Both exosome isolation methods prov

Both exosome isolation methods proved to be suitable for miRNA
profiling as around 100 exosomal miRNAs were detected from a relatively
small amount of blood serum. The overall exosomal miRNA profiles
were similar regardless of the isolation method used, however,
the miRNA levels showed a slight variation between the two methods.
Hierarchical clustering of 17 miRNAs generated a distinguishable pattern
where the samples were grouped according to the used exosome
isolation method indicating that the observed exosomal miRNA profile
is somewhat dependent upon the extracellular vesicle isolation method.
We must consider that both methods used in the present study do not
ensure stringent criteria for exosome specific isolation, being based on
their physical features, rather than on their unique molecular composition.
The purity of material isolated with ultracentrifugation is inferior
compared to othermethods such as sucrose gradient or immunocapture
based isolation [10], however combinedwith differential centrifugation
and microfiltration steps ultracentrifugation yields pellets that are consistently
enriched with fairly intact exosome like vesicles, being only
slightly contaminated by other membrane vesicles or fragments, while
containing large amount of protein complexes [11]. Additional disadvantage
of this method regards poor recovery of exosomes from highly
viscous biofluids such as plasma and serum [12,13]. ExoQuick on the
other hand precipitates very efficiently most of the vesicles and protein–
protein, lipoprotein or protein–RNA complexes present in the
serumregardless of their origin. This can also explain differences in particular
miRNA species detected in this study in differently processed
samples where miR-486-5p and miR-92a showed lower relative expression
in ultracentrifugation isolated samples compared to ExoQuick
precipitated samples. Arroyo et al. showed that miR-92a and miR-486-
5p are mostly bound to ribonucleoprotein complexes rather than confined
inside vesicles [14]. However, in our study the experiments with
protease treatment unveiled a similar slight decrease in miR-92a levels
from pellets isolated with both methods suggesting that the detected
fluctuations were probably not because of different levels of proteinbound
miRNAs but rather due to the differences in the composition of
extracellular vesicles isolated with EQ and UC methods.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ทั้งสองวิธีแยก exosome พิสูจน์ให้เหมาะ miRNAสร้างโพรไฟล์เป็นสถาน exosomal miRNAs พบจากค่อนข้างซีรั่มเลือดเล็กน้อย โพรไฟล์ miRNA exosomal โดยรวมก็คล้ายกันหมดแยกใช้ อย่างไรก็ตามระดับ miRNA พบการเปลี่ยนแปลงเล็กน้อยระหว่างสองวิธีคลัสเตอร์ตามลำดับชั้นของ 17 miRNAs สร้างรูปแบบที่แตกต่างซึ่งตัวอย่างที่ถูกจัดกลุ่มตาม exosome ใช้เพื่อระบุว่า วิธีแยกโพ miRNA exosomal สังเกตจะค่อนข้างขึ้นวิธีแยกเวสิเคิล extracellularเราต้องพิจารณาว่า ทั้งสองวิธีที่ใช้ในการศึกษาปัจจุบันไม่ได้ตรวจสอบเงื่อนไขที่เข้มงวดสำหรับ exosome แยกเฉพาะ การยึดคุณลักษณะทางกายภาพของพวกเขา มากกว่าองค์ประกอบโมเลกุลของพวกเขาไม่ซ้ำกันความบริสุทธิ์ของวัสดุแยกต่างหากกับ ultracentrifugation มีน้อยเมื่อเทียบกับ othermethods เช่นซูโครสไล่ระดับสีหรือ immunocaptureใช้แยก [10], ไร centrifugation แตกต่าง combinedwithและ ultracentrifugation ตอน microfiltration ทำให้ขี้ที่เป็นอุดมไป ด้วย exosome ค่อนข้างครบถ้วนเช่นอสุจิ การเท่านั้นในขณะที่เล็กน้อยปนเปื้อนอสุจิเยื่อหรือชิ้นส่วนอื่น ๆประกอบด้วยจำนวนมากของโปรตีนคอมเพล็กซ์ [11] ข้อเสียเพิ่มเติมวิธีนี้การพิจารณากู้คืนดี exosomes จากสูงbiofluids ข้นพลาสมาและซีรั่ม [12,13] ExoQuick ในการอีก precipitates ได้อย่างมีประสิทธิภาพมากที่สุดของอสุจิและโปรตีน –คอมเพล็กซ์โปรตีน ไลโพโปรตีน หรือโปรตีนอาร์เอ็นเอนำเสนอในการserumregardless ต้นกำเนิดของพวกเขา นี้ยังสามารถอธิบายความแตกต่างโดยเฉพาะประมวลผล miRNA สายพันธุ์ที่พบในการศึกษานี้แตกต่างกันตัวอย่างที่ p และ 92a มีร์มีร์-486-5 แสดงนิพจน์สัมพันธ์ต่ำในตัวอย่าง ultracentrifugation ที่แยกต่างหากเมื่อเทียบกับ ExoQuickตกตะกอนตัวอย่าง อาร์โรโย่และ al. พบว่ามีร์-92a และมีร์-486 -5p เป็นส่วนใหญ่กับ ribonucleoprotein สิ่งอำนวยความสะดวก แทนจำกัดภายในอสุจิ [14] อย่างไรก็ตาม ในการศึกษาของเราทดลองด้วยรักษารติเอสเปิดตัวลดลงเล็กน้อยคล้ายระดับมีร์ 92aจากขี้แยกต่างหากพร้อมทั้งวิธีการแนะนำที่ที่ตรวจพบความผันผวนไม่คง เพราะระดับของ proteinboundmiRNAs แทนแต่เนื่องจากความแตกต่างในองค์ประกอบของextracellular อสุจิที่แยกต่างหากกับ EQ และ UC

