM, n = 17)ใช้ข้อมูลสายเลือดฝรั่งเศสที่ได้รับศูนย์ l'Information de de Traitement Ge´ne´tique สัตว์เลือกกลับไปรุ่นที่สามที่ไม่เกี่ยวข้องกันตัวอย่างการถูกแยกจากสีขาวเซลล์เม็ดเลือด Microlitres หกสิบของเลือดถูกแจกจ่ายในดีของจาน microtiter พื้นรอบ 96 หลุม(เทอร์โมฟิชเชอร์ทางวิทยาศาสตร์) หลังจากเพิ่ม 150 จะของ NEบัฟเฟอร์ (10 mM NaCl, 10 mM EDTA ค่า pH 7), แผ่นถูกเหวี่ยงที่ 1,500 9 กรัมสำหรับ 8 นาที ใน supernatantถูกทิ้ง และเซลล์ขาวถูกล้างด้วย200 จะของ NE และเหวี่ยงสองครั้ง หลังจากหมุนเหวี่ยงครั้งสุดท้ายเม็ดถูก homogenized 200 มม. NaOH(10 ll) และอุ่น 65 c เป็นเวลา 30 นาที มีส่วนผสมneutralized ได้กับ 100 มม.ทริ – HCl (10 ll ค่า pH 7) และกับ 100 ll H2O มีความเข้มข้นของดีเอ็นเอกำหนด โดยใช้ด้าน PicoGreen (Quant-มันds วิเคราะห์ดีเอ็นเอชุด Invitrogen) ตัวอย่างได้แล้วเก็บไว้ที่-20 C.
การแปล กรุณารอสักครู่..
