2.5. Enzyme assaysRandomly selected

2.5. Enzyme assays
Randomly selected potato slices were collected at 0, 3, 6, 9, 12 days after fresh cut and frozen immediately by liquid nitrogen. The samples were then grinded with liquid nitrogen into frozen powder by an analytic mill (IKA A11 basic; IKA Werke GmbH & Co. KG, Staufen, Germany), and stored at −80 °C until used. PPO activity was analysed based on the method described by Galeazzi, Sgarbieri, and Constantinides (1981). One g of frozen powder was homogenized with 4 mL of phosphate buffer (pH 7.0) and 0.1 g insoluble polyvinylpolypyrrolidone (PVPP), centrifuged at 10,000×g for 15 min at 4 °C, and the supernatant was used for analysis. The reactive mixture consisted of 0.1 ml of enzyme extracts, 2 ml of 200 mM phosphate buffer (pH 6.8) and 0.5 mL of 20 mM catechol solution. Enzyme activity was measured by the increase in absorbance at 410 nm. One unit of enzyme activity was defined as the increase in absorbance of 0.01 per min under assay conditions. PPO activity was expressed as unit of activity per mg protein per h. Protein content was measure as described by ( Bradford, 1976) from the same extraction buffer at pH 7.0.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.5. เอนไซม์ assaysสุ่มเลือกมันฝรั่งชิ้นถูกเก็บรวบรวมที่ 0, 3, 6, 9, 12 วันหลังสดตัด และแช่แข็งทันที โดยไนโตรเจนเหลว ตัวอย่างดีแล้ว grinded กับไนโตรเจนเหลวเป็นผงแช่แข็งโดยมีโรงสีโกดัง (A11 IKA พื้นฐาน IKA Werke GmbH & Co. KG, Staufen เยอรมนี), และเก็บไว้ที่ −80 ° C จนกว่าจะใช้ กิจกรรม PPO เป็น analysed ตามวิธีที่อธิบายไว้ โดย Galeazzi, Sgarbieri และ Constantinides (1981) หนึ่งกรัมของผงแช่แข็งถูก homogenized เป็นกลุ่มกับ mL 4 ฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (pH 7.0) และ polyvinylpolypyrrolidone ละลาย 0.1 g (PVPP), centrifuged 10, 000 กรัม× 15 นาทีที่ 4 ° C และ supernatant ถูกใช้สำหรับการวิเคราะห์ ผสมปฏิกิริยาประกอบด้วยสารสกัดจากเอนไซม์ 0.1 มล. 2 ml 200 mM ฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (pH 6.8) และ 0.5 mL ของโซลูชัน catechol 20 มม. เอนไซม์ถูกวัด โดยเพิ่ม absorbance ที่ 410 nm หน่วยหนึ่งของเอนไซม์ถูกกำหนดเป็นเพิ่ม absorbance ของ 0.01 ต่อนาทีภายใต้เงื่อนไขการทดสอบ กิจกรรม PPO ได้แสดงเป็นหน่วยของกิจกรรมต่อมิลลิกรัมโปรตีนต่อ h. โปรตีน วัดตามที่อธิบายไว้ โดย (แบรดฟอร์ด 1976) จากเดิมแยกบัฟเฟอร์ที่ pH 7.0

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.5 สมรรถนะของเอนไซม์
สุ่มเลือกชิ้นมันฝรั่งถูกเก็บที่ 0, 3, 6, 9, 12 วันหลังจากตัดสดและแช่แข็งทันทีโดยไนโตรเจนเหลว ตัวอย่างที่ถูกบดแล้วด้วยไนโตรเจนเหลวเป็นผงแช่แข็งจากโรงงานวิเคราะห์ (IKA A11 พื้นฐาน IKA Werke GmbH & Co. KG, Staufen, เยอรมนี) และเก็บไว้ที่ -80 ° C จนใช้ กิจกรรม PPO วิเคราะห์ขึ้นอยู่กับวิธีการที่อธิบายโดย Galeazzi, Sgarbieri และ Constantinides (1981) หนึ่งกรัมของผงแช่แข็งทำให้เป็นเนื้อเดียวกันมี 4 มิลลิลิตรฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (pH 7.0) และ 0.1 กรัมละลาย polyvinylpolypyrrolidone (PVPP) หมุนเหวี่ยงที่ 10,000 กรัม× 15 นาทีที่ 4 ° C และสารละลายที่ใช้ในการวิเคราะห์ ส่วนผสมปฏิกิริยาประกอบด้วย 0.1 มล. ของสารสกัดเอนไซม์ 2 มิลลิลิตร 200 มิลลิฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (pH 6.8) และ 0.5 มิลลิลิตร 20 มมโซลูชั่น catechol กิจกรรมของเอนไซม์โดยวัดจากการเพิ่มขึ้นของการดูดกลืนแสงที่ 410 นาโนเมตร หนึ่งหน่วยของเอนไซม์ถูกกำหนดเป็นเพิ่มขึ้นในการดูดกลืนแสง 0.01 ต่อนาทีภายใต้เงื่อนไขการทดสอบ กิจกรรม PPO ได้แสดงออกเป็นหน่วยของกิจกรรมต่อมิลลิกรัมโปรตีนต่อชั่วโมง ปริมาณโปรตีนที่เป็นตัวชี้วัดตามที่อธิบาย (แบรด, 1976) จากสารสกัดเดียวกันที่พีเอช 7.0

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.5 ตรวจเอนไซม์
สุ่มเก็บชิ้นมันฝรั่งที่ 0 , 3 , 6 , 9 , 12 วัน หลังจากตัดสดและแช่แข็งทันทีด้วยไนโตรเจนเหลว จำนวนแล้วบดด้วยไนโตรเจนเหลวแช่แข็งโดยการบดผงในการวิเคราะห์ ( Ika Ika A11 พื้นฐาน werke GmbH & Co . KG , Staufen , เยอรมนี ) , และเก็บไว้ที่− 80 ° C จนใช้กิจกรรมของเอนไซม์ PPO วิเคราะห์ตามวิธีที่อธิบายไว้โดย galeazzi sgarbieri , และ constantinides ( 1981 ) หนึ่งกรัมของผงบดแช่แข็ง 4 มิลลิลิตร ฟอสเฟตบัฟเฟอร์ pH 7.0 ) และ 0.1 กรัม ละลายน้ำ polyvinylpolypyrrolidone ( pvpp ) ที่ระดับ 10 , 000 × G สำหรับ 15 นาทีที่ 4 ° C และนำมาใช้สำหรับการวิเคราะห์ ผสมสีจำนวน 0.1 มิลลิลิตรเอนไซม์ สารสกัด2 มิลลิลิตร 200 มิลลิเมตร ( ฟอสเฟตบัฟเฟอร์พีเอช 6.8 ) และ 0.5 มิลลิลิตรของสารละลายแคติคอล 20 มิล กิจกรรมของเอนไซม์ถูกวัดโดยการเพิ่มค่าการดูดกลืนแสงที่ 410 นาโนเมตร หนึ่งหน่วยของเอนไซม์ถูกนิยามในฐานะที่เป็นเพิ่มค่า 0.01 ต่อนาทีภายใต้เงื่อนไขการทดสอบ กิจกรรมของเอนไซม์ PPO จะแสดงเป็นหน่วยของกิจกรรมต่อโปรตีนมิลลิกรัมต่อชั่วโมง โปรตีนคือวัดตามที่อธิบายไว้โดยแบรดฟอร์ด2519 ) จากเดิมใช้สารพีเอช 7.0 .