2.3. Measurement of DPP-IV and α-gl

2.3. Measurement of DPP-IV and α-glucosidase activity
An aliquot of 10 μL serum was incubated with 25 μL of 50 mmol/L HEPES buffer (pH 7.4) containing the Gly-ProAMC substrate (final substrate concentration 1 mmol/L). Appropriate concentration of the sample was mixed with 25 μL of HEPES buffer. After 1 h incubation, the reaction was stopped by the addition of 70 μL of 3 mol/L acetic acid. Then,released AMC was measured using a fluorescence microplate reader, Perkin Elmer Victor3 V 1420 Multilabel Plate Counter (Perkin Elmer, USA) at an excitation wavelength of 370 nm and an emission wavelength of 440 nm. Rat intestinal acetone powder was sonicated in normal saline (100:1, w/v), and after centrifugation at 3 000 r/min for 30 min, the supernatant was treated as a crude intestinal α-glucosidase. Ten microliters of the test samples were mixed and incubated with 50 μL of enzyme in a 96-well microplate for 5 min. The reaction mixture was further incubated another 10 min with 50 μL substrate [5 mmol/L, p-nitrophenyl-d-glucopyranoside, prepared in 100 mmol/L phosphate buffer (pH 6.8)]. Finally, the reaction was stopped by adding 50 μL of sodium carbonate (100 mmol/L), and the released nitrophenol was measured at 405 nm using a spectrophotometer (Immuno Mini NJ-2300, Japan).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.3. การวัดกิจกรรม DPP IV และα-glucosidase ส่วนลงตัวของซีรั่ม μL 10 incubated มี μL 25 50 mmol/L HEPES บัฟเฟอร์ (pH 7.4) ที่ประกอบด้วยพื้นผิว Gly ProAMC (พื้นผิวสุดท้ายเข้มข้น 1 โมล/L) ความเข้มข้นที่เหมาะสมของตัวอย่างถูกผสม ด้วย μL 25 HEPES บัฟเฟอร์ หลังจากบ่ม 1 h ปฏิกิริยาถูกหยุด โดยการเพิ่ม μL 70 ของกรด 3 mol/L แล้ว AMC ออกโดยวัดใช้อ่าน microplate เรืองแสง เพอร์เอลเมอ Victor3 V 1420 Multilabel แผ่นเคาน์เตอร์ (เพอร์เอลเมอ สหรัฐอเมริกา) ที่มีความยาวคลื่นกระตุ้น 370 nm และการปล่อยความยาวคลื่น 440 นาโนเมตร หนูลำไส้อะซีโตนผง sonicated ในน้ำเกลือปกติ (100: 1, w/v), และหลัง จากหมุนเหวี่ยงที่ 3 000 r/นาที 30 นาที supernatant ถูกถือว่าเป็นน้ำมันดิบลำไส้α-glucosidase Microliters สิบตัวอย่างทดสอบผสม และรับการกกกับ μL 50 ของเอนไซม์ในเครื่อง microplate 96 หลุม 5 นาที ส่วนผสมของปฏิกิริยาเพิ่มเติม incubated 10 นาทีกับพื้น μL 50 [5 mmol/L, p-nitrophenyl-d-glucopyranoside เตรียม 100 mmol/L ฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (pH 6.8)] ในที่สุด หยุดปฏิกิริยา โดยการเพิ่ม μL 50 ของโซเดียมคาร์บอเนต (100 mmol/L), และ nitrophenol ออกโดยวัดที่ 405 nm ใช้สเปค (กรัม NJ มินิ-2300 ญี่ปุ่น)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.3 การวัด DPP-IV และกิจกรรมα-glucosidase
หาร 10 ไมโครลิตรซีรั่มถูกบ่ม 25 ไมโครลิตร 50 มิลลิโมล / ลิตร HEPES บัฟเฟอร์ (pH 7.4) ที่มีสารตั้งต้น Gly-ProAMC (ความเข้มข้นของสารสุดท้าย 1 มิลลิโมล / ลิตร) ความเข้มข้นที่เหมาะสมของกลุ่มตัวอย่างได้รับการผสมกับ 25 ไมโครลิตรของ HEPES บัฟเฟอร์ หลังจาก 1 ชั่วโมงบ่มปฏิกิริยาก็หยุดโดยนอกเหนือจาก 70 ไมโครลิตรของ / L กรดอะซิติก 3 โมล แล้วปล่อยบบส. ได้รับการวัดโดยใช้เครื่องอ่านเรืองแสง microplate, เพอร์กินเอลเมอ Victor3 V 1420 Multilabel จานเคาน์เตอร์ (Perkin Elmer, สหรัฐอเมริกา) ที่ความยาวคลื่นกระตุ้น 370 นาโนเมตรและความยาวคลื่นปล่อย 440 นาโนเมตร หนูผงอะซีโตนลำไส้ถูก sonicated ในน้ำเกลือ (100: 1, w / v) และหลังจากการหมุนเหวี่ยงที่ 3 000 รอบ / นาทีเป็นเวลา 30 นาที, ใสได้รับการรักษาเป็นน้ำมันดิบลำไส้α-glucosidase สิบไมโครลิตรของตัวอย่างทดสอบถูกผสมและบ่ม 50 ไมโครลิตรของเอนไซม์ใน microplate 96 หลุมเป็นเวลา 5 นาที ผสมปฏิกิริยาถูกบ่มต่อไปอีก 10 นาทีกับ 50 ไมโครลิตรพื้นผิว [5 มิลลิโมล / ลิตร, p-Nitrophenyl-D-glucopyranoside เตรียมใน 100 มิลลิโมล / ลิตรฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (pH 6.8)] สุดท้ายปฏิกิริยาก็หยุดโดยการเพิ่ม 50 ไมโครลิตรโซเดียมคาร์บอเนต (100 มิลลิโมล / ลิตร) และปล่อยออกมา nitrophenol วัดที่ 405 นาโนเมตรโดยใช้สเปก (Immuno มินิ NJ-2300, ญี่ปุ่น)