Bacterial strains. The B. subtilis

Bacterial strains. The B. subtilis wild-type strain used in this study was PY79,
a Spo
prototrophic derivative of type strain 168 (44). The commercial probiotics
used have been described previously and were Enterogermina (B. clausii)
(13, 17, 39, 40), Subtyl (B. cereus var. vietnami) (17), BiosubtylDL (B. cereus) (17),
BiosubtylNT (B. pumilus) (13), and Bactisubtil (B. cereus) (17). The bacterial
strains used as indicators for antimicrobial screening are listed in Table 1 and
were obtained from the Bacillus Genetic Stock Center (Columbus, Ohio) (http:
//bacillus.biosci.ohio-state.edu), the National Collection of Type Cultures, or the
Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkuturen or from laboratory
stocks.
Preparation of spores. Sporulation was induced in Difco sporulation medium
(DSM) by using the exhaustion method as described elsewhere (28). Sporulating
cultures were harvested 24 h after initiation of sporulation. Purified suspensions
of spores were prepared as described by Nicholson and Setlow (28) by using a
French press (40,000 lb/in2) to break any residual sporangial cells, followed by
washing in 1 M NaCl, 1 M KCl, and water (twice). The French press was used
instead of lysozyme treatment since some strains were known to exhibit sensitivity
to lysozyme (17). Each spore suspension was titrated immediately to determine
the number of CFU per milliliter before aliquots were frozen at 20°C.
Extraction of spore coat proteins. Spore coat proteins were extracted from
suspensions of spores at high densities (1010 spores/ml) by using a sodium
dodecyl sulfate-dithiothreitol extraction buffer as described in detail elsewhere
(28). The integrity of extracted proteins was assessed by sodium dodecyl sulfatepolyacrylamide
gel electrophoresis, and the concentration was determined with
a Bio-Rad DC protein assay kit (Bio-Rad).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

สายพันธุ์ของเชื้อแบคทีเรีย สายพันธุ์ป่าชนิด subtilis เกิดที่ใช้ในการศึกษานี้คือ PY79มี Spo prototrophic อนุพันธ์ของชนิดต้องใช้ 168 (44) Probiotics พาณิชย์ใช้ได้อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ และมี Enterogermina (เกิด clausii)(13, 17, 39, 40), Subtyl (เกิด cereus เพียง vietnami) (17), BiosubtylDL (เกิด cereus) (17),BiosubtylNT (เกิด pumilus) (13), และ Bactisubtil (เกิด cereus) (17) แบคทีเรียใช้เป็นที่แสดงในตารางที่ 1 ตัวบ่งชี้สำหรับจุลินทรีย์คัดสายพันธุ์ และได้รับจากการคัดพันธุหุ้น (โคลัมบัส โอไฮโอ) (http:bacillus.biosci.ohio-state.edu), ชาติคอลเลกชันของชนิดวัฒนธรรม หรือแดน Deutsche Sammlung ฟอน Mikroorganismen Zellkuturen หรือ จากห้องปฏิบัติการหุ้นการเตรียมเพาะเฟิร์น Sporulation เป็นเกิดใน Difco sporulation(DSM) โดยใช้วิธีเกษียณดังที่อื่น ๆ (28) Sporulatingวัฒนธรรมได้เก็บเกี่ยวผลผลิต 24 ชมหลังจากคว้า sporulation บริการบริสุทธิ์ของเพาะเฟิร์นถูกจัดเตรียมตามที่อธิบายไว้โดย Nicholson Setlow (28) โดยการฝรั่งเศสกด (40000 ปอนด์/in2) เพื่อตัดส่วนที่เหลือ sporangial เซลล์ใด ๆ ตามด้วยซัก 1 M NaCl, 1 M KCl และน้ำ (สองครั้ง) ใช้กดฝรั่งเศสแทนที่จะรักษา lysozyme ตั้งแต่บางสายพันธุ์ได้รู้จักแสดงความไวการ lysozyme (17) ระงับแต่ละสปอร์มี titrated ทันทีเพื่อตรวจสอบจำนวน CFU ต่อ milliliter ก่อน aliquots ถูกแช่แข็งที่ 20 องศาเซลเซียสการสกัดโปรตีนตราสปอร์ โปรตีนตราสปอร์ถูกสกัดจากบริการเพาะเฟิร์นที่ (เพาะเฟิร์น 1010 มล) ความหนาแน่นสูงโดยการใช้เกลือแร่dodecyl dithiothreitol ซัลเฟตแยกบัฟเฟอร์ตามที่อธิบายไว้ในรายละเอียดอื่น ๆ(28) ถูกประเมินความสมบูรณ์ของการแยกโปรตีน โดยโซเดียม dodecyl sulfatepolyacrylamideเจ electrophoresis และความเข้มข้นที่กำหนดด้วยDC ราษฎร์ไบโอโปรตีนวิเคราะห์ชุด (ไบ-Rad)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

