3.4. Valuation of isotope-based qua

3.4. Valuation of isotope-based quantification
Stable isotope-coded strategy for relative quantification by HPLC–MS/MS has been verified according to reported works with a little modification (Dai et al., 2012).
On one hand, three fixed concentration of BAs standards (0.025 mM, 0.05 mM and 0.1 mM) were derivatized by d0-MASC, respectively.
Meanwhile, three aquilots of BAs standards (0.05 mM) were derivatized by d3-MASC.
The equal volume of d0-MASC labeled BAs (light form) and d3-MASC labeled BAs (heavy form) were mixed to obtain the mixtures containing d0-/d3-MASC labeled BAs at the ratio of 1:2, 1:1, 2:1, respectively.
The mixtures were analyzed by the HPLC–MS/MS individually to study the signal intensity ratios of light/heavy form
derivatives; on the other hand, d0-MASC and d3-MASC were applied to label the BAs standards (0.05 mM), respectively.
After the derivatization, the d0-/d3-MASC labeled solutions were mingled at a series of volume ratios (10:1, 5:1, 2:1, 1:1, 1:2, 1:5, and 1:10) and the mixtures were analyzed by HPLC–MS/MS.
With TYR as representative, the valuation of stable isotope-coded strategy for relative quantification is described in
Fig. 2.
Fig. 2A shows that the main MS/MS fragment ion of d0-MASC and d3-MASC labeled TYR derivatives are at m/z 208 and m/z 211.2, respectively.
As can be seen in Fig. 2B, the MRM signals of the d0-MASC and d3-MASC labeled TYR are found in one HPLC–MS/MS run, and there is no other difference except minor difference of elution time between heavy and light form. Fig. 2C
reveals that the EIC signal intensity ratio of light/heavy ion pairs is approximately 0.49 (ranging from 0.48 to 0.50, average = 0.49), 1.02 (ranging from 1.01 to 1.05, average = 1.02) and 2.00 (ranging from 1.97 to 2.03, average 2.00) for BA derivatives when the H/D = 0.5, H/D = 1 and H/D = 2. The calibration curve plotted by the signal ratios of the light/heavy ion pairs versus the ratios of volume (H/D = 10, 5, 2, 1, 0.5, 0.2, 0.1) exhibits excellent linearity with
slope approximated to 1.0 (See Fig 2D).
The valuation data for other BAs are shown in Supplementary Material Figs. S3 and S4.
These results indicated that the isotope-coded derivatization is adequate for accurate quantification.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

3.4 การประเมินค่าด้านใช้ไอโซโทปกลยุทธ์รหัสไอโซโทปที่เสถียรสำหรับนับญาติโดย HPLC – MS/MS ได้รับการยืนยันตามรายงานการทำงานกับการปรับเปลี่ยนเล็กน้อย (Dai et al. 2012) มือหนึ่ง ความเข้มข้นคงที่สามมาตรฐาน BAs (มม. 0.025, 0.05 มม. และ 0.1 mM) ถูก derivatized โดย d0-MASC ตามลำดับ ในขณะเดียวกัน aquilots สามมาตรฐาน BAs (0.05 มม.) ที่ derivatized โดย d3-MASC. D0 MASC ระดับเท่าชื่อ BAs (แบบฟอร์มแสง) และรวมเพื่อขอรับส่วนผสมที่ประกอบด้วย d0 - d3 MASC ชื่อ BAs (แบบฟอร์มหนัก) / d3 MASC ชื่อ BAs ที่อัตราส่วน 1:2, 1:1, 2:1 ตามลำดับ ส่วนผสมถูกวิเคราะห์ โดยการ HPLC – MS/MS เพื่อศึกษาอัตราสัญญาณความเข้มแสง/หนักฟอร์มตราสารอนุพันธ์ บนมืออื่น ๆ d0 MASC และ d3 MASC ถูกประยุกต์ใช้การมาตรฐาน BAs (0.05 มม.), ตามลำดับ หลังจาก derivatization, d0- / d3 MASC ชื่อโซลูชันได้เข้าที่ชุดของระดับอัตราส่วน (10:1, 5:1, 2:1, 1:1, 1:2, 1:5 และ 1:10) และส่วนผสมถูกวิเคราะห์ โดย HPLC – MS/MSมี TYR เป็นตัวแทน การประเมินค่าของกลยุทธ์รหัสไอโซโทปที่เสถียรสำหรับนับญาติไว้ในรูป 2 รูปที่ 2A แสดงว่า MS/MS หลักแยกส่วนไอออนของ d0 MASC และ d3 MASC ชื่อ TYR อนุพันธ์คือ m/z 208 และ m/z 211.2 ตามลำดับ สามารถเห็นได้ในรูป 2B, MRM สัญญาณของ d0-MASC และ d3 MASC ชื่อ TYR พบในเรียกใช้ HPLC – MS/MS และไม่ต่างยกเว้นเล็กน้อยแตกต่างกันของเวลาชะหนัก และเบา รูป 2Cพบว่ามีอัตราส่วนความเข้มสัญญาณบริษัทอีไอซีคู่ไอออนแสง/หนักประมาณ 0.49 (ตั้งแต่ 0.48 ถึง 0.50 เฉลี่ย = 0.49), 1.02 (ตั้งแต่ 1.01 ถึง 1.05 เฉลี่ย = 1.02) และ 2.00 (ถึง 1.97 2.03 เฉลี่ย 2.00) สำหรับตราสารอนุพันธ์ BA เมื่อ H/D = 0.5, H/D = 1 และ H/D = 2 พล็อตกราฟเทียบ โดยอัตราส่วนของสัญญาณคู่ไอออนแสง/หนักเมื่อเทียบกับอัตราส่วนของปริมาตร (H/D = 10, 5, 2, 1, 0.5, 0.2, 0.1) แสดงเส้นตรงดีด้วยความลาดชันประมาณ 1.0 (ดูรูปที่ 2D) ข้อมูลการประเมินสำหรับ BAs อื่น ๆ แสดงในมะเดื่อวัสดุเสริม S3 และ S4 ผลลัพธ์เหล่านี้ระบุไว้ว่า derivatization รหัสไอโซโทปเพียงพอสำหรับการนับที่ถูกต้อง