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ทั้งสองวิธีการแยก exosome พิสูจน์ให้เห็นว่ามีความเหมาะสมกับ miRNA
โปรไฟล์เป็นประมาณ 100 exosomal miRNAs ถูกตรวจพบจากค่อนข้าง
จำนวนเล็ก ๆ ของเลือด โปรไฟล์ miRNA exosomal โดยรวม
มีความคล้ายคลึงกันโดยไม่คำนึงถึงวิธีการที่ใช้ในการแยก แต่
ระดับ miRNA แสดงให้เห็นการเปลี่ยนแปลงเล็กน้อยระหว่างสองวิธี.
การจัดกลุ่มตามลำดับชั้นจาก 17 miRNAs สร้างรูปแบบที่แตกต่าง
ที่กลุ่มตัวอย่างที่ถูกจัดกลุ่มตาม exosome ใช้
วิธีการแยกแสดงให้เห็น ที่ตั้งข้อสังเกต exosomal รายละเอียด miRNA
ค่อนข้างขึ้นอยู่กับวิธีการแยกสารตุ่ม.
เราจะต้องพิจารณาว่าทั้งสองวิธีที่ใช้ในการศึกษาครั้งนี้ไม่
แน่ใจว่าเกณฑ์ที่เข้มงวดสำหรับ exosome แยกเฉพาะการถูกขึ้นอยู่กับ
ลักษณะทางกายภาพของพวกเขามากกว่าในระดับโมเลกุลของพวกเขาที่ไม่ซ้ำกัน องค์ประกอบ.
ความบริสุทธิ์ของวัสดุที่แยกกับ ultracentrifugation จะด้อยกว่า
เมื่อเทียบกับ othermethods เช่นการไล่ระดับสีน้ำตาลซูโครสหรือ immunocapture
ตามแยก [10] แต่การปั่นแยกความแตกต่าง combinedwith
และอัตราผลตอบแทนขั้นตอน microfiltration เม็ด ultracentrifugation ที่มีอย่างต่อเนื่อง
อุดมไปด้วย exosome เหมือนเดิมอย่างเป็นธรรมเช่นถุงเป็นเพียง
เล็กน้อย การปนเปื้อนถุงเยื่อหุ้มเซลล์อื่น ๆ หรือเศษในขณะ
ที่มีจำนวนมากของโปรตีนคอมเพล็กซ์ [11] ข้อเสียเพิ่มเติม
ของวิธีนี้นับถือการกู้คืนที่ดีของ exosomes จากสูง
biofluids หนืดเช่นพลาสม่าและซีรั่ม [12,13] ExoQuick ใน
ตกตะกอนมืออื่น ๆ ได้อย่างมีประสิทธิภาพมากที่สุดของถุงและโปรตีน
โปรตีนไลโปโปรตีนหรือโปรตีนคอมเพล็กซ์-RNA อยู่ใน
serumregardless ต้นกำเนิดของพวกเขา นอกจากนี้ยังสามารถอธิบายความแตกต่างโดยเฉพาะอย่างยิ่ง
สายพันธุ์ miRNA ตรวจพบในการศึกษาในการประมวลผลที่แตกต่างกันนี้
กลุ่มตัวอย่างที่ miR-486-5p และ miR-92a แสดงให้เห็นว่าการแสดงออกที่ต่ำกว่าเมื่อเทียบ
ใน ultracentrifugation ตัวอย่างโดดเดี่ยวเมื่อเทียบกับ ExoQuick
ตกตะกอนตัวอย่าง อาร์โรโยและคณะ แสดงให้เห็นว่า miR-92a และ miR-486-
5p ถูกผูกไว้ส่วนใหญ่จะ ribonucleoprotein คอมเพล็กซ์มากกว่าถูกคุมขัง
อยู่ภายในถุง [14] อย่างไรก็ตามในการศึกษาของเราทดลองกับ
การรักษาโปรติเอสเปิดตัวลดลงเล็กน้อยที่คล้ายกันในระดับ miR-92a
จากเม็ดแยกด้วยวิธีการทั้งสองบอกว่าตรวจพบ
ความผันผวนอาจจะไม่ได้เพราะของระดับที่แตกต่างกันของ proteinbound
miRNAs แต่เนื่องจากความแตกต่างในองค์ประกอบ ของ
ถุง extracellular แยกกับ EQ และวิธี UC

