• endonucleaseTerminal sequences of

• endonuclease
Terminal sequences of RNA virus genomes have important regulatory functions in transcription and replication. The genome termini of negative-strand RNA viruses (NSV) are composed of inverted terminal repeats (ITRs), which represent promoter regions that control the asymmetric expression of genome (vRNA) and antigenome (cRNA). Replication usually initiates with a single nucleotide at the 3′ terminus of the template strand and in some NSV requires the direct interaction of the ITRs (1–3). Efficient amplification of viral genomic RNA, therefore, critically depends on the synthesis and maintenance of correct terminal sequences. Protection of terminal integrity is of particular relevance for RNA viruses that persist in vivo, because terminal genome deterioration during persistent infection has been described for several RNAviruses from distinct virus orders and families (4). Furthermore, 5′ triphosphate groups were identified as pathogen-associated molecular patterns that strongly contribute to the recognition of NSV by the innate immune system (5–7). It is therefore not surprising that many NSV developed sophisticated mechanisms to modify the terminal structures of their genomes. Segmented NSV of the Arena-, Bunya-, andOrthomyxovirus families use prime-and-realign mechanisms in which short, internally synthesized primers realign with the 3′ end of the template strand to initiate genome replication (8–11). This process regenerates the 5′ termini from internal templates during each round of replication and generates a triphosphorylated 5′ nucleotide without template function that can be removed by a nuclease activity of the viral polymerase (10).
Borna disease virus (BDV) has a nonsegmented RNA genome of negative polarity (12). Replication and transcription of the BDV genome occurs in the nucleus and is not associated with overt cytotoxicity (13), enabling the virus to establish long-term persistence in a variety of cultured cells and animals. The termini of BDV v- and cRNA molecules remain stable even after prolonged persistence and display unique characteristics, indicating that they are modified during the replication process. For example, we found that both molecules possess four nucleotides at their 3′ terminus that lack an apparent template at the 5′ end of the opposite strand (14). We initially proposed that the 5′ termini are generated by preferential internal initiation of replication on rare v- and cRNA molecules, providing the purportedly missing nucleotides at the 5′ terminus (14). However, this model has been challenged by the fact that all attempts to demonstrate the existence of these rare v- and cRNA molecules have failed. Furthermore, we recently found that the 5′ termini of the v- and cRNA molecules are mono- rather than triphosphorylated (7), indicating that enzymatic modification rather than simple internal initiation is responsible for the recessed 5′ termini. To explore alternative possibilities for the modification of the BDV termini, we generated a panel of recombinant viruses from cDNAs with distinct terminal mutations. Analyses of the terminal sequences of the recovered viruses revealed that the recessed 5′ terminus of the BDV genome is not a consequence of internal initiation of replication; rather, it is a consequence of elongation of the 3′ termini of v- and cRNA molecules, which occurs after the template strand has been copied. A picture emerges, which shows that the 3′ termini of the copied v- and cRNA molecules realign to internal sequence motifs on the newly synthesized strand that provide the template for the synthesis of the missing nucleotides.
Previous SectionNext Section
Results
3′ Termini of BDV v- and cRNA Are Not Synthesized from Standard Templates.

