2. Materials and Methods
2.1. Materials
2.1.1. Microorganism
The strain used in this study was C. glutamicum, presently preserved
at the China Center for Type Culture Collection (CCTCC 201005, Wuhan,
China).
2.1.2. Media
The medium for slant consisted of (per liter): 5 g glucose, 1 g yeast
extract, 1 g beef extract, 2 g tryptone, trace FeSO4 and 15 g agar. The
initial pH was adjusted to 7.2.
The seed medium consisted of (per liter): 10 g glucose, 0.5 g yeast
extract, 0.5 g urea, 0.1 g KH2PO4, 0.1 g K2HPO4, 0.1 g NaCl, and 0.2 g
MgSO4. The initial pH was adjusted to 8.0.
The fermentation medium consisted of (per liter): 1 g yeast extract,
1 g urea, 0.1 g KH2PO4, 0.1 g K2HPO4, 0.1 g NaCl, and 0.2 g MgSO4. In carbon
source single-factor experiments, the glucose concentration was 10,
12.5, 15, 16.25, and 17.5 g·L−1
. In fed-batch culture process, the initial
glucose was 16.22 g·L−1
. The initial pH of all media was adjusted to 8.0.
2.1.3. Cultivation conditions
The slants were incubated at 28 °C for 16 h. For seed preparation,
two loops of cells were inoculated into 100 ml of seed medium in a
250-ml flask and incubated at 28 °C, 120 r·min−1 on a reciprocal shaker
until the optical density at 600 nm of seed culture reached 0.6–0.8.
For batch fermentation, the seed culture was inoculated at 5%
(by volume) into 100 ml of the fermentation medium in a 250-ml
flask. The inoculated flask was kept on a rotary shaker at 28 °C,
120 r·min−1 for 48 h.
The fed-batch fermentation was performed on a 2-liter fe
2. วัสดุและวิธีการ2.1. วัสดุ2.1.1. จุลินทรีย์พันธุ์ที่ใช้ในการศึกษานี้คือ C. glutamicum ปัจจุบันเก็บรักษาไว้ในประเทศจีนสำหรับชุดวัฒนธรรมชนิด (CCTCC 201005 ฮั่นประเทศจีน)2.1.2 การสื่อสื่อสำหรับเอียงประกอบด้วย (ต่อลิตร): น้ำตาลกลูโคส 5 กรัม ยีสต์ 1 gสารสกัดจาก เนื้อแยก g 1, 2 g tryptone ติดตาม FeSO4 และ agar 15 กรัม ที่ปรับปรุงค่า pH เริ่มต้น 7.2กลางเมล็ดประกอบด้วย (ต่อลิตร): น้ำตาลกลูโคส 10 กรัม ยีสต์ 0.5 gแยก ยูเรีย 0.5 g, 0.1 g KH2PO4, 0.1 g K2HPO4, 0.1 g NaCl และ 0.2 gMgSO4 ค่า pH เริ่มต้นถูกปรับปรุง 8.0กลางหมักประกอบด้วย (ต่อลิตร): สารสกัดจากยีสต์ 1 กรัมยูเรีย 1 g, 0.1 g KH2PO4, 0.1 g K2HPO4, 0.1 g NaCl ก 0.2 g MgSO4 ในคาร์บอนแหล่งทดลองปัจจัยเดียว ความเข้มข้นกลูโคส 1012.5, 15, 16.25 และ 17.5 g· L−1. ในกระบวนการวัฒนธรรมชุดงานเลี้ยง ต้นกลูโคสถูก 16.22 g· L−1. PH เริ่มต้นของสื่อทั้งหมดถูกปรับปรุง 8.02.1.3 การปลูกสภาพSlants จะมี incubated ที่ 28 ° C สำหรับ 16 h สำหรับการเตรียมเมล็ดพันธุ์วนรอบสองของเซลล์ถูก inoculated ใน 100 ml ของเมล็ดตัวกลางในการ250 ml หนาว และ incubated ที่ 28 ° C, r·min−1 120 ในเชคเกอร์ซึ่งกันและกันจนกระทั่งความหนาแน่นแสงที่ 600 nm ของเมล็ดถึง 0.6 – 0.8สำหรับชุดหมัก วัฒนธรรมเมล็ดถูก inoculated ที่ 5%(โดยปริมาตร) ใน 100 ml ของกลางหมักใน 250-mlหนาว หนาว inoculated ถูกเก็บไว้ในเชคเกอร์โรตารี่ที่ 28 ° Cr·min−1 120 สำหรับ 48 hทำการหมักอาหารชุดตาม fe 2 ลิตร
การแปล กรุณารอสักครู่..
