A SYBR Green™ I-based real-time mul

A SYBR Green™ I-based real-time multiplexed PCR assay was developed targeting invA and spvB for the detection of Salmonella strains in shellfish after both hns and invA genes were identified in all Salmonella strains. Simultaneously, the 16S rRNA gene was used as a PCR internal amplification control (IAC). All 89 Salmonella strains tested in this study exhibited amplification of invA, whereas only 21 (23.6 %) were PCR positive for spvB. The sensitivity of detection of all three targeted genes was 1 ng, which is equivalent to approximately 105 colony-forming unit (CFU) of Salmonella enterica. The analysis showed specific PCR products that were identified by reproducible melt temperature profiles (invA, 84.27 ± 1.7 °C; spvB, 88.76 ± 1.0 °C; and 16S rRNA gene, 87.16 ± 0.8 °C).The sensitivity of detection was 10 pg purified DNA (invA) or 105 CFU in 1 mL pure culture of S. enterica ATCC 14028. The above molecular detection method for Salmonella strains was successfully applied to the oyster homogenates (food matrix). An initial inoculum of 106 and 102 CFU Salmonella in 1 ml seeded oyster tissue homogenate was detected by multiplexed PCR for all three genes after 5 and 24 h of enrichment, respectively. Natural oysters isolated from Gulf of Mexico during the winter months exhibited negative PCR amplification results suggesting the absence of Salmonella. In contrast to conventional PCR, real-time multiplex PCR assay developed in this study is rapid and sensitive and will help Interstate Shellfish Sanitation Conference undertake appropriate measures to monitor Salmonella in oysters, thereby preventing disease outbreaks and consequently protecting consumer health.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

™ A SYBR Green ฉันตามเวลาจริง multiplexed PCR assay กล่าว invA และ spvB สำหรับการตรวจพบสายพันธุ์ซัลในหอยหลัง hns ทั้งในการกำหนดเป้าหมาย และระบุยีน invA ในสายพันธุ์ของสายทั้งหมด พร้อมกัน มีใช้ 16S rRNA ยีนเป็นตัวควบคุมขยายภายใน PCR (IAC) ทั้งหมด 89 สายสายพันธุ์ทดสอบในการศึกษานี้จัดแสดงขยาย invA ในขณะที่เพียง 21 (23.6%) ได้ค่าบวกสำหรับ spvB PCR ความไวของการตรวจยีนเป้าหมายที่สามทุก 1 ng ซึ่งจะเท่ากับประมาณ 105 เป็นโคโลนี (CFU) ของหน่วย enterica สาย แสดงให้เห็นว่าการวิเคราะห์เฉพาะ PCR ผลิตภัณฑ์ที่ระบุ โดยจำลองละลายอุณหภูมิโพรไฟล์ (invA, 84.27 ± 1.7 ° C; spvB, 88.76 ± 1.0 ° C และ ยีน 16S rRNA, 87.16 ± 0.8 ° C) ความไวของการตรวจสอบได้ 10 pg บริสุทธิ์ดีเอ็นเอ (invA) หรือ 105 CFU ในวัฒนธรรมบริสุทธิ์ 1 mL ของ S. enterica ATCC 14028 ที่เหนือตรวจสอบโมเลกุล วิธีสำหรับสายพันธุ์ซัลได้สำเร็จกับ homogenates หอยนางรม (อาหารเมตริกซ์) Inoculum การเริ่มต้นของ 106 และ 102 CFU ซัลใน 1 ml seeded หอยเนื้อเยื่อ homogenate พบ โดย PCR multiplexed ในยีนทั้งหมดสามหลัง 5 และ 24 h ของบ่อ ตามลำดับ หอยนางรมธรรมชาติที่แยกต่างหากจากอ่าวเม็กซิโกในช่วงเดือนหนาวจัดแสดงผลลัพธ์ขยาย PCR ลบแนะนำของสาย ตรงข้าม PCR ธรรมดา แบบเรียลไทม์ multiplex PCR assay พัฒนาในการศึกษานี้เป็นอย่างรวดเร็ว และมีความสำคัญ และจะช่วยอินเตอร์สเตตหอยสุขาภิบาลประชุมดำเนินมาตรการที่เหมาะสมเพื่อตรวจสอบระดับในหอยนางรม เพื่อป้องกันโรคระบาด และดังนั้น การป้องกันสุขภาพของผู้บริโภค