สายพันธุ์แบคทีเรีย บี subtilis สายพันธุ์ป่าชนิดที่ใช้ในการศึกษาครั้งนี้มี PY79,
Spo? อนุพันธ์ prototrophic สายพันธุ์ชนิด 168 (44) โปรไบโอติกในเชิงพาณิชย์ที่ใช้ได้รับการอธิบายก่อนหน้านี้และมี Enterogermina (บี clausii) (13, 17, 39, 40) Subtyl (B. cereus var. vietnami) (17), BiosubtylDL (B. cereus) (17), BiosubtylNT (B. pumilus) (13) และ Bactisubtil (B. cereus) (17) แบคทีเรียสายพันธุ์ที่นำมาใช้เป็นตัวชี้วัดในการคัดกรองยาต้านจุลชีพที่มีการระบุไว้ในตารางที่ 1 และที่ได้รับจากBacillus ศูนย์พันธุหุ้น (โคลัมบัสโอไฮโอ) (http: //bacillus.biosci.ohio-state.edu) คอลเลกชันแห่งชาติของวัฒนธรรมประเภท หรือDeutsche Sammlung ฟอน Mikroorganismen และ Zellkuturen หรือจากห้องปฏิบัติการหุ้น. การจัดทำสปอร์ สร้างสปอร์ได้รับการเหนี่ยวนำให้เกิดใน Difco กลางสร้างสปอร์(DSM) โดยใช้วิธีการอ่อนเพลียตามที่อธิบายไว้ที่อื่น ๆ (28) Sporulating วัฒนธรรมเก็บเกี่ยว 24 ชั่วโมงหลังจากที่เริ่มต้นของการสร้างสปอร์ สารแขวนลอยบริสุทธิ์ของสปอร์ได้จัดทำตามที่อธิบายไว้โดยนิโคลสันและ Setlow (28) โดยใช้สื่อมวลชนฝรั่งเศส(£ 40,000 / in2) ที่จะทำลายเซลล์ sporangial ใด ๆ ที่เหลือตามด้วยการซักผ้าใน1 M NaCl 1 M KCl และน้ำ (สอง) . สื่อมวลชนฝรั่งเศสถูกนำมาใช้แทนการรักษาตั้งแต่ไลโซไซม์บางสายพันธุ์เป็นที่รู้จักกันที่จะแสดงความไวในการไลโซไซม์(17) สปอร์แขวนลอยแต่ละคนได้ปรับขนาดทันทีเพื่อตรวจสอบจำนวนโคโลนีต่อมิลลิลิตรก่อน aliquots ถูกแช่แข็งที่ 20 ° C. การสกัดโปรตีนเสื้อสปอร์ สปอร์เสื้อโปรตีนสกัดจากสารแขวนลอยสปอร์ที่ความหนาแน่นสูง (? 1010 สปอร์ / มล.) โดยใช้โซเดียมบัฟเฟอร์โดเดซิลซัลเฟตdithiothreitol สกัดตามที่อธิบายไว้ในรายละเอียดอื่น ๆ(28) ความสมบูรณ์ของโปรตีนที่สกัดได้รับการประเมินโดยโซเดียมโดเดซิล sulfatepolyacrylamide ข่าวคราวและความเข้มข้นที่ถูกกำหนดด้วยDC แบบ Bio-Rad ชุดทดสอบโปรตีน (Bio-Rad)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

สายพันธุ์แบคทีเรีย B . subtilis ของสายพันธุ์ที่ใช้ในการศึกษาครั้งนี้ คือ py79
เป็น
, ไป prototrophic อนุพันธ์ประเภทสายพันธุ์ 168 ( 44 ) Probiotics พาณิชย์
ใช้ได้อธิบายไว้ก่อนหน้านี้และ enterogermina ( พ. clausii )
( 13 , 17 , 39 , 40 ) , subtyl ( B . cereus var เวียดนาม ) ( 17 ) biosubtyldl ( B . cereus ) ( 17 ) ,
biosubtylnt ( บี ลลั ูมิลุส ) ( 13 ) และ bactisubtil ( B . cereus ) 17 )เชื้อแบคทีเรียสายพันธุ์ที่ใช้เป็นตัวบ่งชี้
คัดกรองเชื้ออยู่ในรางที่ 1 และ
ได้มาจากเชื้อพันธุกรรม Stock ศูนย์ ( โคลัมบัส , โอไฮโอ ) ( http : / /
< . biosci . รัฐโอไฮโอ . edu ) , ประเภทของวัฒนธรรมแห่งชาติหรือ
sammlung ฟอน mikroorganismen และดอยช์ zellkuturen หรือจาก หุ้นทางห้องปฏิบัติการ
.
เตรียมสปอร์การสร้างนำการ difco )
( DSM ) โดยใช้วิธีการตามที่อธิบายไว้ในที่อื่น ( 28 ) ผลิตสปอร์
วัฒนธรรมเก็บ 24 ชั่วโมงหลังจากที่เริ่มต้นของการสร้างสปอร์ ช่วงล่าง
สปอร์บริสุทธิ์เตรียมตามที่อธิบายไว้โดยนิโคลสัน และ setlow ( 28 ) โดยใช้
กดฝรั่งเศส ( 40 , 000 ปอนด์” ) การแบ่งเซลล์ใด ๆ sporangial ตกค้างตาม
ล้าง 1 M NaCl1 M KCl และน้ำ ( ครั้ง ) นักข่าวฝรั่งเศสถูกใช้
แทนไลโซไซม์รักษาเนื่องจากบางสายพันธุ์ที่รู้จักกันเพื่อแสดงความไว
กับไลโซไซม์ ( 17 ) แต่ละสปอร์ระงับได้ตลอดเวลาทันทีเพื่อตรวจสอบ
จำนวนโคโลนีต่อมิลลิลิตรก่อนเฉยๆถูกแช่แข็งที่  20 ° C .
สกัดสปอร์เคลือบโปรตีน โปรตีนสกัดจาก
เสื้อสปอร์สารแขวนลอยสปอร์ที่ความหนาแน่นสูง (  1010 สปอร์ / มิลลิลิตร ) โดยการใช้โซเดียมโดเดซิลซัลเฟตเป็นบัตรแข็งใช้สาร

อธิบายในรายละเอียดอื่น ๆ ( 28 ) ความสมบูรณ์ของโปรตีนที่สกัดได้ถูกประเมิน โดยโซเดียมโดเดซิลอะคริลาไมด์
gel electrophoresis และความเข้มข้นตั้งใจกับ
ทางชีวภาพราด DC โปรตีนต่อชุด ( ไบโอ ราด )