2.4. Measurements of phytase activi

2.4. Measurements of phytase activity

2.4.1. Enzyme extraction
Yeast strains were grown in flasks containing 100 ml of Delft Phy
medium. The medium was inoculated with yeast inocula as previously
described (OD600 = 0.1), and cultivated at 30 °C for 48 h. Each strain
was inoculated in triplicates. Samples of extracellular and intracellular
enzyme extracts were collected after 2, 8, 24 and 48 h after inoculation.
Enzyme extracts were prepared as described by Nuobariene et al. (2011).
To confirm that the enzyme is repressed by inorganic phosphate, the
same protocol was followed for yeast strains grown on Delft+medium.
2.4.2. Phytase activity
Phytase activity was measured as previously described (Nuobariene
et al., 2011). Briefly, 0.2 ml of enzyme extract was added to 0.8 ml of
phytic acid dipotassium solution (3 mmol/l phytic acid dipotassium
salt in 0.2 mol/l sodium acetate/HCl buffer, pH 5.5) pre-incubated at
30 °C per 5min. The solutionwas mixed and incubated at 30 °C. Samples
were measured at different time intervals, every time the reaction was
stopped by adding trichloroacetic acid (TCA) to the sample. Blank was
measured with sodium acetate buffer and TCA, together with enzyme
extract. To measure the liberated inorganic phosphate, 0.4 ml of the
samplewas added to 3.2ml of freshly prepared acid molybdate reagent
(1 volume of 10 mmol/l ammonium molybdate, 1 volume of 2.5 mol/l
sulfuric acid and 2 volume of acetone). Absorbance of the yellow at
355 nm was measured in a spectrophotometer, using sodium acetate
buffer with TCA as blank. A standard curve was prepared with KH2PO4
in 0.2 mol/l sodium acetate buffer/HCl buffer (pH 5.5).

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.4 วัดของกิจกรรม phytase 2.4.1 สกัดเอนไซม์สายพันธุ์ยีสต์ที่ถูกปลูกในขวดที่มี 100 มิลลิลิตร Delft Phy กลาง สื่อที่ได้รับเชื้อด้วย inocula ยีสต์เป็นก่อนหน้านี้อธิบาย(OD600 = 0.1) และการเพาะปลูกที่อุณหภูมิ 30 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 48 ชั่วโมง แต่ละสายพันธุ์ได้รับเชื้อใน triplicates ตัวอย่างของสารภายในเซลล์และสารสกัดจากเอนไซม์ที่ถูกเก็บรวบรวมหลังจาก 2, 8, 24 และ 48 ชั่วโมงหลังการฉีดวัคซีน. สารสกัดจากเอนไซม์ได้จัดทำตามที่อธิบาย Nuobariene et al, (2011). เพื่อยืนยันว่าการทำงานของเอนไซม์ที่มีการปราบปรามโดยฟอสเฟตนินทรีย์ที่โปรโตคอลเดียวกันตามสายพันธุ์ยีสต์ที่ปลูกในกลาง Delft +. 2.4.2 กิจกรรม phytase กิจกรรม phytase วัดตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ (Nuobariene et al., 2011) สั้น ๆ , 0.2 มล. ของสารสกัดจากเอนไซม์ที่ถูกเพิ่มเข้ามา 0.8 มล. ของกรดไฟติกแก้ปัญหาdipotassium (3 มิลลิโมล / ลิตรกรดไฟติก dipotassium เกลือ 0.2 โมล / ลิตรโซเดียมอะซิเตท / HCl บัฟเฟอร์ค่า pH 5.5) ก่อนการบ่มที่อุณหภูมิ30 องศาเซลเซียสต่อ 5 นาที solutionwas ผสมและบ่มที่อุณหภูมิ 30 องศาเซลเซียส ตัวอย่างถูกวัดในช่วงเวลาที่แตกต่างทุกครั้งที่เกิดปฏิกิริยาถูกหยุดโดยการเพิ่มกรดไตรคลอโร(TCA) เพื่อตัวอย่าง ที่ว่างเปล่าถูกวัดด้วยอะซิเตตบัฟเฟอร์โซเดียมและ TCA ร่วมกับเอนไซม์จากสารสกัด การวัดฟอสเฟตอนินทรีไท 0.4 มล. ของsamplewas เพิ่มไปยัง 3.2ml ของสารกรดโมลิบปรุงสดใหม่(1 ปริมาณ 10 มิลลิโมล / ลิตรแอมโมเนียมโมลิบ 1 ปริมาณ 2.5 โมล / ลิตรกรดกำมะถันและ2 ปริมาณของอะซีโตน) การดูดกลืนแสงของสีเหลืองที่355 นาโนเมตรวัดใน spectrophotometer โดยใช้โซเดียมอะซิเตตบัฟเฟอร์กับTCA เป็นที่ว่างเปล่า เส้นโค้งมาตรฐานถูกจัดทำขึ้นด้วย KH2PO4 0.2 โมล / ลิตรโซเดียมอะซิเตตบัฟเฟอร์ / HCl บัฟเฟอร์ (pH 5.5)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.4 . การวัดการใช้เครื่องมือกำจัดเพื่อย้ายกิจกรรม

