Genomic DNA isolationGenomic DNA ex

Genomic DNA isolation
Genomic DNA extraction was done according to the method by Ausubel et al.(10).About 1.5 ml ot the bacterial culture was decanted into a sterile eppendorf tube and was centrifuged for 1 minute,at 10000 rpm. The supernatant was decanted completely and the pellet was resuspended in 700 ml Glucose-EDTA-Tris-HCL buffer. Subsequently,50 ml of 10% sodium dodecyl sulphate and 5 ml of 20 mg ml-1 proteinase K were added to the suspension and the cells were lysed for 20 minutes at 60C in a water bath shaker. After the incubation, 500 ml of Phenol-Cheoroform-Isoamyl Alcohol mixture were added and mixed gently for 5 minutes. The mixture was centrifuged for 1 minute at 12000 rpm. About 200 ml of the aqueous upper layer was collected in an eppendorf tube and then 200 ml of 3 M sodium acetate and 800 ml of isopropanol were added. The precipitated DNA was recovered by centrifugation for 10 minutes at 12000 rpm. The pellet was washed with 600 ml of 70% ethanol. After centrifuging for 10 minutes at 12000 rpm the pellet was dried at room temperature for 30 minnutes. The dried pellet was resuspended in 50 ml of sterile water and used immediately for PCR analysis.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

การแยกดีเอ็นเอจีโนมการสกัดดีเอ็นเอจีโนม
ทำตามวิธีการโดย Ausubel et al,. (10). ประมาณ 1.5 มล. ot วัฒนธรรมแบคทีเรียถูกถ่ายเข้าสู่หลอด Eppendorf ผ่านการฆ่าเชื้อและได้รับการหมุนเหวี่ยง 1 นาทีที่ 10000 รอบต่อนาที ใสได้อย่างสมบูรณ์และวเม็ดถูก resuspended ในบัฟเฟอร์ 700 มล. กลูโคส EDTA-tris-hcl ต่อมา50 มล. 10% โซเดียมโดเดซิลซัลเฟตและ 5 ml 20 มิลลิกรัมต่อมิลลิลิตร-1 โปร k ที่ถูกเพิ่มเข้าระงับและเซลล์ถูก lysed เป็นเวลา 20 นาทีที่ 60c ในเครื่องปั่นน้ำอาบ หลังจากการบ่ม, 500 มล. ของฟีนอล-cheoroform-isoamyl ผสมเครื่องดื่มแอลกอฮอล์ที่เพิ่มขึ้นและผสมเบา ๆ เป็นเวลา 5 นาที ส่วนผสมที่ถูกหมุนเหวี่ยง 1 นาทีที่ 12000 รอบต่อนาทีประมาณ 200 มิลลิลิตรของชั้นบนน้ำถูกเก็บรวบรวมในหลอด Eppendorf แล้ว 200 มล. จาก 3 เมตร acetate โซเดียมและ 800 มล. ของ isopropanol ถูกเพิ่ม dna ตกตะกอนก็หายปั่นเวลา 10 นาทีที่ 12000 รอบต่อนาที เม็ดที่ถูกล้างด้วย 600 มล. 70% เอทานอล หลังจากการปั่นแยกเป็นเวลา 10 นาทีที่ 12000 รอบต่อนาทีเม็ดแห้งที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 30 minnutesเม็ดแห้งถูก resuspended ใน 50 มิลลิลิตรของน้ำหมันและใช้งานได้ทันทีสำหรับการวิเคราะห์ pcr

