Substrate specificity and enzyme ki

Substrate specificity and enzyme kinetics
The substrate specificity of Bgl1-His6 and Bgl2 was investigated
by assaying for activity on the aryl-glycosides
pNP-β-d-glucopyranoside, pNP-α-d-glucopyranoside,
pNP-β-d-galactopyranoside, pNP-β-d-xylopyranoside
and pNP-β-d-cellobioside, and on the oligosaccharides
cellobiose, cellotriose, cellotetraose, cellopentaose,
cellohexaose, sophorose, laminaribiose, gentiobiose,
methylglucoside and octylglucoside. When using arylsubstrates,
the standard assay method was employed,
simply replacing pNP-βGlc by another substrate as
appropriate. For oligosaccharides, the release of glucose
was quantified using an enzyme kit (d-Fructose/dGlucose
Assay Kit, liquid stable, Megazyme). To study
the Michaelis–Menten parameters KM, Vmax and
kcat, Bgl1 (0.120  nM) or Bgl2 (0.13  nM) were added
to reaction mixtures containing different substrate
concentrations: 0.25–5  mM cellobiose, 0.25–5  mM cellotriose,
0.25–5 mM cellotetraose, 0.25–5 mM cellopentaose,
0.25–5  mM cellohexaose, 0.2–4  mM sophorose,
0.1–2  mM laminaribiose, 0.1–2  mM gentiobiose, 0.5–
20  mM methylglucoside and 0.2–4  mM octylglucoside.
Initial rates were fitted to the Michaelis–Menten kinetic
equation using a nonlinear regression (SigmaPlot 10) to
extract the apparent KM and kcat [53].

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

พื้นผิว specificity และเอนไซม์จลนพลศาสตร์ถูกสอบสวน specificity พื้นผิวของ Bgl1 His6 และ Bgl2โดย assaying สำหรับกิจกรรม aryl glycosidespNP-β-d-glucopyranoside, pNP-ด้วยกองทัพ-d-glucopyranosidepNP-β-d-galactopyranoside, pNP-β-d-xylopyranosideและ pNP-β-d-cellobioside และ oligosaccharidescellobiose, cellotriose, cellotetraose, cellopentaosecellohexaose, sophorose, laminaribiose, gentiobiosemethylglucoside และ octylglucoside เมื่อใช้ arylsubstratesวิธีทดสอบมาตรฐานได้รับการว่าจ้างเพียงแค่เปลี่ยน pNP βGlc โดยพื้นผิวอื่นเป็นที่เหมาะสม สำหรับ oligosaccharides ปล่อยน้ำตาลกลูโคสมี quantified โดยใช้ชุดการเอนไซม์ (d-ฟรักโทส/dGlucoseAssay Kit น้ำคอก Megazyme) เพื่อศึกษาขั้น – Menten พารามิเตอร์ KM, Vmax และkcat, Bgl1 (0.120 nM) หรือ Bgl2 (0.13 nM) ถูกเพิ่มให้น้ำยาผสมปฏิกิริยาที่ประกอบด้วยพื้นผิวแตกต่างกันความเข้มข้น: 0.25 – 5 มม. cellobiose, 0.25 – 5 มม. cellotriose0.25-5 cellotetraose mM, 0.25 – 5 มม. cellopentaose0.25-5 มม. cellohexaose, 0.2-4 มม. sophorose0.1-2 มิลลิเมตร laminaribiose, 0.1 – 2 มม. gentiobiose, 0.5 –methylglucoside 20 มม.และ 0.2-4 mM octylglucosideราคาเริ่มต้นถูกติดตั้งไปขั้น – Menten เดิม ๆสมการที่ใช้ถดถอยไม่เชิงเส้น (SigmaPlot 10)แยกกม.ชัดเจนและ kcat [53]