. เอนไซม์การสกัด
ยีสต์สายพันธุ์ปลูกในขวดบรรจุ 100 ml ของ phy
เดลฟท์ ปานกลาง กลางเป็นเชื้อยีสต์กับ inocula ก่อนหน้านี้
อธิบาย ( od600 = 0.1 ) และบ่มที่อุณหภูมิ 30 องศา C เป็นเวลา 48 ชั่วโมง แต่ละสายพันธุ์
เป็นเชื้อ 3 ซ้ำ . ตัวอย่างของเอนไซม์ภายในเซลล์และสารสกัดจากจำนวน
2 , 8 ,24 และ 48 ชั่วโมงหลังจากได้รับสารสกัดเอนไซม์ .
เตรียมตามที่อธิบายไว้โดย nuobariene et al . ( 2011 )
ยืนยันว่า เอนไซม์ คือ อดกลั้นโดยอนินทรีย์ฟอสเฟต ,
โปรโตคอลเดียวกันตามสายพันธุ์ยีสต์ที่ปลูกใน เดลฟท์ ปานกลาง
2.4.2 . กิจกรรมที่ 1 กิจกรรมที่ 1
วัดตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ ( nuobariene
et al . , 2011 ) สั้น , 0.2 มิลลิลิตรเอนไซม์สกัดเพิ่ม 08 ml
กรดไฟติกไดโซลูชั่น ( 3 มิลลิโมล / ลิตรกรดไฟติกได
เกลือโซเดียมอะซิเตต 0.2 mol / l / HCl บัฟเฟอร์ pH 5.5 ) บ่มที่อุณหภูมิ 30 องศา C ก่อน
/ 5min . solutionwas ผสมและบ่มที่อุณหภูมิ 30 องศา ตัวอย่าง
ถูกวัดในช่วงเวลาที่ต่างกัน เวลาปฏิกิริยา คือ
แวะเติมกรดไตรคลอโรอะซิติก ( TCA ) ตัวอย่าง ว่างคือ
วัดที่มีโซเดียมอะซีเตทบัฟเฟอร์กับ TCA ร่วมกับเอนไซม์
สารสกัด การวัดการปลดปล่อยอนินทรีย์ฟอสเฟต 0.4 มล.
samplewas เพิ่ม 3.2ml ของเตรียมสดกรดโมลิบเดต 3
( 1 เล่ม 10 mmol / l แอมโมเนียมโมลิบเดต , 1 ปริมาณ 2.5 mol / l
กรดกำมะถันและ 2 ปริมาณอะซิโตน ) การดูดกลืนแสงของสีเหลืองที่
355 nm วัดใน Spectrophotometer ,ใช้โซเดียมอะซิเตทบัฟเฟอร์
กับ TCA เป็นว่างเปล่า เส้นโค้งมาตรฐาน เตรียม kh2po4
ใน 0.2 โมลต่อลิตรโซเดียมอะซิเตตบัฟเฟอร์ / HCl บัฟเฟอร์ pH 5.5 )