2.2. Enzyme activity assayThe GPX a

2.2. Enzyme activity assay
The GPX activity was measured by using the method of Livingstone et al.
(1992) and expressed as mmol/mg p./min.The activity was calculated estimating
the decrease of NADPH at 340 nm for 1 min. The reaction buffer contained
100 mM phosphate buffer (pH7.4), 2 mM GSH, 0.12m MNADPH, 2 U Glutathione
reductase, supernatant and3 mM Cumene hydroperoxide in a final volume of
1 mL. The GR activity was also calculated by decrease of NADPH at 340 nm for
1 min and expressed as mol/mg p./min(Carlberg and Mannervik, 1975). The
reaction medium contained 100mM phosphate buffer (7.4), 0.1 mM NADPH,
supernatant and 1mM GSSG in a final volume of 1 mL. SOD activity was measured
by the indirect method involving the inhibition of cytochrome c reduction at
550 nm for 1 min (McCord and Fridovich, 1969). The reaction buffer in a final
volume of 1 mL contained 50 mM Potassium phosphate buffer (pH7.8), 0.1 mM
EDTA, 10mM cytochrome c, 0.05mM hypoxanthine, supernatant and 1.87 mU/ml
Xanthine oxidase. The SOD activity was expressed as Unit/mgp. The GST activity
was measured by absorbance increase at 340 nm resulting from the conjugation of
reduced glutathione (GSH) and CDNB (1-chloro-2,4-dinitrobenzene) (Habig etal.,
1974) and expressed as mmol/mg prot/min. The reaction buffer contained 100 mM
potassium phosphate buffer (pH7.4), 1 mM GSH, 1 mM CDNB and supernatant in
a final volume of 1 mL. GSH levels were measured following the method of Beutler
et al.,(1963). The reaction buffer contained 0.3 M Na2HPO4 solution, supernatant
and 0.5 m MDTNB (5,50-dithiobis-2-nitrobenzoic acid ) in a final volume 5 mL. GSH
was measured as the difference in the absorbance values of samples in the
presence and the absence of DTNB at 412 nm. GSH value was calculated as nmol
GSH/mg protein. The protein contents of the homogenates were determined by
the method of Lowry et al.(1951) using bovine serum albumin as a standard.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.2 การประเมินการวิเคราะห์กิจกรรมของเอนไซม์
กิจกรรม GPX ถูกวัดโดยใช้วิธีการของลิฟวิงสเอตอัล.
(1992) และแสดงเป็นมิลลิโมล / มก. พี. / กิจกรรม min.the ที่คำนวณได้
ลดลงของ NADPH ที่ 340 นาโนเมตรเป็นเวลา 1 นาที บัฟเฟอร์ปฏิกิริยาที่มีบัฟเฟอร์ มม. ฟอสเฟต
100 (ph7.4) 2 มิลลิเมตร gsh, 0.12m mnadph 2 u
กลูตาไธโอน reductase, ใส and3 มม. ไฮโดร cumene ในเล่มสุดท้ายของ
1 มิลลิลิตร กิจกรรมกรัมก็ยังคำนวณโดยการลดลงของ NADPH ที่ 340 นาโนเมตรเพื่อ
1 นาทีและแสดงความเป็นโมล / มก. พี. / นาที (Carlberg และ mannervik, 1975)
กลางปฏิกิริยาที่มีฟอสเฟตบัฟเฟอร์ 100 มม. (7.4), 0.1 มม. NADPH
ใสและ GSSG 1mm ในเล่มสุดท้ายของ 1 มิลลิลิตร กิจกรรมสดวัด
โดยวิธีทางอ้อมที่เกี่ยวข้องกับการยับยั้งการลดลงของค cytochrome ที่
550 นาโนเมตรเป็นเวลา 1 นาที (McCord และ fridovich, 1969) บัฟเฟอร์ปฏิกิริยาใน
เล่มสุดท้ายของ 1 มล. ที่มี 50 มม. บัฟเฟอร์โพแทสเซียมฟอสเฟต (ph7.8), 0.1 มม.
EDTA, 10mm cytochrome C, 0.05mm hypoxanthine ใสและ 1.87 mu / ml
xanthine oxidase กิจกรรมสดได้แสดงออกเป็นหน่วย / MGP กิจกรรมภาษีมูลค่าเพิ่ม
โดยวัดจากการเพิ่มขึ้นของการดูดกลืนแสงที่ 340 นาโนเมตรที่เกิดจากการเชื่อมต่อกันของ
ลดลงกลูตาไธโอน (GSH) และ cdnb (1-คลอโร-2 ,4-dinitrobenzene) (Habig อีตัล.
