Inflammasome Activation: Intracellu

Inflammasome Activation: Intracellular Distribution of AuNP-Es in RAW264.7 Cells
Next, we tested the second hypothesis that differences in the shape of the NPs induced differences in the level of cytokine production by APCs. First, we focused on the immunological response via inflammasomes, which are cytosolic molecular complexes that activate inflammatory caspase, cytokine IL-1β and IL-18, which promote inflammatory responses.(43, 44) Inflammasomes are known to be activated on exposure to nanoparticles due to lysosomal damage, such as the rupture of lysosomes.(45-47) To examine this, the intracellular distribution of AuNP-Es in RAW264.7 cells was visualized by transmission electron microscopy (TEM) and CLMS (Figure S6). Regardless of the size and shape of the AuNPs, TEM images suggested that all AuNPs were taken up via the endocytotic pathway (Figure 4B–E). On the one hand, Sphere40-Es and Cube-Es mostly remained in the lysosome (Figure 4C,D), whereas Sphere20-Es and Rod-Es were capable of escaping from the lysosome into the cytosol (Figure 4B,E). CLMS images with lysosome staining by Lysotracker suggested the same trend as that observed in the TEM images (Figure S6). Nevertheless, CLMS images did show some release of Cube-Es from the lysosome, with a small number of Cube-Es also observed to be released in the TEM images (Figure S6E). These results are supported by the MD simulations reported by Frenkel et al., in which small and nonspherical NPs were shown to easily escape from the lipid bilayer.(48) In addition, Sphere20-Es and Rod-Es were removed from cells by exocytosis after culturing for an additional 48 h (Figure 4F). These trends correlate with the lysosomal escape of AuNPs. This lysosomal escape means that Sphere20-Es and Rod-Es have potential cytotoxicity through the rupture of lysosomes and leakage of proteolytic lysosomal enzymes into the cytosol leading to inflammasome activation.

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

Inflammasome การเปิดใช้งาน: การกระจายภายในเซลล์ของ AuNP-Es ใน RAW264.7
เซลล์ต่อไปเราได้ทดสอบสมมติฐานที่สองที่แตกต่างกันในรูปของNPS เหนี่ยวนำให้เกิดความแตกต่างในระดับของการผลิตไซโตไคน์โดย APCs อันดับแรกเรามุ่งเน้นไปที่การตอบสนองภูมิคุ้มกันผ่าน inflammasomes ซึ่งเป็นคอมเพล็กซ์โมเลกุล cytosolic ที่เปิดใช้งานการอักเสบ caspase, ไซโตไคน์ IL-1βและ IL-18 ซึ่งส่งเสริมการตอบสนองการอักเสบ. (43, 44) Inflammasomes เป็นที่รู้จักกันที่จะเปิดใช้งานในการสัมผัสกับอนุภาคนาโน เนื่องจากความเสียหาย lysosomal เช่นการแตกของ lysosomes ได้. (45-47) เพื่อตรวจสอบนี้การกระจายของเซลล์ AuNP-Es ในเซลล์ RAW264.7 ถูกมองเห็นโดยการส่งผ่านกล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอน (TEM) และ CLMS (รูปที่ S6) ไม่ว่าขนาดและรูปร่างของ AuNPs ภาพ TEM ชี้ให้เห็นว่า AuNPs ทั้งหมดถูกนำขึ้นผ่านทางเดิน endocytotic (รูปที่ 4B-E) ในมือข้างหนึ่ง, Sphere40-Es และ Cube-Es ส่วนใหญ่ยังคงอยู่ใน lysosome (รูป 4C, D) ในขณะที่ Sphere20-Es ร็อด-Es มีความสามารถในการหลีกหนีจาก lysosome เข้าไปในเซลล์ (รูปที่ 4B, E) ภาพที่มีการย้อมสี CLMS lysosome Lysotracker โดยชี้ให้เห็นแนวโน้มเช่นเดียวกับที่พบในภาพ TEM (รูปที่ S6) อย่างไรก็ตามภาพ CLMS ได้แสดงให้เห็นการเปิดตัวของ Cube-Es จาก lysosome ที่มีขนาดเล็กจำนวน Cube-Es ยังตั้งข้อสังเกตที่จะออกในภาพ TEM (รูป S6E) ผลลัพธ์เหล่านี้ได้รับการสนับสนุนโดย MD จำลองรายงานโดย Frenkel et al., ซึ่งกรมอุทยานฯ ที่มีขนาดเล็กและ nonspherical แสดงให้เห็นได้อย่างง่ายดายหนีออกมาจากไขมัน bilayer. (48) นอกจากนี้ Sphere20-Es ร็อด-Es ถูกถอดออกจากเซลล์โดย exocytosis หลังจากเพาะเลี้ยงเพื่อเพิ่ม 48 ชั่วโมง (รูป 4F) แนวโน้มเหล่านี้มีความสัมพันธ์กับการหลบหนีของ lysosomal AuNPs หลบหนี lysosomal ซึ่งหมายความว่า Sphere20-Es ร็อด-Es มีพิษที่อาจเกิดขึ้นผ่านการแตกของ lysosomes และการรั่วไหลของเอนไซม์ lysosomal โปรตีนเข้าไปในเซลล์ที่นำไปสู่การเปิดใช้งาน inflammasome