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ทั้งโซโซมแยกวิธีการพิสูจน์แล้วว่าเป็น เหมาะสำหรับ mirna
โปรไฟล์เป็นประมาณ 100 exosomal mirnas ถูกตรวจพบจากค่อนข้าง
ขนาดเล็กปริมาณของเลือด ซีรั่ม รวม exosomal โปรไฟล์ mirna
เหมือนกันโดยไม่คำนึงถึงการใช้วิธีการอย่างไรก็ตาม
ระดับ mirna พบการเปลี่ยนแปลงเล็กน้อยระหว่างสองวิธี
การจัดกลุ่มลำดับชั้นของ 17 mirnas สร้าง
แบบแผนแยกแยะที่กลุ่มตัวอย่างเห็นด้วยกับการใช้โซโซม
วิธีที่ระบุว่าพบ exosomal mirna โปรไฟล์
ค่อนข้างขึ้นอยู่กับว่าสามารถแยกวิธีการ
เราต้องพิจารณาว่าทั้งสองวิธีที่ใช้ในการศึกษาไม่ได้
ให้เกณฑ์ที่เข้มงวดสำหรับโซโซมเฉพาะแยกการยึด
คุณสมบัติทางกายภาพของพวกเขามากกว่าในองค์ประกอบของโมเลกุลเป็นเอกลักษณ์
ความบริสุทธิ์ของวัสดุแยกกับ ultracentrifugation จะด้อยกว่า
เมื่อเทียบกับวิธีอื่นๆ เช่น ซูโครสลาดหรือ immunocapture
ตามแยก [ 10 ] อย่างไรก็ตาม ร่วมกับการปั่นและค่า
ultracentrifugation เม็ดที่ยังคงอ้อยอิ่งขั้นตอนอย่างต่อเนื่อง
อุดมไปด้วยค่อนข้างครบถ้วนโซโซมเหมือนเล็ก เป็นเพียงเล็กน้อยเล็ก ๆที่ปนเปื้อนด้วย

ที่มีเยื่อหรือเศษ ในขณะที่ปริมาณของโปรตีนเชิงซ้อน [ 11 ] ข้อเสียของวิธีนี้ช่วยเพิ่มเติม

exosomes ยากจนของการกู้คืนจาก biofluids หนืดสูงเช่นพลาสมาและซีรั่ม [ 12 , 13 ‘ ] exoquick บน
มืออื่น ๆที่ตะกอนมีประสิทธิภาพมากที่สุดของเล็กและโปรตีน ) โปรตีนไขมันหรือโปรตีน (
,
serumregardless RNA เชิงซ้อนที่อยู่ในประเทศของตน นี้ยังสามารถอธิบายถึงความแตกต่างใน mirna ชนิดที่ตรวจพบในการศึกษานี้โดยเฉพาะ

ตัวอย่างที่แตกต่างกันในการประมวลผลและแสดง mir-486-5p mir-92a ลดการแสดงออก
สัมพัทธ์ใน ultracentrifugation แยกตัวอย่างเปรียบเทียบกับ exoquick
ตกตะกอนตัวอย่าง อาร์โรโย et al . และพบว่า mir-92a mir-486 -
5P ส่วนใหญ่จะผูกพันกับไรโบนิวคลีโอโปรตีนเชิงซ้อนมากกว่าคับ
ข้างในเล็ก [ 14 ] อย่างไรก็ตาม ในการศึกษาทดลองด้วยการเปิดตัวเอสเหมือนกัน

mir-92a ลดลงในระดับจากเม็ดแยกด้วยวิธีทั้งสองบอกว่าคงไม่ได้ เพราะตรวจพบ
ความผันผวนของระดับที่แตกต่างกันของ proteinbound
mirnas แต่เนื่องจากความแตกต่างในองค์ประกอบของเล็กแยกกับอีคิว
ภายนอกและวิธีการฯลฯ .