1974) และแสดงเป็นมิลลิโมล / มก. ลูกศิษย์ / นาที บัฟเฟอร์ปฏิกิริยาที่มี 100 มิลลิเมตรบัฟเฟอร์
โพแทสเซียมฟอสเฟต (ph7.4) 1 มิลลิเมตร gsh, 1 มิลลิเมตร cdnb และใสใน
เล่มสุดท้ายของ 1 มิลลิลิตร ระดับ gsh ถูกวัดต่อไปนี้วิธีการของ Beutler
et al,., (1963) บัฟเฟอร์ปฏิกิริยาที่มี 0.3 เมตรทางออก Na2HPO4, ใส
และ 0.5 เมตร mdtnb (กรด 5,50-dithiobis-2-nitrobenzoic) ในเล่มสุดท้าย 5 ml gsh
วัดเป็นความแตกต่างในค่าการดูดกลืนแสงของกลุ่มตัวอย่างใน
การแสดงตนและการขาดของ dtnb ที่ 412 นาโนเมตร gsh ค่าที่คำนวณได้เป็นโปรตีน nmol
gsh / มิลลิกรัม ปริมาณโปรตีนของ homogenates ได้รับการพิจารณาโดย
วิธีการของคอรีเอตอัล. (1951) โดยใช้ซีรั่มอัลบูมิวัวเป็นมาตรฐาน

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.2. เอนไซม์กิจกรรมทดสอบ
กิจกรรม GPX ถูกวัด โดยใช้วิธีของลิฟวิงสโตน et al.
(1992) และแสดงเป็นพี mmol/mg/minมีคำนวณกิจกรรมประเมิน
ลดของ NADPH ที่ 340 nm ใน 1 นาที บัฟเฟอร์ปฏิกิริยาอยู่
100 มม.ฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (pH7.4), GSH, 0.12m MNADPH, 2 มม. 2 U ไธ
reductase, supernatant and3 มม. Cumene hydroperoxide ในปริมาตรสุดท้ายของ
1 mL ยังมีคำนวณกิจกรรม GR โดยลด NADPH ที่ 340 nm สำหรับ
1 นาที และแสดงเป็นโมล/มิลลิกรัม พี/min(Carlberg and Mannervik, 1975) ใน
ปฏิกิริยาปานกลางอยู่ 100 มม.ฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (7.4), NADPH 0.1 มม.,
supernatant และ 1 มม. GSSG ในปริมาตรสุดท้ายของ 1 mL เป็นวัดกิจกรรมสด
โดยวิธีทางอ้อมที่เกี่ยวข้องกับการยับยั้ง cytochrome c ลดที่
550 nm ใน 1 นาที (McCord และ Fridovich, 1969) บัฟเฟอร์ปฏิกิริยาในสุด
ปริมาตร 1 mL ประกอบด้วยโพแทสเซียมฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (pH7.8), 0.1 mM 50 mM
EDTA, 10 มม. cytochrome c, hypoxanthine 0.05mM, supernatant และหมู่ 1.87 ml
Xanthine oxidase กิจกรรมสดถูกแสดงเป็น หน่วย/mgp กิจกรรม GST
ถูกวัด โดยเพิ่ม absorbance ที่ 340 nm เกิดจาก conjugation ของ
ลดกลูตาไธโอน (GSH) และ CDNB (1-chloro-2, 4-dinitrobenzene) (Habig etal.,
1974) และแสดงเป็น prot mmol/mg/min บัฟเฟอร์ปฏิกิริยาอยู่ 100 มม.
โพแทสเซียมฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (pH7.4), 1 mM GSH, 1 มม. CDNB และ supernatant ใน
ปริมาตรสุดท้ายของ 1 mL ระดับ GSH ถูกวัดตามวิธีของ Beutler
et al.,(1963) บัฟเฟอร์ปฏิกิริยาอยู่ 0.3 M Na2HPO4 โซลูชัน supernatant
และ 0.5 m MDTNB (5,50-dithiobis-2-nitrobenzoic กรด) ในปริมาตรสุดท้าย 5 mL GSH
ถูกวัดเป็นความแตกต่างในค่า absorbance ของตัวอย่างในการ
สถานะการออนไลน์และการขาดงานของ DTNB ที่ 412 nm คำนวณค่า GSH เป็น nmol
GSH/มิลลิกรัม โปรตีน เนื้อหาโปรตีนของ homogenates ถูกกำหนดโดย
วิธี Lowry et al.(1951) ที่ใช้วัว serum albumin เป็นมาตรฐาน

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.2 . การทำงานของเอนไซม์สอบ
ซึ่งจะช่วยให้การทำงานของ GPX วัดได้โดยใช้วิธีการของลีฝ - อิงซทัน et al .