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

สีเขียว SYBR ™ฉันตามแบบ real-time PCR multiplexed ทดสอบได้รับการพัฒนาและกำหนดเป้​​าหมาย invA spvB​​ สำหรับการตรวจสอบสายพันธุ์ของเชื้อ Salmonella ในหอยหลังจาก HNS และยีน invA ถูกระบุในทุกสายพันธุ์เชื้อ Salmonella พร้อมกัน 16S rRNA ยีนถูกนำมาใช้เป็นตัวควบคุมขยาย PCR ภายใน (IAC) ทั้งหมด 89 สายพันธุ์เชื้อ Salmonella การทดสอบในการศึกษาครั้งนี้แสดงให้เห็นการขยายของ invA ขณะที่มีเพียง 21 (23.6%) เป็นวิธี PCR ในเชิงบวกสำหรับ spvB ความไวของการตรวจสอบของทั้งสามยีนเป้าหมายคือ 1 นาโนกรัมซึ่งเทียบเท่าประมาณ 105 หน่วยอาณานิคมขึ้นรูป (CFU) ของเชื้อ Salmonella enterica การวิเคราะห์แสดงให้เห็นว่าผลิตภัณฑ์พีซีอาร์เฉพาะที่ถูกระบุโปรไฟล์อุณหภูมิหลอมเหลวเลียน (invA, 84.27 ± 1.7 ° C; spvB​​, 88.76 ± 1.0 ° C และ 16S rRNA ยีน 87.16 ± 0.8 ° C) ความไวของการตรวจสอบได้โดยเริ่มต้นเป็น 10 หน้า ดีเอ็นเอบริสุทธิ์ (invA) หรือ 105 โคโลนีใน 1 มิลลิลิตรเชื้อบริสุทธิ์ของเอส enterica ATCC 14028. วิธีการตรวจจับโมเลกุลข้างต้นสำหรับสายพันธุ์เชื้อ Salmonella ถูกนำมาใช้ประสบความสำเร็จกับ homogenates หอยนางรม (เมทริกซ์อาหาร) หัวเชื้อเริ่มต้นของ 106 และ 102 CFU Salmonella ใน 1 มิลลิลิตร homogenate เนื้อเยื่อหอยนางรมเมล็ดถูกตรวจพบโดยวิธี PCR มัลติเพล็กสำหรับทั้งสามยีนหลังจาก 5 และ 24 ชั่วโมงของการเพิ่มปริมาณตามลำดับ หอยนางรมธรรมชาติที่แยกได้จากอ่าวเม็กซิโกในช่วงฤดู​​หนาวแสดงผลการขยาย PCR เชิงลบบอกตัวตนของเชื้อ Salmonella ในทางตรงกันข้ามกับวิธี PCR ธรรมดาแบบ real-time PCR ทดสอบหลายการพัฒนาในการศึกษาครั้งนี้เป็นไปอย่างรวดเร็วและมีความสำคัญและจะช่วยให้การประชุมรัฐหอยสุขาภิบาลดำเนินมาตรการที่เหมาะสมในการตรวจสอบเชื้อ Salmonella ในหอยนางรมจึงช่วยป้องกันการระบาดของโรคและทำให้การปกป้องสุขภาพของผู้บริโภค

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

เป็นสีเขียว SYBR ™ i-based เรียลไทม์มัลติเพลกซ์ PCR assay ถูกพัฒนาเป้าหมายและ inva spvb สำหรับตรวจเชื้อในหอย หลังทั้งคู่ hns inva และยีนระบุในสายพันธุ์ Salmonella ทั้งหมด ยีน 16S rRNA พร้อมกัน ใช้เป็นเชื้อภายในแบบควบคุม ( IAC ) ทั้งหมด 89 ซาลโมเนลลาสายพันธุ์ทดสอบในการศึกษานี้ได้มีการเพิ่ม inva ,ในขณะที่เพียง 21 ( 23.6 % ) PCR บวกสำหรับ spvb . ความไวของการตรวจหาทั้ง 3 ยีนเป้าหมายคือ 1 นาโนกรัม ซึ่งเท่ากับประมาณ 105 โคโลนีสร้าง unit ( CFU ) ของเชื้อซัลโมเนลลาที่ enterica . ผลการวิเคราะห์ผลิตภัณฑ์ PCR ที่เฉพาะเจาะจงที่ระบุซึ่งละลายโปรไฟล์อุณหภูมิ ( inva 84.27 ,  ±  1.7 ° C ; spvb 88.76 ,  ±  1.0 ° C ; และ 16S rRNA ยีน 87.16  ±  08 ° C ) ความไวของการตรวจหาอายุ 10 pg บริสุทธิ์ดีเอ็นเอ ( inva ) หรือ  105 CFU ใน 1 ml บริสุทธิ์วัฒนธรรมของเอส enterica ATCC 14028 . วิธีตรวจจับโมเลกุลข้างต้นสำหรับซาลโมเนลลาสายพันธุ์ถูกใช้เรียบร้อยแล้วกับหอยนางรม homogenates ( ฟู้ดเมทริกซ์ )เป็นเชื้อเริ่มต้นของ 106 และ 102  โคโลนีเชื้อ ใน 1 มิลลิลิตร ปริมาณเมล็ดหอยนางรมเนื้อเยื่อถูกตรวจพบโดยวิธี PCR มัลติเพลกซ์ทั้งสามตัวหลัง 5 และ 24 ชั่วโมงของการเพิ่มปริมาณ ตามลำดับ หอยนางรมธรรมชาติสกัดจากอ่าวเม็กซิโกในช่วงฤดูหนาวและลบ ( ผล PCR บอกว่าไม่มีเชื้อ Salmonella . ในทางตรงกันข้ามกับ PCR ธรรมดาวิธี multiplex PCR แบบเรียลไทม์ที่พัฒนาขึ้นในการศึกษานี้เป็นอย่างรวดเร็วและมีความละเอียดอ่อน และจะช่วยให้รัฐใช้มาตรการที่เหมาะสมเพื่อหอยการประชุมการตรวจสอบเชื้อ Salmonella ในหอยนางรม จึงช่วยป้องกันโรคระบาด และดังนั้นการปกป้องสุขภาพของผู้บริโภค