We previously showed that the genomic 3′ overhangs of BDV are maintained, even if BDV is recovered from an antigenome providing the purportedly missing nucleotides at the 5′ terminus (pBDVc) (Fig. 1A) (14). To challenge the internal initiation model, we modified pBDVc to encode altered terminal sequence motifs (pBDVc-CG) (Fig. 1A), or introduced terminal deletions of four nucleotides eliminating the sequence information for the v- and cRNA 3′ overhangs (pBDV) (Fig. 1A) or of five nucleotides removing, in addition to the sequence information for the 3′ overhangs, a single nucleotide from each end of the antigenome (pBDV-ΔGC) (Fig. 1A). Remarkably, constructs pBDVc-CG and pBDV were efficiently rescued, whereas construct pBDV-ΔGC failed to support the recovery of a recombinant virus in repeated attempts (Fig. 1B). Furthermore, the growth properties of BDVc-GC and BDV were indistinguishable from those of BDVc (Fig. 1B), indicating that pBDVc-CG and pBDV encoded fully functional BDV antigenomes.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

• endonucleaseลำดับที่เทอร์มินัลของอาร์เอ็นเอไวรัส genomes มีฟังก์ชันสำคัญกำกับดูแลใน transcription และจำลองแบบ เทอร์มินิจีโนมของสแตรนด์ลบอาร์เอ็นเอไวรัส (NSV) จะประกอบด้วยหัวเทอร์มินัลทำซ้ำ (ITRs), ซึ่งเป็นตัวแทนภูมิภาคโปรโมเตอร์ที่ควบคุมค่า asymmetric ของจีโนม (vRNA) และ antigenome (cRNA) จำลองแบบมักจะเริ่ม ด้วยนิวคลีโอไทด์หนึ่งที่นัส 3′ ของสาระแม่ และใน NSV บางต้องการโต้ตอบโดยตรงของ ITRs (1-3) ขยายประสิทธิภาพของอาร์เอ็นเอ genomic ไวรัส จึง ถึงขึ้นอยู่กับการสังเคราะห์และการบำรุงรักษาของเทอร์มินัลลำดับถูกต้อง ปกป้องความสมบูรณ์ของเทอร์มินัลมีความเกี่ยวข้องเฉพาะในไวรัสอาร์เอ็นเอที่คงอยู่ในสัตว์ทดลอง เนื่องจากมีการอธิบายกลุ่มเทอร์มินัลการเสื่อมสภาพในระหว่างการติดเชื้อแบบสำหรับหลาย RNAviruses จากไวรัสหมดสั่งและครอบครัว (4) นอกจากนี้ 5′ โนซีนไตรฟอสเฟตกลุ่มได้ระบุเป็นเชื่อมโยงการศึกษาโมเลกุลรูปแบบที่เกี่ยวข้องกับการรับรู้ของ NSV อย่างยิ่ง โดยระบบภูมิคุ้มกันโดยธรรมชาติ (5-7) จึงไม่น่าแปลกใจที่หลาย NSV พัฒนากลไกที่ซับซ้อนในการปรับเปลี่ยนโครงสร้างเทอร์มินัลของ genomes ของพวกเขา NSV แบ่งส่วนของเวที- Bunya- ครอบครัว andOrthomyxovirus ใช้นายก และจัดกลไกสั้น สังเคราะห์ภายในไพรเมอร์ปรับกับท้าย 3′ เดอะสแตรนด์แม่เริ่มจำลองจีโนม (8-11) กระบวนการนี้สร้างใหม่เทอร์มินิ 5′ จากแม่แบบภายในในแต่ละรอบของการจำลองแบบ และสร้างเป็น triphosphorylated 5′ นิวคลีโอไทด์ โดยฟังก์ชันต้นแบบที่สามารถเอาออก โดยกิจกรรม nuclease ของไวรัสพอลิเมอเรส (10)Borna โรคไวรัส (BDV) มีจีโนมเป็นอาร์เอ็นเอ nonsegmented ของขั้วลบ (12) จำลองแบบและ transcription ของจีโนม BDV เกิดนิวเคลียส และไม่เกี่ยวข้องกับแจ่มแจ้ง cytotoxicity (13), เปิดใช้งานไวรัสสร้างคงอยู่ระยะยาวในเซลล์อ่างและสัตว์ เทอร์มินิของโมเลกุล BDV v และ cRNA ยังคงมีเสถียรภาพแม้หลังจากคงอยู่นาน และแสดงลักษณะเฉพาะ การบ่งชี้ว่า มีการปรับเปลี่ยนระหว่างกระบวนการจำลองแบบ ตัวอย่าง เราพบว่า โมเลกุลทั้งสองมีสี่นิวคลีโอไทด์ที่นัส 3′ ของพวกเขาที่มีแม่แบบชัดเจนที่สุด 5′ ของเดอะสแตรนด์ตรงข้าม (14) เราเริ่มเสนอว่า เทอร์มินิ 5′ สร้างขึ้น โดยจำลองแบบบนหายาก v และ cRNA โมเลกุล ต้องคว้าภายในให้นิวคลีโอไทด์ purportedly หายไปที่เทอมินัส 5′ (14) อย่างไรก็ตาม รุ่นนี้มีการท้าทายที่ล้มทั้งหมดพยายามแสดงให้เห็นถึงการดำรงอยู่ของโมเลกุล v และ cRNA เหล่านี้หายาก นอกจากนี้ เราเพิ่งพบว่า เทอร์มินิ 5′ ของโมเลกุล v และ cRNA เป็นโมโน - มากกว่า triphosphorylated (7), ระบุการแก้ไขที่เอนไซม์ในระบบแทนที่เริ่มต้นภายในเรื่องรับผิดชอบเทอร์มินิ 5′ ขจัด การสำรวจโอกาสทางเลือกสำหรับการปรับเปลี่ยนเทอร์มินิ BDV เราสร้างแผงของไวรัส recombinant จาก cDNAs กับกลายพันธุ์เทอร์มินัลทั้งหมด วิเคราะห์ลำดับเทอร์มินัลของไวรัสกู้คืนเปิดเผยว่า นัส 5′ ขจัดของจีโนม BDV ไม่เวรภายในเริ่มต้นของการจำลองแบบ ค่อนข้าง มันเป็นสัจจะของ elongation ของเทอร์มินิ 3′ ของโมเลกุล v และ cRNA ซึ่งเกิดขึ้นหลังจากมีการคัดลอกสาระแม่ รูปภาพบ่งบอก ซึ่งแสดงว่า เทอร์มินิ 3′ คัดลอก v - และโมเลกุล cRNA จัดให้ลงลำดับภายในบนเดอะสแตรนด์สังเคราะห์ใหม่ที่มีแบบการสังเคราะห์นิวคลีโอไทด์ขาดหายไปส่วน SectionNext ก่อนหน้านี้ผลลัพธ์3′ วีเทอร์มินิ BDV - และ cRNA จะสังเคราะห์จากแบบมาตรฐาน เราก่อนหน้านี้พบว่า จะรักษา overhangs genomic 3′ ของ BDV แม้ BDV จะกู้คืนจากการ antigenome