2.3. Tomato transformationThe gener

2.3. Tomato transformation
The generation of transgenic tomato plants was performed
according to the protocol as described (van Roekel et al., 1993).
Wild-type (cv. UC82B) and Beta mutant LA0316 tomato (Solanum
lycopersicum Mill.) seeds were provided by TGRC (http://www.
tgrc.ucdavis.edu/index.aspx). The presence and expression of the
transgenes was verified by RT-PCR using CrBKT and HpBHY specific
primers. The kanamycin-resistant putative transformed plants
were grown in a green house.
2.4. Pigment extraction and analysis
Caroenoids were extracted and analyzed as described (Huang
et al., 2006; Zhong et al., 2011). Pigments were identified on the basis
of absorption spectra and retention times relative to standard
compounds. Pigments were finally quantified by integrating peak
areas that were converted to concentrations by comparison with
authentic standards. Saponification of astaxanthin esters were performed
according to Yuan and Chen (1999) and allotments of the
extract solutions were analyzed by HPLC. Pigments were identified
by comparing retention times and spectra against known standards
and were finally quantified by integrating peak areas and converted
them to concentrations by comparison with authentic standards that
purchased from Sigma and Wako. Astaxanthin was measured at
480 nm and other carotenoids were measured at 450 nm.
2.5. Gene expression analysis
Total RNA samples were extracted from young tomato leaves or
fruit harvested at the break stage. Real-time quantitative RT-PCR of
endogenous carotenogenic genes was performed according to
Zhong et al. (2011). Primers used in this study are listed in
Table 1. PCR was run in a BIO-RAD iCycler IQ Multi-Color RealTime
PCR Detection System (Bio-Rad, Hercules, CA, USA). The relative
levels of the amplified mRNA were evaluated according to the
2−ΔΔCt method (Blois, 1958) using actin gene for normalization.
2.6. Photosynthesis analysis
The maximum quantum yield of PSII photochemistry was
measured in dark-adapted samples by (Fm−F0)/Fm¼Fv/Fm ratio,
where F0 is the dark-adapted initial fluorescence level and Fm is
the maximum fluorescence level. CO2 uptake (gas exchange) was
measured using an LI-6400 portable photosynthesis system
(LI-COR, http://www.licor.com). The leaf cuvette enclosed 6 cm2
of leaf and was equipped with a thermostat to control leaf
temperature. Light was provided by a Li-Cor light-emitting diode
(LED). Leaves were measured the rate of CO2 uptake (μmol
CO2 m−2
s
−1
) in light photons of 0–1600 μmol photons m−2
s
−1 until
the CO2 rate is not increasing.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.3. มะเขือเทศแปลงดำเนินการสร้างพืชมะเขือเทศถั่วเหลืองตามการโพรโทคอลเป็นอธิบาย (van Roekel et al., 1993)ชนิดป่า (พันธุ์ UC82B) และเบต้ากลายพันธุ์ (Solanum มะเขือเทศ LA0316lycopersicum โรงสี) เมล็ดได้จาก TGRC (http://wwwtgrc.ucdavis.edu/index.aspx) สถานะและค่าของการtransgenes ถูกตรวจสอบ โดย RT-PCR โดยใช้ CrBKT และ HpBHY เฉพาะไพรเมอร์ โรงงานแปรรูปของ putative กานามัยซินทนมีปลูกในกรีนเฮ้าส์2.4. pigment สกัดและวิเคราะห์แยก และวิเคราะห์เป็นอธิบาย (หวง Caroenoidsและ al., 2006 จงร้อยเอ็ด al., 2011) ระบุสีตามแรมสเป็คตราดูดซึมและรักษาเวลาเมื่อเทียบกับมาตรฐานสารประกอบ สีสุดท้ายถูก quantified โดยรวมสูงสุดพื้นที่ที่มีความเข้มข้นโดยเปรียบเทียบกับแปลงมาตรฐานอาหาร สะพอนิฟิของ astaxanthin esters ดำเนินตามหยวน และเฉิน (1999) และส่วนแบ่งของแยกโซลูชั่นถูกวิเคราะห์ ด้วย HPLC ระบุสีโดยการเปรียบเทียบแรมสเป็คตรากับมาตรฐานรู้จักและรักษาเวลาและสุดท้าย quantified โดยรวมพื้นที่สูง และแปลงเขาความเข้มข้น by comparison with แท้มาตรฐานที่ซื้อจากซิกและ Wako Astaxanthin เป็นวัดที่480 nm และ carotenoids อื่น ๆ ที่ถูกวัดที่ 450 nm2.5 การวิเคราะห์ยีนนิพจน์ตัวอย่างอาร์เอ็นเอทั้งหมดถูกสกัดจากมะเขือเทศหนุ่มใบ หรือผลไม้ที่เก็บเกี่ยวในระยะพัก จริงเชิงปริมาณ RT-PCR ของยีน endogenous carotenogenic ถูกดำเนินการตามจงร้อยเอ็ด al. (2011) ไพรเมอร์ที่ใช้ในการศึกษานี้อยู่ในตารางที่ 1 PCR ถูกเรียกใช้ใน iCycler BIO RAD IQ สีเรียลไทม์ระบบตรวจ PCR (Bio Rad เฮอร์คิวลิส CA, USA) ญาติระดับของ mRNA เอาต์ได้ประเมินตามวิธี 2−ΔΔCt (Blois, 1958) โดยใช้ยีนแอกตินสำหรับฟื้นฟู2.6 การวิเคราะห์สังเคราะห์ด้วยแสงมีผลตอบแทนสูงสุดควอนตัมของเคมีแสง PSIIวัดในตัวอย่าง dark-adapted โดย (Fm−F0) Fm¼Fv/อัตรา ส่วน Fmที่ F0 เป็นระดับเริ่มต้น fluorescence dark-adapted และ Fmระดับสูงสุด fluorescence ถูกดูดซับ CO2 (แลกเปลี่ยนก๊าซ)วัดโดยใช้ระบบการสังเคราะห์ด้วยแสงแบบ LI-6400(LI ประกอบ http://www.licor.com) Cuvette ใบแนบ 6 cm2ของใบไม้ และมาพร้อมกับอุณหภูมิที่ควบคุมใบอุณหภูมิ ให้ โดยมีหลี่ประกอบ แสง–ไดโอดเปล่งแสง(LED) ออกที่วัดอัตราการดูดซับ CO2 (μmolCO2 m−2s−1) ใน photons แสงของ 0 – 1600 μmol photons m−2s−1 จนถึงไม่มีการเพิ่มอัตรา CO2

