Figure 3. Open in figure viewerDown

Figure 3. Open in figure viewerDownload Powerpoint slide
Elimination of the [PSI+] prion by Hsp104 overexpression is greatly reduced in cells lacking the co-chaperones Sti1p and Cpr7p. (A) Both strains, transformed with pUKC2200 were plated onto one-quarter YEPD after 24 h following addition of galactose, and colonies allowed to develop. Colonies were photographed after 3–4 days of growth at 30 °C. (B) Each of the four strains indicated were transformed with the plasmid pUKC2200. The expression of the GAL1–HSP104 gene carried on this plasmid was induced and the percentage of cells that formed pure red Ade− colonies (i.e. that were [psi−]) was estimated as described in Materials and methods. The results are the average of three independent experiments. (C) Western blot analysis of the levels of Hsp104 in each of the four strains engineered to overexpress the HSP104 gene. For each of the four strains, samples were taken after 0, 2, 7 and 14 generations of growth. The membranes were simultaneously probed with an anti-Hsp104 and an anti-PGK antibody, the latter acting as a loading control

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

รูปที่ 3 เปิดภาพนิ่ง Powerpoint ในรูป viewerDownloadกำจัดการ [PSI +] พรีออนโดยการแสดงออกของ Hsp104 ลดลงอย่างมากในเซลล์ที่ขาดครูร่วม Sti1p และ Cpr7p (A) ทั้งสองสายพันธุ์ เปลี่ยนกับ pUKC2200 ถูกชุบลงบน YEPD หนึ่งในสี่หลังจาก 24 ชั่วโมงกาแล็กโทส และอาณานิคมที่ได้รับอนุญาตให้พัฒนาต่อไป อาณานิคมได้ถ่ายภาพหลังจาก 3 – 4 วันของการเติบโตที่ 30 องศาเซลเซียส (ข) แต่ละสี่สายพันธุ์ที่ระบุได้กลายกับ plasmid pUKC2200 ถูกทำให้เกิดการแสดงออกของยีน GAL1 – HSP104 ที่ดำเนินการใน plasmid นี้ และประมาณเปอร์เซ็นต์ของเซลล์ที่เป็นรูปแบบบริสุทธิ์อาณานิคม Ade− แดง (เช่นที่ [psi−]) ตามที่อธิบายไว้ในวัสดุและวิธีการ ผลลัพธ์คือ ค่าเฉลี่ยของการทดลองอิสระสาม (ค) ตะวันตกน้าการวิเคราะห์ระดับของ Hsp104 ในสี่สายพันธุ์ที่ออกแบบมาเพื่อ overexpress ยีน HSP104 สำหรับแต่ละสายพันธุ์สี่ ตัวอย่างที่ถ่ายหลังจากเติบโตรุ่น 0, 2, 7 และ 14 เยื่อถูกพิสูจน์พร้อมกันกับการป้องกัน Hsp104 และแอนติบอดีต่อต้าน-PGK ทำหน้าที่หลังเป็นตัวควบคุมที่โหลด

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

รูปที่ 3 เปิดในรูป viewerDownload สไลด์ PowerPoint
ขจัด [PSI +] พรีออนโดย Hsp104 แสดงออกลดลงอย่างมากในเซลล์ขาดครูร่วม Sti1p และ Cpr7p (A) ทั้งสองสายพันธุ์กลายที่มี pUKC2200 ถูกชุบบนหนึ่งในสี่ YEPD หลังจาก 24 ชั่วโมงนอกจากนี้ต่อไปของกาแลคและโคโลนีที่ได้รับอนุญาตในการพัฒนา อาณานิคมถูกถ่ายภาพหลังจาก 3-4 วันของการเจริญเติบโตที่ 30 ° C (B) แต่ละแห่งที่สี่สายพันธุ์ที่ระบุถูกเปลี่ยนด้วยพลาสมิด pUKC2200 การแสดงออกของยีน GAL1-HSP104 ดำเนินการเกี่ยวกับพลาสมิดนี้ถูกชักนำและร้อยละของเซลล์ที่เกิดขึ้นบริสุทธิ์อาณานิคม Ade- สีแดง (เช่นที่อยู่ [psi-]) เป็นที่คาดกันตามที่อธิบายไว้ในวัสดุและวิธีการ ผลเป็นค่าเฉลี่ยของการทดลองสามอิสระ (C) การวิเคราะห์ดวงตะวันของระดับของ Hsp104 ในแต่ละสี่สายพันธุ์วิศวกรรมเพื่อ overexpress ยีน HSP104 สำหรับแต่ละสี่สายพันธุ์ถูกนำตัวอย่างหลังจากที่ 0, 2, 7 และ 14 รุ่นของการเจริญเติบโต เยื่อถูกตรวจสอบพร้อมกันกับการต่อต้าน Hsp104 และแอนติบอดีต่อต้าน PGK รักษาการหลังเป็นตัวควบคุมการโหลด

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

รูปที่ 3 เปิดรูปที่ viewerdownload PowerPoint ภาพนิ่ง[ + ] การขจัด prion โดย PSI hsp104 overexpression เป็นอย่างมากลดลงในเซลล์ที่ขาดผู้ดูแลและร่วม sti1p cpr7p ( ) ทั้งสายพันธุ์ แปลง ด้วย pukc2200 ถูกชุบลงบนอาหารเลี้ยงเชื้อหนึ่งในสี่หลังจาก 24 ชั่วโมงต่อไปนี้เติมกาแลคโตสและอาณานิคมได้รับอนุญาตให้พัฒนา อาณานิคมได้ถ่ายภาพหลัง 3 – 4 วันของการเจริญเติบโตที่อุณหภูมิ 30 องศา ( B ) ของแต่ละสี่สายพันธุ์ พบถูกเปลี่ยนด้วย pukc2200 พลาสมิด การแสดงออกของยีน gal1 – hsp104 อยู่บนพลาสมิดนี้ถูกชักจูงและร้อยละของเซลล์ที่ขึ้นแดงบริสุทธิ์เป็น−อาณานิคม ( เช่นที่ [ PSI − ] ) คือประมาณตามที่อธิบายไว้ในวัสดุและวิธีการ ผลเฉลี่ยสามการทดลองที่เป็นอิสระ ( c ) การวิเคราะห์ Western blot ของระดับของ hsp104 ในแต่ละสี่สายพันธุ์ที่ออกแบบมาเพื่อ overexpress ที่ hsp104 ยีน สำหรับแต่ละสี่สายพันธุ์ ตัวอย่าง ถ่ายหลังจาก 0 , 2 , 7 และ 14 รุ่นของการเจริญเติบโต เมมเบรนได้พร้อมกันสามารถป้องกันด้วย anti-hsp104 PGK แอนติบอดีและการแสดงหลังเป็นการควบคุม