ให้นิวคลีโอไทด์ purportedly หายไปที่เทอมินัส 5′ (pBDVc) (Fig. 1A) (14) การท้าทายแบบจำลองเริ่มต้นภายใน เราปรับ pBDVc การเข้ารหัสความลำดับเปลี่ยนเทอร์มินัล (pBDVc-CG) (Fig. 1A), หรือลบสถานีนำนิวคลีโอไทด์ 4 ตัดข้อมูลลำดับสำหรับ v และ cRNA 3′ overhangs (pBDV) (Fig. 1A) หรือนิวคลีโอไทด์ 5 เอา นอกจากข้อมูลลำดับสำหรับ 3′ overhangs นิวคลีโอไทด์หนึ่งจากแต่ละจุดสิ้นสุดของ antigenome (pBDV-ΔGC) (Fig. 1A) อย่างยิ่ง โครงสร้าง pBDVc CG และ pBDV ได้อย่างมีประสิทธิภาพช่วย ขณะก่อสร้าง pBDV ΔGC ล้มเหลวในการสนับสนุนการฟื้นตัวของไวรัส recombinant ในความพยายามซ้ำ ๆ (Fig. 1B) นอกจากนี้ คุณสมบัติเจริญเติบโตของ BDVc GC และ BDV จำแนกไม่ได้จาก BDVc (Fig. 1B), ระบุที่ CG pBDVc และ pBDV เข้างาน BDV antigenomes

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

• endonuclease
ลำดับจีโนมของเทอร์มิไวรัส RNA มีหน้าที่สำคัญในการกำกับดูแลการถอดรหัสและการจำลองแบบ ปลายทางจีโนมของไวรัส RNA ลบสาระ (NSV) จะประกอบด้วยซ้ำขั้วฤๅษี (ITRs) ซึ่งเป็นตัวแทนของภูมิภาคโปรโมเตอร์ที่ควบคุมการแสดงออกที่ไม่สมมาตรของจีโนม (vRNA) และ antigenome (สีดำ) การจำลองแบบมักจะเริ่มต้นด้วยความเบื่อหน่ายเดียวที่ปลายทาง 3 'สาระแม่แบบและในบาง NSV ต้องมีปฏิสัมพันธ์โดยตรงของ ITRs (1-3) เครื่องขยายเสียงที่มีประสิทธิภาพของจีโนมอาร์เอ็นเอไวรัสดังนั้นวิกฤตขึ้นอยู่กับการสังเคราะห์และการบำรุงรักษาของลำดับขั้วที่ถูกต้อง การป้องกันของความซื่อสัตย์เป็นขั้วของความเกี่ยวข้องโดยเฉพาะอย่างยิ่งเพื่อป้องกันไวรัสอาร์เอ็นเอที่ยังคงมีอยู่ในร่างกายเนื่องจากการเสื่อมสภาพของจีโนมขั้วระหว่างการติดเชื้อถาวรได้รับการอธิบายสำหรับ RNAviruses จากหลายคำสั่งไวรัสที่แตกต่างและครอบครัว (4) นอกจากนี้ 5 'กลุ่ม triphosphate ถูกระบุว่าเป็นเชื้อโรคที่เกี่ยวข้องรูปแบบโมเลกุลที่ขอมีส่วนร่วมในการรับรู้ของ NSV จากระบบภูมิคุ้มกันโดยธรรมชาติ (5-7) ดังนั้นจึงเป็นเรื่องไม่น่าแปลกใจที่หลาย ๆ NSV พัฒนากลไกที่ซับซ้อนในการปรับเปลี่ยนโครงสร้างขั้วของจีโนมของพวกเขา คละคลุ้ง NSV ของ Arena-, Bunya- ครอบครัว andOrthomyxovirus ใช้กลไกที่สำคัญและปรับที่สั้นไพรเมอร์สังเคราะห์ภายในปรับกับปลาย 3 'ของแม่สาระที่จะเริ่มต้นการจำลองแบบจีโนม (8-11) กระบวนการนี้ regenerates 'ปลายทางจากแม่แบบภายในในระหว่างรอบของการจำลองแบบแต่ละคนและสร้าง triphosphorylated 5' 5 เบื่อหน่ายโดยไม่ต้องฟังก์ชั่นแม่แบบที่สามารถถอดออกได้โดยกิจกรรม nuclease ของโพลิเมอร์ไวรัส (10).