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.3 การเปลี่ยนแปลงมะเขือเทศ
รุ่นของมะเขือเทศพันธุ์ที่ได้ดำเนินการ
ตามโครงการตามที่อธิบายไว้ (รถตู้ Roekel et al., 1993).
ป่าชนิด (พันธุ์. UC82B) และกลายพันธุ์มะเขือเทศเบต้า LA0316 (Solanum
lycopersicum Mill.) เมล็ดมีให้โดย TGRC (http: // www.
tgrc.ucdavis.edu/index.aspx) การแสดงตนและการแสดงออกของ
transgenes ได้รับการตรวจสอบโดย RT-PCR โดยใช้ CrBKT และ HpBHY เฉพาะ
ไพรเมอร์ kanamycin ทนเปลี่ยนสมมุติพืช
ที่ปลูกในบ้านสีเขียว.
2.4 สกัดรงควัตถุและการวิเคราะห์
Caroenoids ถูกสกัดและวิเคราะห์ตามที่อธิบายไว้ (Huang
et al, 2006;.. จง et al, 2011) เม็ดสีที่ถูกระบุบนพื้นฐาน
ของสเปกตรัมการดูดซึมและการเก็บรักษาครั้งเมื่อเทียบกับมาตรฐาน
สาร เม็ดสีถูกวัดในที่สุดโดยการบูรณาการสูงสุด
ในพื้นที่ที่ได้รับการแปลงเป็นความเข้มข้นโดยเปรียบเทียบกับ
มาตรฐานที่แท้จริง สะพอของเอสเทอ astaxanthin ได้ดำเนินการ
ตามหยวนและเฉิน (1999) และการจัดสรรหุ้นของ
การแก้ปัญหาสารสกัดมาวิเคราะห์โดยวิธี HPLC เม็ดสีที่ถูกระบุ
โดยการเปรียบเทียบเวลาการเก็บรักษาและสเปกตรัมกับมาตรฐานเป็นที่รู้จัก
และได้รับการวัดในที่สุดโดยการบูรณาการพื้นที่สูงสุดและแปลง
ให้พวกเขามีความเข้มข้นโดยเปรียบเทียบกับมาตรฐานของแท้ที่
ซื้อมาจาก Sigma และ Wako Astaxanthin วัดที่
480 นาโนเมตรและนอยด์อื่น ๆ ที่ถูกวัดที่ 450 นาโนเมตร.
2.5 การวิเคราะห์การแสดงออกของยีน
รวมตัวอย่าง RNA ถูกสกัดจากใบมะเขือเทศหนุ่มสาวหรือ
ผลไม้ที่เก็บเกี่ยวในขั้นตอนการแบ่ง เชิงปริมาณแบบ Real-time RT-PCR ของ
ยีน carotenogenic ภายนอกได้ดำเนินการตาม
Zhong et al, (2011) ไพรเมอร์ที่ใช้ในการศึกษาครั้งนี้มีการระบุไว้ใน
ตารางที่ 1 PCR ได้รับการทำงานใน BIO-RAD iCycler IQ หลายสีเรียลไทม์
พีซีอาระบบตรวจจับ (Bio-Rad ดาว, CA, USA) ญาติ
ระดับของ mRNA ขยายได้รับการประเมินตาม
2 วิธีΔΔCt (บลัว, 1958) โดยใช้ยีนโปรตีนสำหรับการฟื้นฟู.
2.6 การวิเคราะห์สังเคราะห์
ผลผลิตสูงสุดของควอนตัมเคมี PSII ถูก
วัดในตัวอย่างเข้มเหมาะ (Fm-F0) / Fm¼Fv / อัตราส่วน Fm,
ที่ F0 เป็นระดับเริ่มต้นการเรืองแสงที่มืดปรับ Fm และเป็น
ระดับสูงสุดเรืองแสง การดูดซึม CO2 (ก๊าซแลกเปลี่ยน) ได้รับการ
วัดโดยใช้ระบบการสังเคราะห์แสงแบบพกพา LI-6400
(LI-COR, http://www.licor.com) cuvette ใบล้อมรอบ 6 cm2
ของใบและติดตั้งเทอร์โมในการควบคุมใบ
อุณหภูมิ แสงถูกจัดให้โดยไดโอดเปล่งแสง Li-Cor
(LED) ใบมีการวัดอัตราการดูดซึม CO2 (ไมโครโมล
CO2 ม-2
s
-1
) ในแง่ของโฟตอน 0-1600 ไมโครโมลโฟตอนของ m-2
s
-1 จนกว่า
อัตรา CO2 จะไม่เพิ่มขึ้น

