All PCR reagentswere acquired from

All PCR reagents
were acquired from Promega, and fluorescently labeled primers
were synthesized by Integrated DNA Technologies. Triplicate 50 ml
PCRs contained 10 ml of 5 GoTaq Flexi Buffer, 3 ml of 25 mM MgCl2,
5 ml of dNTPs for 250 mM final concentration each, 4 ml of a 5 mM
stock of the forward primer 341F or EukA, 4 ml of a 5 mM stock of the
reverse primer 926R or Euk570rev, 0.5 ml 10 mg/ml acetylated BSA,
and 100 ng of template. Reactions were heated to 95 8C for 2 min,
then held at 80 8C while 1 U GoTaq Flexi DNA polymerase (Promega)
was added, and amplification was performed for 30 cycles of 95 8C
for 30 s, 57 8C (16S) or 55 8C (18S) for 30 s, and 72 8C for 1 min,
followed by a final extension at 72 8C for 5 min and a 4 8C hold. PCR
products were visualized on 1.2% agarose gels to confirm
amplification of products of the expected size. Replicate PCR
products were pooled and purified with Promega Wizard SV Gel and
PCR Clean-up System. The DNA was quantified by PicoGreen
staining (Invitrogen) and a Turner Designs TBS-380 Mini Fluorome-
ter. PCR products were treated with Klenow fragment (from
Promega) to fill in partially single-stranded amplicons (Egert
and Friedrich, 2005).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

Reagents PCR ทั้งหมดได้รับมาจาก Promega และ fluorescently ป้ายไพรเมอร์ถูกสังเคราะห์ ด้วยเทคโนโลยีดีเอ็นเอ Triplicate 50 mlPCRs อยู่ 10 ml ของบัฟเฟอร์ Flexi GoTaq 5, 3 มล.ของ MgCl2, 25 มม.5 ml ของ dNTPs สำหรับ 250 มม.สุดท้ายเข้มข้นละ ml 4 มม. 5หุ้นรองพื้นไปข้างหน้า 341F หรือ EukA, 4 ml ของคลัง 5 มม.กลับพื้น 926R หรือ Euk570rev, 0.5 ml 10 mg/ml acetylated บีเอสเอและ 100 ng ของแม่ ปฏิกิริยาที่อุณหภูมิ 95 8C ในนาทีที่ 2บริเวณ 80 8C ขณะ 1 U GoTaq Flexi ดีเอ็นเอพอลิเมอเรส (Promega)เพิ่ม และทำการขยายสำหรับรอบ 30 ของ 95 8Cสำหรับ 30 s, 8C 57 (16S) หรือ 8C 55 (18S) สำหรับ 30 s และ 72 8C ใน 1 นาทีตาม ด้วยนามสกุลเป็นขั้นสุดท้ายที่ 72 8C 4 8C และ 5 นาทีค้างไว้ PCRผลิตภัณฑ์มี visualized บน agarose 1.2% ยืนยันขยายผลิตภัณฑ์ขนาดคาดไว้ ทำ PCRผลิตภัณฑ์ทางถูกพู และบริสุทธิ์ที่ มี Promega ช่วยเอสเจ และระบบล้าง PCR ดีเอ็นเอถูก quantified โดย PicoGreenย้อมสี (Invitrogen) และเป็นช่างกลึงออกแบบ TBS 380 มินิ Fluorome-ter. ผลิตภัณฑ์ PCR ได้รับการรักษา ด้วยส่วน Klenow (จากPromega) ในบางส่วนเดียวควั่น amplicons (Egertและฟรีดริ ช 2005)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ทั้งหมดน้ำยา PCR