โรคไวรัส Borna (BDV) มี nonsegmented จีโนมอาร์เอ็นเอของขั้วลบ (12) การจำลองแบบและการถอดรหัสของจีโนม BDV เกิดขึ้นในนิวเคลียสและไม่ได้เกี่ยวข้องกับความเป็นพิษแจ่มแจ้ง (13) ช่วยให้ไวรัสที่จะสร้างความคงทนในระยะยาวในความหลากหลายของเซลล์เพาะเลี้ยงและสัตว์ ปลายทางของ V- BDV และโมเลกุลสีดำยังคงมีเสถียรภาพแม้หลังจากที่คงอยู่เป็นเวลานานและแสดงลักษณะที่ไม่ซ้ำกันแสดงให้เห็นว่าพวกเขามีการแก้ไขในระหว่างขั้นตอนการทำแบบจำลอง ตัวอย่างเช่นเราพบว่าโมเลกุลทั้งสี่มีนิวคลีโอที่ 3 ของพวกเขา 'ปลายทางที่ขาดแม่แบบเห็นได้ชัดที่ 5' ในตอนท้ายของสาระตรงข้าม (14) เราเริ่มเสนอว่า 5 'ปลายทางจะถูกสร้างโดยการเริ่มต้นภายในพิเศษของการจำลองแบบใน V- ที่หายากและโมเลกุลสีดำให้นิวคลีโอหายไปต้นฉบับที่ 5' ปลายทาง (14) แต่รุ่นนี้ได้รับการท้าทายจากข้อเท็จจริงที่ว่าพยายามทุกวิถีทางที่จะแสดงให้เห็นถึงการดำรงอยู่ของ V- หายากเหล่านี้และโมเลกุลสีดำได้ล้มเหลว นอกจากนี้เราเมื่อเร็ว ๆ นี้พบว่า 5 'ปลายทางของ V- และโมเลกุลสีดำเป็นขาวดำมากกว่า triphosphorylated (7) แสดงให้เห็นว่าการปรับเปลี่ยนเอนไซม์มากกว่าการเริ่มต้นภายในที่เรียบง่ายมีหน้าที่ในการปิดภาคเรียน 5' ปลายทาง เพื่อสำรวจความเป็นไปได้ทางเลือกสำหรับการเปลี่ยนแปลงของปลายทาง BDV เราสร้างแผงของไวรัส recombinant จาก cDNAs กับการกลายพันธุ์ที่แตกต่างขั้ว การวิเคราะห์ลำดับขั้วของไวรัสกู้คืนเปิดเผยว่าปิดภาคเรียน 5 'ปลายทางของจีโนม BDV ไม่ได้เป็นผลมาจากการเริ่มต้นของการจำลองแบบภายใน; ค่อนข้างมันเป็นผลมาจากการยืดตัวของปลายทาง 3 'ของโมเลกุล V- และสีดำซึ่งเกิดขึ้นหลังจากที่กลุ่มสาระแม่แบบที่ได้รับการคัดลอก ภาพโผล่ออกมาซึ่งแสดงให้เห็นว่า 3 'ปลายทางของ V- คัดลอกและโมเลกุลสีดำที่จะปรับลวดลายลำดับภายในเส้นใยสังเคราะห์ใหม่ที่ให้แม่แบบสำหรับการสังเคราะห์ของนิวคลีโอขาดหายไป.
ก่อนหน้ามาตรามาตรา
ผล
