Time-kill studyTime-kill studies we

Time-kill study
Time-kill studies were conducted using S. aureus Smith and E. faecalis
JCM5803 strains grown in nutrient and Heart infusion broth (Difco, Franklin
Lakes, NJ, USA), respectively. The antibiotics that were added were used at the
MIC as well as at two and four times this concentration. The initial inoculums
contained 5107–8107 CFU per ml. Viability counts in antibiotic-treated
cultures were performed at 0, 5, 15, 30 and 60min after addition of antibiotics.
The colony units were determined from plates forming 30–300 bacterial
colonies.
Inhibition of macromolecular synthesis
Inhibition of macromolecular synthesis was assayed by measuring the incorporation
of radioactive precursors into the precipitate with 10% trichloroacetic
acid for peptidoglycan, fatty acid, DNA, RNA and protein synthesis. S. aureus
or E. faecalis grown in nutrient broth at the early exponential phase of growth,
in which the OD density at 600 nm (OD600) was approximately 0.3, were
seeded into 96-well plates using 90 ml of culture per well, and then preincubated
at 37 1C for 5min with antibiotics. The nutrient broth consisted of 1%
polypeptone (Wako, Osaka, Japan), 1% fish meat extract (Kyokuto, Tokyo,
Japan) and 0.2% NaCl (Wako) in deionized water (pH 7.0 before sterilization).
The following radiolabeled compounds were added to cells for the indicative
assays: peptidoglycan assay, 1 mCi of N-acetyl-D-[1–3H] glucosamine (GE
Healthcare Bioscience, Fairfield, CT, USA); fatty acid assay, 1 mCi of [1-14C]
acetate (GE Healthcare Bioscience); DNA assay, 1 mCi of [methyl-3H] thymidine
(GE Healthcare Bioscience); RNA assay, 1 mCi of [5,6-3H] uridine (GE
Healthcare Bioscience); and Protein assay, 5 mCi of L-[4,5-3H] leucine (GE
Healthcare Bioscience). After incubation for 10 min at 37 1C, the reaction
mixtures were quenched by adding an equal volume of 10% TCA. The reaction
mixtures were further incubated for 10 min at room temperature, and then the
solutions were transferred into 96-well filter plates (MultiScreen HTS; Millipore,
Billerica, MA, USA) and the filters were washed five times with 5% TCA.
After drying, the radioactivity of the filters were counted using a liquidscintillation
counter (Tri-Carb 2800TR, PerkinElmer, Waltham, MA, USA).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ฆ่าเวลาศึกษา
ฆ่าเวลาการศึกษาได้ดำเนินการโดยใช้หมอเทศข้างลาย S. faecalis สมิธและ E.
JCM5803 สายพันธุ์ที่ปลูกในสารอาหารและหัวใจคอนกรีตซุป (Difco แฟรงคลิน
ทะเลสาบ NJ สหรัฐอเมริกา), ตามลำดับ ใช้ยาปฏิชีวนะที่เพิ่มที่การ
ไมค์เช่นกันเป็นที่สองและครั้งนี้เข้มข้น Inoculums เริ่มต้น
อยู่ 5 107-8 107 CFU ต่อมล.จำนวนนี้ในการรักษายาปฏิชีวนะ
วัฒนธรรมดำเนินที่ 0, 5, 15, 30 และ 60 นาทีหลังจากนี้ของยาปฏิชีวนะ
หน่วยโคโลนีถูกกำหนดจากแผ่นขึ้นรูปแบคทีเรีย 30 – 300
อาณานิคม
ยับยั้งการสังเคราะห์ macromolecular
ยับยั้งการสังเคราะห์ macromolecular ถูก assayed โดยวัดจดทะเบียน
ของ precursors กัมมันตรังสีเป็น precipitate กับ trichloroacetic 10%
กรดสำหรับเปบทิโดไกลแคน กรดไขมัน DNA การสังเคราะห์อาร์เอ็นเอและโปรตีน S. หมอเทศข้างลาย
E. faecalis ปลูกที่ระยะเนนต้นเจริญเติบโต ซุปธาตุอาหารหรือ
ที่ OD ความหนาแน่นที่ 600 nm (OD600) ได้ประมาณ 0.3 ถูก
seeded เป็นแผ่น 96-ดีที่ใช้ 90 ml ของวัฒนธรรมต่อดี แล้ว preincubated
ที่ 1C 37 สำหรับ 5 นาทีกับยาปฏิชีวนะ ซุปธาตุอาหารประกอบด้วย 1%
polypeptone (Wako โอซาก้า ญี่ปุ่น), สารสกัดจากเนื้อปลา 1% (Kyokuto โตเกียว,
ญี่ปุ่น) และ 0.2% NaCl (Wako) ในน้ำ deionized (pH 7.0 ก่อนฆ่าเชื้อ) .
radiolabeled สารประกอบต่อไปนี้ถูกเพิ่มเซลล์สำหรับการบ่งชี้
assays: วิเคราะห์เปบทิโดไกลแคน mCi 1 ของ N-acetyl - D - glucosamine [1-3H] (GE
ซื้อสุขภาพ แฟร์ฟิลด์ CT สหรัฐอเมริกา); การวิเคราะห์กรดไขมัน mCi 1 [1-14 เซลเซียส]
acetate (GE ซื้อสุขภาพ); วิเคราะห์ดีเอ็นเอ 1 mCi ของ [methyl - 3H] thymidine
(GE สุขภาพซื้อ); วิเคราะห์อาร์เอ็นเอ mCi 1 ของ [5,6-3 H] uridine (GE
ซื้อสุขภาพ); และ วิเคราะห์โปรตีน mCi 5 L-[4,5-3 H] leucine (GE
ซื้อสุขภาพ) หลังจากฟักตัวใน 10 นาทีที่ 37 1C ปฏิกิริยา
น้ำยาผสมถูก quenched โดยการเพิ่มปริมาตรการเท่ากันของ 10% TCA ปฏิกิริยา
น้ำยาผสมเพิ่มเติมได้ incubated ใน 10 นาทีที่อุณหภูมิห้อง แล้ว
โซลูชั่นถูกโอนย้ายไปยังแผ่น 96 ดีกรอง (MultiScreen เมอร์ มาก,
Billerica, MA สหรัฐอเมริกา) และตัวกรองที่ถูกล้างห้าครั้ง ด้วย 5% TCA
หลังจากแห้ง radioactivity ของตัวกรองที่นับได้โดยใช้การ liquidscintillation
เคาน์เตอร์ (Tri-คาร์โบไฮเดรต 2800TR, PerkinElmer, Waltham, MA สหรัฐอเมริกา)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