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.3 มะเขือเทศพืชมะเขือเทศรุ่นแปลง

ต้นถูกดำเนินการตามขั้นตอนตามที่อธิบายไว้ ( รถตู้ roekel et al . , 1993 ) .
ป่าประเภทพันธุ์ uc82b ) และเบต้ากลายพันธุ์ la0316 มะเขือเทศ ( โซลานัม
lycopersicum Mill . ) เมล็ดโดย tgrc ( http : / / www . aspx
tgrc . ucdavis . edu / index ) การแสดงและการแสดงออกของ
transgenes ถูกตรวจสอบความถูกต้องโดย RT-PCR โดยใช้ไพรเมอร์ที่จำเพาะและ crbkt
hpbhy . ที่ซึ่งทั้งสองทนเปลี่ยนพืชปลูกในบ้านสีเขียว
.
2.4 . การสกัดสีและการวิเคราะห์
caroenoids สกัดและวิเคราะห์ตามที่อธิบายไว้ ( Huang
et al . , 2006 ; จง et al . , 2011 ) สีที่ระบุบนพื้นฐาน
ของการดูดกลืนรังสีและความคงทนครั้งเทียบกับสารมาตรฐาน

สี quantified โดยรวมได้สูงสุด
พื้นที่ที่แปลงความเข้มข้นโดยการเปรียบเทียบกับ
มาตรฐานของแท้ ซิฟิเคชั่นของแอสตาแซนทินเอสเทอร์ )
ตามหยวน เฉิน ( 1999 ) และ allotments ของ
สกัดโซลูชั่นวิเคราะห์โดย HPLC สีที่ระบุโดยการเปรียบเทียบความคงทนครั้ง

รู้จัก Spectra กับมาตรฐานและในที่สุด quantified โดยรวมพื้นที่สูงสุดและแปลง
ให้ความเข้มข้นโดยการเปรียบเทียบกับของแท้มาตรฐาน
ซื้อจาก Sigma และ Wako . แอสตาแซนทิน เป็นวัดที่
480 nm และ carotenoids อื่น ๆจำนวน 450 nm .
2.5 การวิเคราะห์การแสดงออกของยีนยีน
รวมจำนวนที่สกัดจากใบมะเขือเทศเล็กหรือ
ผลที่อายุหยุดเวทีเทคนิคเชิงปริมาณในเวลาจริง
carotenogenic ยีนได้ปฏิบัติตาม
จง et al . ( 2011 ) ไพรเมอร์ที่ใช้ในการศึกษานี้อยู่ใน
โต๊ะ 1 เพื่อใช้ใน icycler Bio-rad ไอคิวหลากสีแบบ Realtime PCR ระบบตรวจจับ ( ไบโอ
กรมการศาสนา , Hercules , CA , USA ) ระดับญาติ
ของขยาย mRNA ถูกประเมินตาม
2 −ΔΔ CT ( มะระ ) ,1958 ) ใช้สำหรับการฟื้นฟูของ actin .
2.6 การสังเคราะห์แสงสูงสุดการวิเคราะห์
ควอนตัมผลผลิตของ psii เมอร์ลินถูก
วัดในสีเข้มเหมาะ ตัวอย่าง ( FM −ละ ) / FM ¼ FV / FM ต่อ
ที่ละเป็นสีเข้มและเริ่มต้นการปรับระดับเป็นระดับ FM
เรืองสูงสุด การดูดซึม ( แลกเปลี่ยนก๊าซ CO2 ) คือการวัดแสงแบบพกพาระบบ

( li-cor http://www.licor li-6400 , .com ) ใบแนบใบ CM2
6 คิวเวตต์และอุปกรณ์ที่มีอุณหภูมิเพื่อควบคุมอุณหภูมิของใบ

แสงถูกจัดให้โดย Li สีไดโอดเปล่งแสง ( LED )
. ใบวัดอัตราการดูดก๊าซคาร์บอนไดออกไซด์ ( CO2 μ mol

s
2 m −− 1
) โฟตอนแสง 0 – 1 , 600 μ mol โฟตอน m − 2
s

− 1 จนกระทั่ง CO2 ราคาไม่เพิ่มขึ้น