2. วัสดุและวิธีการ
2.1 วัสดุ
2.1.1 จุลินทรีย์สายพันธุ์ที่ใช้ในการศึกษาครั้งนี้ซี glutamicum รักษาในปัจจุบันที่ศูนย์จีนประเภทวัฒนธรรมสะสม(CCTCC 201005, หวู่ฮั่น, จีน). 2.1.2 สื่อกลางสำหรับเอียงประกอบด้วย (ต่อลิตร): 5 กรัมน้ำตาล 1 กรัมยีสต์สารสกัด1 กรัมสารสกัดจากเนื้อวัว, 2 กรัม tryptone ติดตาม FeSO4 และ 15 กรัมวุ้น pH เริ่มต้นการปรับ 7.2. กลางเมล็ดประกอบด้วย (ต่อลิตร): 10 กรัมน้ำตาล 0.5 กรัมยีสต์สารสกัดจาก0.5 กรัมยูเรีย 0.1 กรัม KH2PO4 0.1 กรัม K2HPO4 0.1 กรัมโซเดียมคลอไรด์และ 0.2 กรัมMgSO4 ค่าพีเอชเริ่มต้นปรับ 8.0. กลางหมักประกอบด้วย (ต่อลิตร): 1 กรัมสารสกัดจากยีสต์, 1 กรัมยูเรีย 0.1 กรัม KH2PO4 0.1 กรัม K2HPO4 0.1 กรัมโซเดียมคลอไรด์และ 0.2 กรัม MgSO4 คาร์บอนในแหล่งทดลองเดียวปัจจัยความเข้มข้นของน้ำตาลกลูโคส 10, 12.5, 15, 16.25 และ 17.5 กรัม· L-1 ในกระบวนการวัฒนธรรมอาหารชุดที่เริ่มต้นกลูโคสเป็น 16.22 กรัม· L-1 ค่าพีเอชเริ่มต้นของทุกสื่อมีการปรับ 8.0. 2.1.3 เงื่อนไขการเพาะปลูกslants ถูกบ่มที่ 28 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 16 ชั่วโมง สำหรับการเตรียมเมล็ดสอง loops ของเซลล์ที่ถูกเชื้อเป็น 100 มล. ของกลางเมล็ดในขวด250 มล. และบ่มที่ 28 ° C, 120 อาร์·นาที 1 เครื่องปั่นซึ่งกันและกันจนความหนาแน่นของแสงที่600 นาโนเมตรของวัฒนธรรมเมล็ดถึง 0.6-0.8. สำหรับการหมักชุดวัฒนธรรมเมล็ดได้รับเชื้อที่ 5% (โดยปริมาตร) เป็น 100 มล. ของกลางหมักใน 250 มล. ขวด ขวดเชื้อที่ถูกเก็บไว้ในเครื่องปั่นหมุนที่ 28 ° C, 120 อาร์· 1 นาทีเป็นเวลา 48 ชม. หมักอาหารชุดได้ดำเนินการใน 2 ลิตร fe
การแปล กรุณารอสักครู่..
2 . วัสดุและวิธีการ
2.1 . วัสดุ
2.1.1 . จุลินทรีย์
สายพันธุ์ที่ใช้ในการศึกษาครั้งนี้ คือ ซี glutamicum ปัจจุบันเก็บรักษาไว้ที่ศูนย์จีน
รวบรวมวัฒนธรรมประเภท ( cctcc 201005 หวู่ฮั่น จีน
) 2.1.2 . สื่อ
( เอียง ) ( ต่อลิตร ) : 5 กรัม กลูโคส 1 กรัมยีสต์
สกัด 1 กรัมสารสกัดจากเนื้อ 2 กรัม ทริพโทน feso4 ติดตาม , และผง 15 กรัม
เริ่มต้นปรับ pH 7.2 .
เมล็ดปานกลาง ประกอบด้วย ( ต่อลิตร ) 10 กรัม กลูโคส 0.5 กรัม สารสกัดจากยีสต์
, ยูเรีย 0.5 กรัม kh2po4 0.1 กรัม k2hpo4 0.1 g NaCl 0.1 กรัมและ 0.2 กรัม MgSO4 ใ
พีเอชเริ่มต้นปรับ 8.0
การหมักกลางประกอบด้วย ( ต่อลิตร ) 1 กรัมยีสต์สกัด
ยูเรีย 1 กรัม kh2po4 0.1 กรัม k2hpo4 0.1 g NaCl 0.1 g และ 0.2 กรัม MgSO4 ใ . ในแหล่งคาร์บอน
ปัจจัยเดียวในการทดลอง กลูโคสความเข้มข้น 10
125 , 15 , 16.25 และ 17.5 กรัมด้วย L − 1
ในรุ่นที่ได้รับวัฒนธรรมกระบวนการกลูโคสเริ่มต้น
เป็น 16.22 G ด้วย L − 1
พีเอชเริ่มต้นของสื่อทั้งหมดปรับ 8.0
ทาง . เงื่อนไขการ slants
อุณหภูมิ 28 องศา C เป็นเวลา 16 ชั่วโมง สำหรับการเตรียมเมล็ดพันธุ์ ,
2 วงเซลล์เป็นเชื้อพันธุ์ ขนาดกลาง 100 ml ในขวด A
250 มิลลิลิตรและบ่มที่อุณหภูมิ 28 องศา C 120 R ด้วย มิน − 1 ใน
เครื่องปั่นส่วนกลับจนความหนาแน่นของแสงที่ 600 nm ของวัฒนธรรมเมล็ดถึง 0.6 - 0.8
สำหรับการหมักแบบ , การเพาะเมล็ดเป็นเชื้อที่ 5 %
( โดยปริมาตร ) 100 ml ของอาหารเลี้ยงเชื้อชนิดขวด 250 ml
ที่ถูกเก็บไว้ในขวดที่ใส่เครื่องปั่นหมุนที่ 28 ° C ,
120 R ด้วย− 1 นาที 48 h .
เฟดการหมักแบบแสดงบนลิตร 2 เหล็ก
การแปล กรุณารอสักครู่..