3 'Termini ของ BDV V- และสีดำมีการสังเคราะห์ไม่ได้มาจากแม่แบบมาตรฐาน. ก่อนหน้านี้เราแสดงให้เห็นว่าจีโนม 3 'ยื่นของ BDV จะรักษาแม้ว่า BDV มีการกู้คืนจาก antigenome ให้นิวคลีโอหายไปต้นฉบับที่ 5' ปลายทาง (pBDVc) (รูป. 1A ) (14) ที่จะท้าทายรูปแบบเริ่มต้นภายในเราแก้ไข pBDVc การเข้ารหัสขั้วสำคัญลำดับการเปลี่ยนแปลง (pBDVc-CG) (รูป. 1A) หรือแนะนำการลบสถานีสี่นิวคลีโอขจัดข้อมูลลำดับสำหรับ V- และกระเช้าสีดำ 3 '(pBDV) (รูป. 1A) หรือห้านิวคลีโอลบนอกเหนือจากข้อมูลลำดับสำหรับกระเช้า 3 ', เบื่อหน่ายเดียวจากตอนท้ายของแต่ละ antigenome (pBDV-ΔGC) (รูป. 1A) ยวดสร้าง pBDVc-CG และ pBDV ได้รับการช่วยเหลืออย่างมีประสิทธิภาพในขณะที่สร้าง pBDV-ΔGCล้มเหลวที่จะสนับสนุนการฟื้นตัวของไวรัส recombinant ในความพยายามซ้ำ (รูป. 1B) นอกจากคุณสมบัติการเจริญเติบโตของ BDVc-GC และ BDV มีความแตกต่างจากผู้ BDVc (รูป. 1B) แสดงให้เห็นว่า pBDVc-CG และ pBDV เข้ารหัส BDV antigenomes ทำงานได้อย่างสมบูรณ์

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

- ลำดับของยีนเอนโดนิวคลีเอส
เทอร์มินัลไวรัสจีโนมหน้าที่กฎระเบียบสำคัญในการถอดความและซ้ำ จีโนมของไวรัส ( RNA แทร์มินี่ลบเส้น nsv ) ประกอบด้วยคว่ำขั้วซ้ำ ( itrs ) ซึ่งเป็นตัวแทนของภูมิภาคที่ควบคุมการแสดงออกของโปรโมเตอร์ไม่สมมาตรของจีโนม ( vrna ) และ antigenome ( crna )เด็กมักจะเริ่มด้วยซิงเกิลนิวคลีโอไทด์ที่ 3 ได้รับปลายทางของแม่แบบ ชายหาด และในบาง nsv ต้องมีปฏิสัมพันธ์โดยตรงของ itrs ( 1 – 3 ) การเพิ่มประสิทธิภาพของ genomic RNA ไวรัส ดังนั้น วิกฤตขึ้นอยู่กับการสังเคราะห์และการบำรุงรักษาที่ถูกต้องดังนี้ Terminalการป้องกันอาคารที่ถูกต้องของความเกี่ยวข้องโดยเฉพาะ rna ไวรัสที่ยังคงอยู่ในร่างกาย เพราะขั้วจีโนมการเสื่อมสภาพในระหว่างการติดเชื้อแบบถาวรได้ถูกอธิบายไว้หลาย rnaviruses จากคำสั่งไวรัสแตกต่าง และครอบครัว ( 4 ) นอกจากนี้5 นั้น ไตรฟอสเฟตกลุ่มที่ถูกระบุว่าเป็นเชื้อโรคที่เกี่ยวข้องรูปแบบโมเลกุลที่ขอสนับสนุนการ nsv โดยระบบภูมิคุ้มกันโดยกำเนิด ( 5 - 7 ) จึงไม่น่าแปลกใจที่หลาย nsv พัฒนาซับซ้อนกลไกการปรับเปลี่ยนอาคารโครงสร้างของจีโนมของพวกเขา ส่วน nsv ของเวที - บุญญา - ,ครอบครัว andorthomyxovirus ใช้นายกรัฐมนตรีและปรับกลไกภายในที่สั้น สังเคราะห์ไพรเมอร์ปรับกับ 3 นั้นสิ้นสุดแม่แบบเกลียวเพื่อเริ่มต้นจีโนมซ้ำ ( 8 – 11 )กระบวนการนี้สร้างใหม่ 5 นั้น แทร์มินี่จากแม่แบบภายในในแต่ละรอบของการทำซ้ำและสร้าง triphosphorylated นิวคลีโอไทด์ 5 นั้นไม่มีแม่แบบฟังก์ชันที่สามารถเอาออกโดยนิวเคลียสโดยกิจกรรมของไวรัส ( 10 ) .
