Primer pair specificity was tested

Primer pair specificity was tested by amplification of the target
in 10 ng reference material gDNA. A sample is considered as positive
if a specific signal is generated with a SYBR_Green qPCR
method according to the following criteria: (1) (exponential)
amplification (increase of fluorescence) should be obtained using
template DNA containing the target sequence(s), while negative
controls (No Template Controls (NTC) and/or gDNA from
non-target-plants) do not yield amplification. (2) For all positive
reactions, the obtained PCR product should represents a single
peak in melting analysis with a unique Tm value corresponding
to the nominal Tm value obtained for the corresponding Sybric on
or pENGL template (with an acceptable difference of ±1 C), while
no specific peaks should be detectable in the negative controls.
Also (3), a single band should be obtained in agarose gel analysis
with a molecular weight corresponding to the predicted amplicons
size (SD ± 10 bp). All these criteria were assessed with the developed
primers (Fig. 3).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

รองพื้นที่คู่ความได้รับการทดสอบ โดยขยายของเป้าหมายใน 10 ฉบับอ้างอิงวัสดุ gDNA ตัวอย่างถือว่าเป็นบวกถ้าสัญญาณเฉพาะถูกสร้าง ด้วย SYBR_Green qPCRวิธีตามเงื่อนไขต่อไปนี้: (1) (เนน)ขยาย (เพิ่มขึ้นของสารเรืองแสง) ควรได้รับใช้แม่แบบดีเอ็นเอที่ประกอบด้วยการเป้าหมาย sequence(s) ในขณะที่ลบควบคุม (ไม่มีแม่แบบตัวควบคุม (NTC) และ gDNA จากเป้าหมายพืชที่ไม่ใช่) ให้ขยาย (2) สำหรับเป็นบวกทั้งหมดปฏิกิริยา ผลิตภัณฑ์ PCR ได้รับควรแสดงเดียวสูงสุดในการละลายการวิเคราะห์ ด้วยการเฉพาะ Tm ค่าที่สอดคล้องค่า Tm น้อยได้ Sybric สอดคล้องในหรือแม่ pENGL (ด้วยการยอมรับความแตกต่างของ± 1 C), ในขณะที่ยอดเฉพาะไม่ควรตรวจในตัวควบคุมที่เป็นค่าลบยัง (3), วงเดียวควรได้รับใน agarose เจวิเคราะห์มีน้ำหนักโมเลกุลที่สอดคล้องกับ amplicons คาดการณ์ไว้ขนาด (SD ± 10 bp) เกณฑ์เหล่านี้ถูกประเมิน มีการพัฒนาไพรเมอร์ (3 รูป)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ไพรเมอร์ที่เฉพาะเจาะจงคู่ได้รับการทดสอบโดยการขยายของเป้าหมาย
ใน 10 NG gDNA วัสดุอ้างอิง ตัวอย่างถือว่าเป็นบวก
ถ้าสัญญาณที่เฉพาะเจาะจงจะถูกสร้างขึ้นด้วย SYBR_Green qPCR
วิธีการตามหลักเกณฑ์ดังต่อไปนี้ (1) (ชี้แจง)
ขยาย (เพิ่มขึ้นของการเรืองแสง) ควรจะได้รับโดยใช้
ดีเอ็นเอแม่แบบที่มีเป้าหมายลำดับ (s) ในขณะที่ เชิงลบ
การควบคุม (ไม่มีการควบคุมแม่แบบ (กทช) และ / หรือจาก gDNA
ไม่ใช่เป้าหมายพืช) ไม่ได้ผลผลิตขยาย (2) สำหรับบวกทั้งหมด
ปฏิกิริยาผลิตภัณฑ์ PCR ได้ควรแสดงให้เห็นถึงเดียว
สูงสุดในการวิเคราะห์ที่มีมูลค่า Tm ที่ไม่ซ้ำกันที่สอดคล้องละลาย
กับค่า Tm ระบุได้สำหรับ Sybric ที่สอดคล้องกันบน
หรือ pENGL แม่แบบ (ที่มีความแตกต่างที่ยอมรับได้ของ± 1 องศาเซลเซียส ) ในขณะที่
ไม่มียอดเฉพาะควรจะตรวจพบในการควบคุมเชิงลบ.
นอกจากนี้ (3), วงเดียวควรจะได้รับในการวิเคราะห์ agarose gel ที่
มีน้ำหนักโมเลกุลที่สอดคล้องกับ amplicons คาดการณ์
ขนาด (SD ± 10 bp) เกณฑ์ทั้งหมดเหล่านี้ได้รับการประเมินกับการพัฒนา
ไพรเมอร์ (รูปที่. 3)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

เฉพาะคู่หลักคือการทดสอบโดยการเพิ่มเป้าหมายใน 10 gdna วัสดุของการอ้างอิง ตัวอย่างที่เป็นบวกถ้าสัญญาณเฉพาะถูกสร้างขึ้นด้วย sybr_green qpcrวิธีตามเกณฑ์ต่อไปนี้ : ( 1 ) ( exponential )( ( เพิ่มของ fluorescence ) ควรจะได้ใช้แม่แบบดีเอ็นเอที่มีลำดับเป้าหมาย ( s ) , ในขณะที่ลบการควบคุม ( ไม่มีแม่แบบการควบคุม ( กทช. ) และ / หรือ gdna จากพืชเป้าหมายไม่ให้ผลผลิต ( ไม่ ) . ( 2 ) ทุกบวกปฏิกิริยา ได้ผลผลิต PCR จะแสดงเดี่ยวสูงสุดในจุดหลอมเหลวการวิเคราะห์ที่มีความโดดเด่นและคุณค่าที่สอดคล้องกันสำหรับเพื่อระบุค่าได้ ซึ่งสำหรับ sybric ที่สอดคล้องกันบนหรือ pengl แม่แบบ ( มีความแตกต่างที่ยอมรับได้ของ± 1 C ) ขณะที่ไม่มียอดเฉพาะควรจะตรวจพบในการควบคุมค่า( 3 ) เป็นวงเดียว ควรจะได้รับในเจล , การวิเคราะห์ที่มีน้ำหนักโมเลกุลที่สอดคล้องกับคาดการณ์ ampliconsขนาด ( SD ± 10 BP ) เกณฑ์เหล่านี้ทั้งหมดจะถูกประเมินด้วยพัฒนาไพรเมอร์ ( รูปที่ 3 )