The surface sterilization and isola

The surface sterilization and isolation of fungal endophytes were carried out by following the procedures described by Park et al The plant samples were washed thoroughly with running tap water to remove soil particles and rinsed six times with distilled water. The separated parts (roots, stems, leaves, and seeds; Fig. 1A) were immersed in 75% ethanol solution for 2–3 min, and subsequently transferred to 5.5% sodium hypochlorite solution for 1–2 min, depending on the different tissues. The surface-sterilized samples were rinsed three times with sterile distilled water and dried with sterile filter paper. Sterile samples were aseptically crumbled into small fragments, evenly placed on Petri dishes containing potato dextrose agar (PDA) with 100 mg/L ampicillin to inhibit bacterial growth. The Petri dishes were incubated at 28 ± 1°C until fungal growth started. To confirm that the disinfection process was successful, a 0.1-mL aliquot of the water used for the last washing step was spotted on PDA plates supplemented with 100 mg/L ampicillin, and incubated under the same conditions in parallel. Plates that were not detected as contaminated by cultivable microorganisms were considered as successfully surface disinfected and used for isolation of endophytes . The cultures were monitored every day to monitor the growth of endophytic fungi. Each colony that emerged from the fragments was transferred to antibiotic-free PDA medium (Fig. 1B), for subculture, and brought into pure culture.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ผิวฆ่าเชื้อและแยกเชื้อรา endophytes ได้ดำเนินการขั้นตอนที่อธิบายไว้โดย Park et al ตัวอย่างพืชล้างอย่างละเอียด ด้วยการใช้น้ำประปาเพื่อเอาอนุภาคดิน และล้างหกครั้ง ด้วยน้ำกลั่น ชิ้นส่วนแยก (ราก ลำต้น ใบ และ เมล็ด รูป 1A) แช่อยู่ใน 75% เอทานอลโซลูชั่นสำหรับ 2 – 3 นาที และต่อมาโอนไป 5.5% โซเดียมไรต์สำหรับ 1-2 นาที ขึ้นอยู่กับเนื้อเยื่อต่าง ๆ ตัวอย่างที่ผ่านการฆ่าเชื้อพื้นผิวล้าง 3 ครั้ง ด้วยน้ำกลั่นที่ผ่านการฆ่าเชื้อ และอบ ด้วยกระดาษกรองปลอดเชื้อ ตัวอย่างที่ผ่านการฆ่าเชื้อได้ aseptically ร่วงเป็นชิ้น ๆ เล็ก เท่า ๆ กันวางบนจานเพาะที่ประกอบด้วยมันฝรั่งเดกซ์โทรสวุ้น (PDA) กับโกคอ 100 mg/L ในการยับยั้งแบคทีเรีย ได้รับการกกอาหารเพาะที่ 28 ± 1° C จนเชื้อราเจริญเติบโตเริ่มต้น เพื่อยืนยันว่า กระบวนการฆ่าเชื้อเสร็จเรียบร้อย เป็นส่วนลงตัว 0.1 มิลลิลิตรของน้ำที่ใช้สำหรับการล้างขั้นตอนสุดท้ายถูกด่างบน PDA แผ่นเสริม ด้วยโกคอ 100 mg/L และรับการกกภายใต้เงื่อนไขเดียวกันพร้อมกัน แผ่นที่ตรวจพบขณะที่ปนเปื้อน ด้วยจุลินทรีย์ cultivable ไม่ถูกถือว่าเป็นพื้นผิวเรียบร้อยแล้วการฆ่าเชื้อ และใช้สำหรับแยกของ endophytes วัฒนธรรมถูกตรวจสอบทุกวันเพื่อตรวจสอบการเจริญเติบโตของเชื้อ endophytic แต่ละโคโลนีที่โผล่ออกมาจากชิ้นส่วนปราศจากยาปฏิชีวนะ PDA ปานกลาง (รูปที่ 1B), การโอนย้ายสำหรับวัฒนธรรม และนำเข้ามาในวัฒนธรรมบริสุทธิ์

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ฆ่าเชื้อพื้นผิวและการแยก endophytes เชื้อราได้ดำเนินการโดยทำตามขั้นตอนที่อธิบายโดยปาร์ค et al, ตัวอย่างพืชที่ถูกล้างให้สะอาดด้วยใช้น้ำประปาเพื่อเอาอนุภาคของดินและล้างหกครั้งด้วยน้ำกลั่น ส่วนที่แยกออกจากกัน (รากลำต้นใบและเมล็ด. รูปที่ 1A) ถูกนำมาแช่ในสารละลายเอทานอล 75% สำหรับ 2-3 นาทีและต่อมาได้โอนไป 5.5% สารละลายโซเดียมไฮโปคลอไรต์ 1-2 นาทีขึ้นอยู่กับเนื้อเยื่อที่แตกต่างกัน . ตัวอย่างพื้นผิวที่ผ่านการฆ่าเชื้อได้รับการล้างสามครั้งด้วยน้ำกลั่นผ่านการฆ่าเชื้อและอบด้วยกระดาษกรองผ่านการฆ่าเชื้อ ตัวอย่างหมันก็กระจัดกระจายปลอดเชื้อเป็นเศษเล็ก ๆ ที่วางไว้อย่างสม่ำเสมอบนจานเลี้ยงเชื้อที่มี potato dextrose agar (PDA) 100 มิลลิกรัม / ลิตร ampicillin ในการยับยั้งการเจริญเติบโตของแบคทีเรีย จาน Petri ถูกบ่มที่ 28 ± 1 ° C จนกระทั่งเริ่มเจริญเติบโตของเชื้อรา เพื่อยืนยันว่ากระบวนการฆ่าเชื้อที่ประสบความสำเร็จเป็นหาร 0.1 มิลลิลิตรของน้ำที่ใช้สำหรับขั้นตอนการซักผ้าที่ผ่านมาก็เห็นบนจาน PDA เสริมด้วย 100 มิลลิกรัม / ลิตร ampicillin และบ่มภายใต้เงื่อนไขเดียวกันในแบบคู่ขนาน แผ่นที่ไม่ได้ถูกตรวจพบว่าเป็นที่ปนเปื้อนจากจุลินทรีย์เพาะปลูกได้รับการพิจารณาเป็นประสบความสำเร็จในการฆ่าเชื้อพื้นผิวและใช้สำหรับการแยก endophytes วัฒนธรรมที่ถูกตรวจสอบทุกวันเพื่อตรวจสอบการเจริญเติบโตของเชื้อราเอนโดไฟท์ แต่ละอาณานิคมที่โผล่ออกมาจากชิ้นส่วนที่ถูกย้ายไปยาปฏิชีวนะฟรี PDA กลาง (รูปที่ 1B.) สำหรับวัฒนธรรมและนำเข้ามาในวัฒนธรรมบริสุทธิ์

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

พื้นผิวการฆ่าเชื้อและแยกเชื้อรา endophytes ได้ดำเนินการตามขั้นตอนที่อธิบายโดยปาร์ค et al พืชทำการล้างให้สะอาดด้วย ใช้น้ำประปาเพื่อเอาอนุภาคของดินและล้าง 6 ครั้งด้วยน้ำกลั่น แยกอะไหล่ ( ราก ลำต้น ใบ และเมล็ด ; รูปที่ 1A ) ถูกแช่ในสารละลายเอทานอล 75% เป็นเวลา 2 – 3 นาที และต่อมาย้ายไป 5.5 % โซเดียมไฮโซลูชั่นสำหรับ 1 – 2 นาที ขึ้นอยู่กับเนื้อเยื่อที่แตกต่างกัน การฆ่าเชื้อที่ผิวทำการล้างสามครั้งด้วยน้ำกลั่น แห้งและฆ่าเชื้อด้วยกระดาษกรองที่เป็นหมัน ตัวอย่างปลอดเชื้อได้ aseptically crumbled เป็นสะเก็ดเล็กๆ เท่า ๆ กันวางอยู่บนจานเลี้ยงเชื้อที่มีอาหารเลี้ยงเชื้อ potato dextrose agar ( PDA ) 100 มก. / ล. ampicillin ในการยับยั้งการเจริญเติบโตของเชื้อแบคทีเรีย จานเลี้ยงเชื้อที่อุณหภูมิ 28 ± 1 ° C ถึงการเจริญเติบโตเริ่มต้น เพื่อยืนยันว่า กระบวนการการประสบความสำเร็จ , 0.1-ml ส่วนลงตัวของน้ำที่ใช้สำหรับซักผ้า ขั้นตอนสุดท้ายคือด่างบน PDA แผ่นเสริม 100 มิลลิกรัม / ลิตร แอมพิซิลลิน และบ่มภายใต้เงื่อนไขเดียวกันในแบบคู่ขนาน จานที่ไม่พบการปนเปื้อนเชื้อจุลินทรีย์ เช่น เพาะปลูกเป็นผิวฆ่าเชื้อเรียบร้อยแล้ว และใช้ในการแยก endophytes . วัฒนธรรมที่ได้ตรวจสอบทุกวันเพื่อตรวจสอบการเจริญเติบโตของราเอนโดไฟต์ที่แยก . แต่ละกลุ่มที่ออกมาจากชิ้นส่วนที่ถูกย้ายกลางยาปฏิชีวนะฟรี PDA ( รูปที่ 1A ) , วัฒนธรรม , และนำเชื้อบริสุทธิ์