( 1992 )และแสดงออกมาเป็นมิลลิโมล/มก. p ./นาทีที่จะคำนวณการประเมิน
ซึ่งจะช่วยให้ลดลงของ nadph ที่ 340 NM สำหรับ 1 นาทีที่กำลังบัฟเฟอร์ที่อยู่
ซึ่งจะช่วย 100 มม.ฟอสเฟต Buffer ( PH 7.4 ), 2 ม.ม.คุณลักษณะเฉพาะของ Su , 0.12 ม. mnadph , 2 U glutathione
reductase , supernatant และ 3 มม. cumene hydroperoxide ในระดับเสียงที่สุดท้ายของ
1 มล. กรัมกิจกรรมที่จะคำนวณโดยการลด nadph ที่ 340 NM สำหรับนาที
1 และแสดงออกมาใน website : www . mol / P มก./นาที( carlberg และ mannervik . 1975 )นอกจากนั้นยัง มีขนาดกลาง
ปฏิกริยาที่มีอยู่ 100 ม.ม.ฟอสเฟต Buffer ( 7.4 ) 0.1 มม. nadph
supernatant gssg และ 1 มม.ในระดับเสียงสุดท้ายของ 1 มล. การทำงานของหญ้าวัดได้โดยใช้วิธีการ
ซึ่งจะช่วยทางอ้อมที่เกี่ยวข้องกับข้อห้ามของการลด cytochrome C ที่
550 nm สำหรับ 1 นาที( mccord และ fridovich 1969 ) การตอบสนองที่บัฟเฟอร์ในที่สุดท้าย
ซึ่งจะช่วยลดระดับเสียงของ 1 มล.มีอยู่ 50 มม.,โปแตสเซียมฟอสเฟต Buffer ( PH 7.8 ), 0.1 มม.
edta 10 มม. cytochrome C , 0.05 มม. hypoxanthine , supernatant และ 1.87 หมู่/ ML
xanthine oxidase . กิจกรรมสอดอยู่ได้แสดงออกมาเป็นชุด/ mgp. GST
ซึ่งจะช่วยการทำงานของวัดได้โดยเพิ่มขึ้น absorbance 340 NM ที่เป็นผลมาจากผัน(คำกริยา)ของ
ลด glutathione (คุณลักษณะเฉพาะของ Su )และ cdnb ( 1 - chloro -2,4 - dinitrobenzene )( etal habig .
ค.ศ. 1974 )และแสดงออกมาเป็นมิลลิโมล/มก. prot /นาที บัฟเฟอร์สำหรับการตอบสนองที่มีอยู่ 100 มม.
โปแตสเซียมฟอสเฟต Buffer ( PH 7.4 )คุณลักษณะเฉพาะของ Su supernatant 1 มม.และ 1 มม.ที่อยู่ใน cdnb สุดท้าย
ซึ่งจะช่วยลดระดับเสียงของ 1 มล. คุณลักษณะเฉพาะของ Su ระดับเป็นวิธีการวัดต่อไปนี้ของ beutler
et al .( 1963 ) บัฟเฟอร์สำหรับการตอบสนอง supernatant โซลูชันที่มีอยู่ 0.3 ม.นา 2 hpo 4
และ 0.5 ม. mdtnb (กรด 5,50 - dithiobis 2 - nitrobenzoic )ในระดับเสียงครั้งสุดท้ายที่ 5 มล. คุณลักษณะเฉพาะของ Su
มีหน่วยวัดเป็นความแตกต่างในค่า absorbance ตัวอย่าง
ซึ่งจะช่วยในการมีอยู่และการขาด dtnb ที่ 412 นิวตันเมตร คุณลักษณะเฉพาะของ Su จะคำนวณมูลค่าเป็นโปรตีนมก.
คุณลักษณะเฉพาะของ Su / nmol เนื้อหาโปรตีนของ homogenates ที่ถูกกำหนดโดยใช้วิธีการ
ซึ่งจะช่วยให้การ Lowry ' s et al .( 1951 )โดยใช้ไข่ขาวซีรัมวัวอีกเป็นมาตรฐาน