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ความจำเพาะของพื้นผิวและจลนพลศาสตร์ของเอนไซม์ความจำเพาะพื้นผิวของ Bgl1-His6 และ Bgl2 ถูกตรวจสอบโดยassaying กิจกรรมบนไกลโคไซด์ aryl-PNP-β-D-glucopyranoside, PNP-α-D-glucopyranoside, PNP-β-D-galactopyranoside, PNP -β-D-xylopyranoside และ PNP-β-D-cellobioside และใน oligosaccharides cellobiose, cellotriose, cellotetraose, cellopentaose, cellohexaose, sophorose, laminaribiose, gentiobiose, methylglucoside และ octylglucoside เมื่อใช้ arylsubstrates, วิธีการทดสอบมาตรฐานลูกจ้างเพียงแค่เปลี่ยนPNP-βGlcโดยพื้นผิวเป็นอื่นที่เหมาะสม สำหรับ oligosaccharides, การเปิดตัวของกลูโคสถูกวัดโดยใช้ชุดเอนไซม์(D-ฟรุคโต / dGlucose Assay Kit ของเหลวมั่นคง Megazyme) เพื่อศึกษาพารามิเตอร์ Michaelis-Menten KM, Vmax และ kcat, Bgl1 (0.120 นาโนเมตร) หรือ Bgl2 (0.13 นาโนเมตร) มีการเพิ่มการผสมปฏิกิริยาที่มีพื้นผิวที่แตกต่างกันมีความเข้มข้น: 0.25-5 มิลลิ cellobiose, 0.25-5 มิลลิ cellotriose, 0.25-5 มิลลิ cellotetraose, 0.25-5 มิลลิ cellopentaose, 0.25-5 มิลลิ cellohexaose, 0.2-4 มิลลิ sophorose, 0.1-2 มิลลิ laminaribiose, 0.1-2 มิลลิ gentiobiose, 0.5- 20 มิลลิ methylglucoside และ 0.2-4 มิลลิ octylglucoside. อัตราเริ่มต้นก็พอดีกับ Michaelis-Menten เคลื่อนไหวสมการโดยใช้การถดถอยเชิงเส้น(SigmaPlot 10) สารสกัดจาก KM ชัดเจนและ kcat [53]

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ความจำเพาะ ( ทำไมเอนไซม์จลนศาสตร์
( ความจำเพาะและศึกษา bgl1-his6 bgl2
โดย assaying สำหรับกิจกรรมที่กลืนกันรำพัน
PNP - บีตา - D-glucopyranoside , PNP - แอลฟา - บีตา - D-glucopyranoside ,
d-galactopyranoside PnP PnP , - บีตา - d-xylopyranoside
PNP - และบีตา - d-cellobioside และโอลิโกแซคคาไรด์
เซลโลไบโอสเซลโลไตรโเซลโลเตตระโอสเซลโลเพนตะโอส , , , , cellohexaose sophorose
, ,laminaribiose gentiobiose
, , methylglucoside และ octylglucoside . เมื่อใช้ arylsubstrates
, วิธีวิเคราะห์มาตรฐานการจ้างงาน
เพียงแค่การเปลี่ยน PNP - บีตา glc โดยพื้นผิวอื่น
เหมาะสม สำหรับเทคโนโลยีการปล่อยกลูโคส
เป็นวัดโดยใช้เอนไซม์ Kit ( d-fructose / dglucose
ชุด , มั่นคง , ของเหลว megazyme assay ) เพื่อศึกษาและ menten มากค่า

kcat Km และ Vmax ,bgl1 ( 0.120 รึเปล่า nm ) หรือ bgl2 ( 0.13 รึเปล่า nm ) เพิ่ม
ปฏิกิริยาผสมที่มีความเข้มข้นแตกต่างกัน (
: 0.25 – 5 ไหมมมที่ 0.25 – 5 ไหมอืมเซลโลไตรโ
0.25 – 5 ,  –  5 มม. เซลโลเตตระโอส 0.25 มม. เซลโลเพนตะโอส
0.25 – 5 มม. ,   cellohexaose 0.2 – 4 ทำไมมม sophorose
0.1 – 2 , laminaribiose  –  0.1 mm , 2 mm gentiobiose 0.5 –
20 มม. และอะไร methylglucoside 0.2 – 4 octylglucoside มม. มั้ย .
ราคาเริ่มต้นติดตั้งมาก– menten พลังงานจลน์
สมการโดยใช้การถดถอยเชิงเส้น ( sigmaplot 10 )

แยกกม. ชัดเจนและ kcat [ 53 ]