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

Genomic DNA แยก
Genomic DNA สกัดทำตามวิธีการ โดย Ausubel et al.(10)ประมาณ 1.5 ml ot วัฒนธรรมแบคทีเรียถูก decanted ใน eppendorf ใส่หลอด แล้วถูก centrifuged 1 นาที ที่ 10000 รอบต่อนาที ถูก decanted supernatant สมบูรณ์ และเม็ดถูก resuspended ในบัฟเฟอร์กลูโคส-EDTA-ตรี-HCL 700 ml ในเวลาต่อมาเพิ่ม 50 ml ของ 10% โซเดียมซัลเฟต dodecyl และ 5 ml ของ 20 mg ml-1 proteinase K เพื่อการระงับ และเซลล์ถูก lysed ที่ 60C ในการเชคเกอร์อาบน้ำ 20 นาที หลังจากบ่ม ขนาด 500 มล.ส่วนผสมแอลกอฮอล์ Isoamyl วาง Cheoroform ถูกเพิ่ม และผสมเบา ๆ ใน 5 นาที ส่วนผสมถูก centrifuged 1 นาทีที่ 12000 รอบต่อนาที ประมาณ 200 ml ของชั้นบนสเอาท์รวบรวมในท่อการ eppendorf และ 200 มลของ 3 M โซเดียม acetate และ 800 ml ของ isopropanol ถูกเพิ่ม ดีเอ็นเอ precipitated การกู้คืน โดย centrifugation ที่ 12000 รอบต่อนาที 10 นาที เม็ดถูกล้าง ด้วย 600 ml ของเอทานอล 70% หลัง centrifuging 10 นาทีที่ 12000 รอบต่อนาที เม็ดในที่แห้งอุณหภูมิห้องสำหรับ 30 minnutes เม็ดแห้ง resuspended ใน 50 ml ใส่น้ำ และใช้สำหรับวิเคราะห์ PCR ทันที

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ระบบขจัดเสียงรบกวน genomic ดีเอ็นเอ
genomic ดีเอ็นเอเลือดเป็นไปตามวิธีโดย ausubel et al .( 10 )ประมาณ 1.5 มล. OT ที่เกิดจากเชื้อแบคทีเรียวัฒนธรรมเป็น decanted ในที่ปลอดเชื้อ eppendorf ท่อดูดฝุ่นและเป็น centrifuged สำหรับ 1 นาที,ที่ 10000 รอบต่อนาที supernatant นั้น decanted อย่างสมบรูณ์แบบและเม็ดที่เป็น resuspended ใน 700 บัฟเฟอร์กลูโคส - edta - ทริสเรทติ้ง - HCL มล. ภายหลัง50 มล. 10% โซเดียม dodecyl จุนสีและ 5 มล. 20 มก.มล. 1 k proteinase ถูกเพิ่มลงในที่แขวนและที่เซลล์มี lysed สำหรับ 20 นาทีที่ 60 C ในน้ำเครื่องเขย่าอ่างอาบน้ำ. หลังจากแสดงระยะฟักตัวที่ 500 มล.ของการผสมผสาน phenol-cheoroform - isoamyl แอลกอฮอล์ได้เพิ่มเข้ามาและเป็นการผสมผสานอย่างนุ่มนวลใน 5 นาที ส่วนผสมที่เป็น centrifuged สำหรับ 1 นาทีที่ 12000 รอบต่อนาทีประมาณ 200 มล.ของชั้นบนที่เกิดจากน้ำที่ถูกเก็บรวบรวมในท่อดูดฝุ่น eppendorf แล้ว 200 มล. 3 ม.(เช่นอะคีเทตและ 800 มล.ของ isopropanol จึงได้มีการเพิ่ม ที่ตกตะกอนดีเอ็นเอก็กู้คืนโดยผลิตเป็นเวลา 10 นาทีที่ 12000 รอบต่อนาที ไทยโอเลฟินส์ที่ขึ้นมาพร้อมด้วย 600 มล.ของเอทานอล 70% หลังจาก centrifuging สำหรับ 10 นาทีที่ 12000 รอบต่อนาทีเม็ดนั้นแห้งที่ อุณหภูมิ ห้อง 30 minnutesเม็ดแห้งก็ resuspended ใน 50 มล.ของน้ำฆ่าเชื้อและนำมาใช้ได้ทันทีสำหรับการวิเคราะห์ pcr