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การกระตุ้นเซลล์ inflammasome : กระจาย aunp ES ใน raw264.7 เซลล์
ต่อไป เราทดสอบสมมติฐานที่ 2 ความแตกต่างในรูปร่างของกฟผ. และความแตกต่างในระดับของการผลิตไซโตไคน์โดย apcs . ก่อนอื่น เราเน้นการตอบสนองทางภูมิคุ้มกันผ่านนฟลามมาโซม ซึ่งเป็น cytosolic โมเลกุลเชิงซ้อนที่ใช้แคสเปสอักเสบ ไซโตไคน์และบีตา il-18 IL-1 ,ซึ่งส่งเสริมการตอบสนองการอักเสบ ( 43 , 44 ) อินฟลามมาโซมส์เป็นที่รู้จักกันสามารถใช้งานในการสัมผัสกับอนุภาคนาโน lysosomal เนื่องจากความเสียหาย เช่น การแตกของไลโซโซม ( 45-47 ) เพื่อตรวจสอบนี้ การกระจายของ aunp ES ใน raw264.7 เซลล์ถูกมองเห็นโดยการส่งกล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอน ( TEM ) และ clms ( รูป s6 ) โดยไม่คำนึงถึงขนาดและรูปร่างของ aunps ,เต็มภาพ พบว่า aunps ทั้งหมดถูกถ่ายขึ้นผ่านทาง endocytotic ( รูป 4B ( E ) บนมือข้างหนึ่งและ sphere40 ES ES cube ส่วนใหญ่ยังคงอยู่ในไลโซโซม ( รูป 4C , D ) ส่วน sphere20 ES และแกน และสามารถหลบหนีจากฝ่ายตุลาการในไซโตซอล ( รูป 4B , E )clms ภาพเคโรโระ staining โดย lysotracker ชี้ให้เห็นทิศทางเดียวกับที่พบในแบบรูป ( รูปที่ s6 ) อย่างไรก็ตาม clms ภาพแสดงให้เห็นบางรุ่นของ Cube ES จากฝ่ายตุลาการ กับจำนวนเล็ก ๆของ Cube และปริมาณที่จะออกเต็มๆ ภาพ ( รูปที่ s6e ) ผลลัพธ์เหล่านี้ได้รับการสนับสนุนโดย MD จำลอง รายงานโดย frenkel et al . ,ซึ่ง กฟผ. มีขนาดเล็กและ nonspherical แสดงสามารถหนีจากไขมัน bilayer ( 48 ) นอกจากนี้ sphere20 ES และแกน และถูกถอดออกจากเซลล์ไซโตซิสหลังจากเพาะเลี้ยงเพิ่มอีก 48 ชั่วโมง ( รูปที่แทนที่ ) แนวโน้มเหล่านี้สัมพันธ์กับการหนี lysosomal ของ aunps .นี้ lysosomal หนีหมายความว่า sphere20 ES และแกนและมีศักยภาพต่อผ่านการแตก และการรั่วของโปรตีน lysosomal เอนไซม์เป็นเข็มทิศนำ inflammasome กระตุ้น