เวลาฆ่าศึกษา
ฆ่าเวลา การศึกษาการใช้ S . aureus สมิธและ E . faecalis
jcm5803 สายพันธุ์ที่ปลูกในสารอาหารและน้ำแช่หัวใจ ( difco แฟรงคลิน
ทะเลสาบ , NJ , USA ) ตามลำดับ ยาปฏิชีวนะที่ถูกเพิ่มจำนวนใน
ไมค์ รวมทั้งสองและสี่ครั้ง สมาธินี้
18 ชั่วโมงเริ่มต้นมีอยู่ 5  107 107 CFU ต่อมิลลิลิตร– 8  สามารถนับในการรักษา
วัฒนธรรม มีการปฏิบัติที่ 0 , 5 , 15 , 30 และ 60min หลังจากเพิ่มยาปฏิชีวนะ
อาณานิคมหน่วยได้พิจารณาจากรูปจาน 30 – 300

การยับยั้งแบคทีเรียอาณานิคม การยับยั้งการสังเคราะห์
macromolecular การสังเคราะห์ macromolecular ซีรั่มโดยการวัดการตั้งต้นที่เป็นตะกอนของสารกัมมันตรังสี

กรดไตรคลอโรอะซิติก กับ 10 % เปบทิโดไกลแคนกรดไขมัน , กรด , ดีเอ็นเอ ,การสังเคราะห์ RNA และโปรตีน S . aureus
E . faecalis หรือปลูกในน้ำสารอาหารที่ระยะ exponential แรกของการเจริญเติบโต
ที่ OD ความหนาแน่นที่ 600 nm ( od600 ) อยู่ที่ประมาณ 0.3 , เมล็ดลงในจานใช้ดี
96 90 มิลลิลิตรต่อวัฒนธรรมดี แล้ว preincubated
37 1C สำหรับ 5 นาทีกับยาปฏิชีวนะ ซุปสารอาหารประกอบด้วย 1 %
polypeptone ( Wako โอซาก้า , ญี่ปุ่น )1 ปลาเนื้อสกัด ( kyokuto , โตเกียว ,
ญี่ปุ่น ) และ 0.2 % NaCl ( Wako ) คล้ายเนื้อเยื่อประสานน้ำ ( pH 7.0 ก่อนทำหมัน )
radiolabeled สารประกอบต่อไปนี้ถูกเพิ่มไปยังเซลล์สำหรับใช้บ่งชี้
: เปปติโดไกลแคน ( 1 มิลลิคูรีของ n-acetyl-d - [ 1 – 3 ] กลู ( GE
การแพทย์วิทยาศาสตร์ชีวภาพ Fairfield , CT , สหรัฐอเมริกา ) ; กรดไขมันโดย 1 มิลลิคูรี [ 1-14c ]
อะซิเตท ( GE Healthcare Bioscience ) ; การทดสอบดีเอ็นเอmethyl-3h เพียง 1 มิลลิคูรี [ ]
( GE Healthcare Bioscience ) ; RNA assay , 1 มิลลิคูรี [ 5,6-3h ] ยูริดีน ( GE
การแพทย์วิทยาศาสตร์ชีวภาพ ) ; และ การทดสอบโปรตีน 5 มิลลิคูรีของ L - [ 4,5-3h ] ลูซีน ( GE
การแพทย์วิทยาศาสตร์ชีวภาพ ) หลังจากบ่มเป็นเวลา 10 นาทีที่ 37 1C , ปฏิกิริยา
ผสมถูกดับโดยการเพิ่มปริมาณเท่ากับ 10 % TCA . ปฏิกิริยา
ผสมได้ บ่มเป็นเวลา 10 นาที ที่อุณหภูมิห้องแล้ว
โซลูชั่นโอนเข้า 96 ด้วยแผ่นกรอง ( multiscreen hts ; มิลลิ ,
โตเกียว , MA , USA ) และตัวกรองถูกซักห้าเท่ากับ 5% TCA .
หลังจากการอบแห้ง , กัมมันตภาพรังสีของตัวกรองจะถูกตรวจนับการใช้ liquidscintillation
เคาน์เตอร์ ( Tri คาร์โบไฮเดรต 2800tr Perkinelmer ทัม , , , แม่ , สหรัฐอเมริกา )