ได้มาจาก Promega และไพรเมอร์ที่มีข้อความ fluorescently
ถูกสังเคราะห์ดีเอ็นเอโดยเทคโนโลยีแบบบูรณาการ เพิ่มขึ้นสามเท่า 50 มล
PCRs บรรจุ 10 มล. 5? GoTaq Flexi บัฟเฟอร์ 3 มล. 25 มิลลิ MgCl2,
5 มิลลิลิตร dNTPs 250 มิลลิเข้มข้นสุดท้ายแต่ละ 4 มิลลิลิตร 5 มิลลิ
สต็อกของไพรเมอร์ไปข้างหน้า 341F หรือ EukA 4 มิลลิลิตรหุ้นมิลลิ 5 ของ
ไพรเมอร์กลับ 926R หรือ Euk570rev, 0.5 มล. 10 mg / ml acetylated บีเอสเอ
และ 100 นาโนกรัมของแม่แบบ ปฏิกิริยาถูกความร้อนถึง 95 8C สำหรับ 2 นาที
จากนั้นจัดขึ้นที่ 80 ในขณะที่ 8C 1 U GoTaq ดีเอ็นเอโพลิเมอร์ Flexi (Promega)
ได้รับการเพิ่มและขยายได้ดำเนินการเป็นเวลา 30 รอบ 95 8C
30 วินาที, 57 8C (16S) หรือ 55 8C (18S) เป็นเวลา 30 วินาทีและ 72 8C 1 นาที
ตามด้วยนามสกุลสุดท้ายที่ 72 8C เป็นเวลา 5 นาทีและ 4 8C ถือ PCR
ผลิตภัณฑ์ได้รับการมองเห็นใน 1.2% agarose เจลเพื่อยืนยัน
การขยายของผลิตภัณฑ์ที่มีขนาดที่คาดว่าจะ ทำซ้ำ PCR
ผลิตภัณฑ์ที่ได้รวบรวมและบริสุทธิ์ที่มีตัวช่วยสร้าง Promega เอเจลและ
PCR ระบบทำความสะอาด ปริมาณดีเอ็นเอโดย PicoGreen
ย้อมสี (Invitrogen) และเทอร์เนอออกแบบ TBS-380 มินิ Fluorome-
ตรี ผลิตภัณฑ์พีซีอาร์ได้รับการรักษาที่มีส่วน Klenow (จาก
Promega) เพื่อเติมเต็มในบางส่วน amplicons เดียวควั่น (Egert
และฟรีดริช, 2005)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ทั้งหมดได้มาจาก promega pcr reagents
,
fluorescently ติดป้ายและไพรเมอร์สังเคราะห์โดยดีเอ็นเอเทคโนโลยีแบบบูรณาการ ทำสำเนาสามฉบับ 50 ml
pcrs ที่มีอยู่ 10 ml 5  gotaq Flexi บัฟเฟอร์ , 3 ml ชุด 25 มม. ,
5 มิลลิลิตร dntps 250 มิลลิเมตรสุดท้ายของแต่ละ , 4 ml 5 mm
หุ้นของส่งต่อรองพื้น 341f หรือ euka , 4 ml 5 มิลลิเมตรหุ้นของ
กลับ 926r รองพื้นหรือ euk570rev , 0 .10 มก. / มล. ( ยาว 5 ml
100 ng ของแม่แบบ ปฏิกิริยาความร้อน 95 8C 2 มิน
จากนั้นจัดขึ้นที่ 80 8C ในขณะที่ 1 u gotaq ดีเอ็นเอพอลิเมอเรส ( promega Flexi )
ถูกเพิ่มและขยายได้ 30 รอบ 95 8C
30 , 57 8C ( 16S ) หรือ 55 8C ( 18S ) 30 , และ 72 8C สำหรับ 1 นาที ตามด้วยนามสกุล
สุดท้ายที่ 72 8C เป็นเวลา 5 นาทีและ 4 8C ถือ ผลิตภัณฑ์ PCR
เป็นภาพบน 12% ( เจลยืนยัน
( ผลิตภัณฑ์ที่คาดหวัง ) เลียนแบบผลิตภัณฑ์ PCR
ถูกรวมและทำให้บริสุทธิ์ ด้วยเจล SV ตัว promega
PCR และทำความสะอาดระบบ ดีเอ็นเอ quantified โดย picogreen
staining ( Invitrogen ) และหมุนแบบ tbs-380 มินิ fluorome -
เธอ . ผลิตภัณฑ์ทั้งหมดจะถูกรักษาด้วย klenow ~ (
promega ) เพื่อเติมเต็มในบางส่วนเดียวติด amplicons
( เอเกิร์ตและ ฟรีดริช , 2005 )