ไวรัสโรคบอร์นา ( bdv ) มี nonsegmented RNA จีโนมของขั้ว ลบ ( 12 )และการถอดความของ bdv จีโนมเกิดขึ้นในนิวเคลียส และไม่ได้เกี่ยวข้องกับตัวเซลล์ ( 13 ) , เปิดใช้งานไวรัสสร้างเก็บรักษาระยะยาวในความหลากหลายของการเพาะเลี้ยงเซลล์และในสัตว์ ที่ แทร์มินี่ของ bdv V - crna โมเลกุลและยังคงมีเสถียรภาพ แม้ว่านาน เก็บรักษา และแสดงลักษณะพิเศษแสดงให้เห็นว่ามีการแก้ไขในระหว่างขั้นตอนการทำซ้ำ ตัวอย่างเช่น , เราพบว่าโมเลกุลมีทั้งสี่คู่ที่ 3 ได้รับปลายทางที่ขาดแม่แบบชัดเจนที่ 5 นั้นปลายเกลียวตรงข้าม ( 14 ) เราเริ่มเสนอว่าแทร์มินี่ถูกสร้างขึ้นโดยเริ่มต้นที่ 5 ได้รับภายในพิเศษขนาดใหญ่ที่หายากและ V - crna โมเลกุลให้คู่ที่ 5 ได้รับต้นฉบับหายไปทั้งหมด ( 14 ) อย่างไรก็ตาม รูปแบบนี้ได้ถูกท้าทายโดยความจริงที่ว่าทุกคนพยายามที่จะแสดงให้เห็นถึงการดำรงอยู่ของเหล่านี้หายาก V - crna โมเลกุลล้มเหลว นอกจากนี้เราได้รับเมื่อเร็ว ๆนี้พบว่า 5 แทร์มินี่ของ V - crna โมเลกุลเดี่ยวมากกว่า triphosphorylated ( 7 )แสดงให้เห็นว่าเอนไซม์มากกว่าการปรับเปลี่ยนภายในง่าย เป็นผู้รับผิดชอบดูแล แทร์มินี่โคม 5 . เพื่อสำรวจความเป็นไปได้ทางเลือกสำหรับการปรับเปลี่ยนของ bdv แทร์มินี่เราสร้างขึ้น แผงของยีนไวรัสจาก cdnas แตกต่างเทอร์มินัลที่มีการกลายพันธุ์การวิเคราะห์ของ terminal อนุกรมของการกู้คืนไวรัสพบว่าโคม 5 ได้รับปลายทางของ bdv จีโนม ไม่ใช่ผลของการริเริ่มภายในการทำซ้ำ ; ค่อนข้างมันคือผลของการยืดตัวของ 3 นั้น แทร์มินี่ V - crna โมเลกุล ซึ่งเกิดขึ้นหลังจากแม่แบบเส้นได้รับการคัดลอก ภาพที่ปรากฏซึ่งแสดงให้เห็นว่า 3 นั้น แทร์มินี่ของการคัดลอกวี - crna โมเลกุลต่อถึงลวดลายลำดับภายในที่สังเคราะห์ขึ้นใหม่ ชายหาด ที่ให้แม่แบบสำหรับการสังเคราะห์นิวคลีโอไทด์ที่หายไปก่อนหน้านี้ sectionnext ส่วน
.

3 ได้รับผลของ bdv V - crna แทร์มินี่และไม่สังเคราะห์จากมาตรฐานแม่แบบ .

เราก่อนหน้านี้ พบว่าจีโนม 3 ได้รับกระเช้าของ bdv จะรักษาแม้ว่า bdv คือการกู้คืนจากการ antigenome ให้ต้นฉบับหายไปคู่ที่ 5 ได้รับปลายทาง ( pbdvc ) ( รูปที่ 1 ) ( 14 ) ความท้าทายรูปแบบใหม่ภายใน เราแก้ไข pbdvc เข้ารหัสเปลี่ยน Terminal ลำดับลวดลาย ( pbdvc CG ) ( รูปที่ 1 ) หรือแนะนำ terminal ลบ 4 นิวคลีโอไทด์ขจัดข้อมูลลำดับสำหรับ V - crna 3 ได้รับกระเช้า ( pbdv ) ( ภาพประกอบ1a ) หรือห้า nucleotides ลบนอกจากข้อมูลลําดับที่ 3 ได้รับกระเช้า , ซิงเกิลนิวคลีโอไทด์จากปลายแต่ละด้านของ antigenome ( pbdv - Δ GC ) ( รูปที่ 1A ) อย่างน่าทึ่ง , สร้าง CG และมีประสิทธิภาพช่วย pbdvc pbdv เป็นส่วนสร้าง pbdv - Δ GC ล้มเหลวที่จะสนับสนุนการฟื้นตัวของไวรัส recombinant ในพยายามทำซ้ำ ( รูปที่ 1A ) นอกจากนี้การเจริญเติบโตและคุณสมบัติของ GC bdvc bdv ถูกแยกไม่ออกจากที่ของ bdvc ( รูปที่ 1A ) แสดงว่า CG pbdvc pbdv เข้ารหัสและการทำงานอย่างเต็มที่ bdv antigenomes .