Aliquots of the protein extracts we

Aliquots of the protein extracts were subjected to the western
blot analysis (whole cell extracts in RIPA buffer) or separated by
SDS-PAGE (10% T; BioRad mini protean III cell; BioRad Laboratories
GmbH, München, Germany) for further in-gel digestion (nuclearenriched
extracts). Western blot analysis was performed using
following primary antibodies: phospho-specific (Ser139) and total
histone H2AX (Cell signaling Technology) and β-actin (BD Biosciences).
Secondary antibodies were obtained from Jackson ImmunoResearch
(West Grove, PA). Total and phosphorylated histone
H2AX levels were normalized to β-actin. Western blots were developed
using chemiluminescence detection and analyzed by
densitometry

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

Aliquots สารสกัดจากโปรตีนถูกต้องตะวันตกวิเคราะห์ (แยกเซลล์ทั้งหมดในริป้าราคาบัฟเฟอร์) ทำลาย หรือคั่นด้วยหน้าองค์กร (10% T BioRad มินิ protean III เซลล์ ห้องปฏิบัติการ BioRadGmbH โฮเต็ลมันเช็น เยอรมนี) สำหรับเพิ่มเติมในเจย่อยอาหาร (nuclearenrichedสารสกัด) วิเคราะห์ตะวันตกคืนในตาถูกดำเนินการโดยใช้ต่อแอนตี้หลัก: phospho-เฉพาะ (Ser139) และผลรวมฮิสโตน H2AX (เซลล์ตามปกติเทคโนโลยี) และβ-แอกติน (เวลาออก BD)แอนตี้รองได้รับมาจาก Jackson ImmunoResearch(เวสต์โกรฟ PA) รวม และ phosphorylated ฮิสโตนระดับ H2AX ได้ตามปกติให้β-แอกติน กันบล็อทตะวันตกได้รับการพัฒนาใช้ chemiluminescence ตรวจ และวิเคราะห์โดยdensitometry

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

aliquots
ของสารสกัดจากโปรตีนที่ถูกยัดเยียดให้ตะวันตกวิเคราะห์เปื้อน(สารสกัดจากเซลล์ทั้งในบัฟเฟอร์ RIPA) หรือแยกจากกันโดย
SDS-PAGE (10% T; BioRad มินิ Protean III เซลล์ BioRad ห้องปฏิบัติการ
GmbH, มิวนิค, เยอรมนี) สำหรับต่อไปในเจล การย่อยอาหาร (nuclearenriched
สารสกัด) การวิเคราะห์ดวงตะวันได้รับการดำเนินการโดยใช้ต่อไปนี้แอนติบอดีหลัก phospho เฉพาะ (Ser139) และรวม. H2AX สโตน (มือถือเทคโนโลยีการส่งสัญญาณ) และβ-โปรตีน (BD ชีววิทยาศาสตร์) แอนติบอดีมัธยมศึกษาที่ได้รับจากแจ็คสัน ImmunoResearch (เวสโกรฟ, PA) รวม phosphorylated สโตนระดับH2AX ปกติจะถูกเบต้าโปรตีน blots ตะวันตกได้รับการพัฒนาโดยใช้การตรวจสอบ chemiluminescence และวิเคราะห์โดยความหนาแน่น

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

เฉยๆของโปรตีนสารสกัดถูกตะวันตก
blot การวิเคราะห์ ( ทั้งเซลล์สารสกัด RIPA บัฟเฟอร์ ) หรือคั่นด้วยเอนไซม์ ( 10
% t ; เซลล์ biorad Mini ซึ่งเปลี่ยนแปลงได้มาก 3 ห้องปฏิบัติการ
biorad GmbH , M ü nchen , เยอรมนี ) สำหรับเพิ่มเติมในการย่อยอาหาร ( nuclearenriched
เจลสารสกัด ) การวิเคราะห์ Western blot แสดงโดยใช้
ต่อไปนี้แอนติบอดีหลัก : phospho เฉพาะ ( ser139 ) และรวม
ช่วย h2ax ( สัญญาณมือถือเทคโนโลยี ) และบีตา - actin ( BD BIOSCIENCES ( มัธยมศึกษา )

( ได้จาก แจ็คสัน immunoresearch ป่าตะวันตกป่า ) รวมและฟอสฟอรีเลเตตระดับ h2ax หมอกแดด
เป็นปกติกับบีตา - actin . blots ตะวันตกถูกพัฒนาโดยใช้การตรวจหาและวิเคราะห์ด้วย

densitometry เคมีลูมิเนสเซน