Crude cell lysates for protein expr

Crude cell lysates for protein expression analysis were prepared
from C. reinhardtii cells that were grown in 6 well plates, in TAP medium,
at 25 °C, 110 rpm shaking and approximately 50 μE. A volume of
cells equivalent to 0.5 mL of a culture with an optical density of
OD750 = 1, measured on a DU 730 UV/Vis Spectrophotometer
(Beckman Coulter),were harvested fromeach sample and resuspended
in0.1mL10mMTris–HCl (pH 8.0). 0.025mL 5× SDS protein gel loading
buffer (containing β-mercaptoethanol as a reducing agent) were added
to the samples and then boiled at 95 °C for 5min. The crude lysateswere
separated and analysed by SDS-PAGE on a 15% sodium dodecyl sulphate-
polyacrylamide gel and immunoblotted. An HA-antibody
(Sigma-Aldrich) was used to detect the target protein and an AtpB-antibody
(Agrisera, Sweden) as a loading control.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

Lysates เซลล์ดิบสำหรับวิเคราะห์การแสดงโปรตีนวจัดจาก C. reinhardtii เซลล์ ที่ถูกปลูกในแผ่นดี 6 ในแตะกลางที่ 25 ° C สั่น 110 rpm และประมาณ 50 μE ปริมาตรของเซลล์เท่ากับ 0.5 mL ของวัฒนธรรมด้วยมีความหนาแน่นออปติคอลOD750 = 1 วัดสเปคมี UV/Vis DU 730(Beckman Coulter), มีตัวอย่างเก็บเกี่ยว fromeach และ resuspendedin0.1mL10mMTris – HCl (pH 8.0) 0.025mL 5 × SDS โปรตีนเจโหลดบัฟเฟอร์ (ประกอบด้วยβ-mercaptoethanol เป็นตัวแทนลด) ถูกเพิ่มกับตัวอย่าง และจากนั้น ต้มที่ 95 ° C เป็นเวลา 5 นาที Lysateswere น้ำมันดิบแยก และวิเคราะห์ โดย SDS-หน้าบนเป็น 15% โซเดียม dodecyl ซัลเฟต--ตรวจสอบวิเคราะห์และ immunoblotted ฮา แอนติบอดี(Sigma Aldrich) ถูกใช้เพื่อตรวจหาโปรตีนเป้าหมายและ AtpB-แอนติบอดี(Agrisera สวีเดน) เป็นตัวควบคุมการโหลด

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

lysates เซลล์ดิบสำหรับการวิเคราะห์การแสดงออกของโปรตีนที่ถูกจัดทำขึ้น
จากซีเซลล์ reinhardtii ที่ถูกปลูกใน 6 แผ่นเดียวในกลางแตะ
ที่ 25 ° C, 110 รอบต่อนาทีสั่นและประมาณ 50 μE ปริมาณของ
เซลล์เทียบเท่ากับ 0.5 มิลลิลิตรของวัฒนธรรมที่มีความหนาแน่นของแสงของ
OD750 = 1 วัดใน DU 730 UV / Vis Spectrophotometer
ตัวอย่าง fromeach (Beckman Coulter) ถูกเก็บเกี่ยวและ resuspended
in0.1mL10mMTris-HCl (pH 8.0) 0.025mL 5 × SDS เจลโปรตีนโหลด
บัฟเฟอร์ (ที่มีβ-mercaptoethanol เป็นตัวแทนลด) ถูกเพิ่ม
ตัวอย่างและต้มที่ 95 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 5 นาทีแล้ว lysateswere ดิบ
แยกและวิเคราะห์โดยระบบ SDS-หน้าโซเดียมโดเดซิ sulphate- 15%
เจลอะคริเลตและ immunoblotted HA-แอนติบอดี
(Sigma-Aldrich) ถูกนำมาใช้ในการตรวจสอบโปรตีนเป้าหมายและ AtpB แอนติบอดี
(Agrisera, สวีเดน) เป็นตัวควบคุมการโหลด

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

น้ำมันดิบเซลล์ lysates สำหรับการวิเคราะห์การแสดงออกของโปรตีนที่ถูกเตรียมไว้จาก reinhardtii เซลล์ที่เติบโตดีใน 6 แผ่น ในแทปกลางที่อุณหภูมิ 25 ° C , 110 รอบต่อนาทีสั่นและประมาณ 50 μปริมาณเช่นเซลล์เท่ากับ 0.5 ml ของวัฒนธรรมที่มีความหนาแน่นของแสงod750 = 1 , วัดอยู่บนดู 730 UV / VIS เตอร์( เบคแมน คูลเตอร์ ) , เก็บ resuspended ของตัวอย่างและin0.1ml10mmtris – HCl ( pH 8.0 ) 0.025ml 5 × SDS โปรตีนเจลโหลดบัฟเฟอร์ ( ที่มีบีตา - mercaptoethanol เป็น reducing agent ) เพิ่มกับตัวอย่างแล้วต้มที่ 95 องศา C เป็นเวลา 5 นาที โดย lysateswere ดิบแยกและวิเคราะห์โดย SDS-PAGE ใน 15 % โซเดียมโดเดซิลซัลเฟต -เจลอะคริลาไมด์ และ immunoblotted . มีฮา แอนติบอดี( ซิกม่า Aldrich ) ถูกใช้เพื่อตรวจหาโปรตีนที่เป็นเป้าหมาย atpb แอนติบอดี( agrisera , สวีเดน ) เป็นการควบคุม