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

3.4 การประเมินมูลค่าของไอโซโทปตามปริมาณกลยุทธ์ไอโซโทปรหัสมีเสถียรภาพสำหรับปริมาณญาติโดย HPLC-MS / MS ได้รับการตรวจสอบตามการกระทำของรายงานที่มีการปรับเปลี่ยนเล็ก ๆ น้อย ๆ (Dai et al., 2012). หนึ่งในมือสามความเข้มข้นคงที่ของมาตรฐาน BAs (0.025 มิลลิ, 0.05 มิลลิและ 0.1 มิลลิ) ถูก derivatized โดย d0-masc ตามลำดับ. ในขณะที่สาม aquilots มาตรฐาน BAs (0.05 มม) ได้รับการ derivatized โดย d3-masc. ปริมาณที่เท่ากันของ d0-masc ติดป้าย BAs (แบบอ่อน) และ d3-masc ติดป้าย BAs (แบบหนัก) ได้รับการผสมจะได้รับการผสมที่มี d0- / d3-masc ติดป้าย BAs ในอัตราส่วน 1: 2, 1: 1, 2: 1. ตามลำดับผสมมาวิเคราะห์โดยHPLC ได้ -MS / MS เป็นรายบุคคลเพื่อศึกษาอัตราส่วนความเข้มของสัญญาณของแสง / รูปแบบหนักสัญญาซื้อขายล่วงหน้า . ในมืออื่น ๆ , d0-masc และ d3-masc ถูกนำไปใช้กับป้ายกำกับมาตรฐาน BAs (0.05 มม) ตามลำดับหลังจากอนุพันธ์ที่d0- / d3-masc ติดป้ายว่าการแก้ปัญหาที่ถูกผสมในชุดของปริมาณอัตราส่วน (10: 1, 5: 1, 2: 1, 1: 1, 1: 2, 1: 5 และ 1:10) และผสมมาวิเคราะห์โดยวิธี HPLC-MS / MS. ด้วยเทอร์เป็นตัวแทน, การประเมินมูลค่าของ isotope- มั่นคง กลยุทธ์รหัสสำหรับปริมาณญาติอธิบายไว้ในรูป 2. รูป 2A แสดงให้เห็นว่าหลัก MS / MS ไอออนส่วนของ d0-masc และ d3-masc ติดป้ายอนุพันธ์เทอร์อยู่ที่ม. / z 208 และ m / z 211.2 ตามลำดับ. ที่สามารถเห็นได้ในรูป 2B, สัญญาณ MRM ของ d0-masc และ d3-masc เทอร์ที่มีข้อความที่พบในหนึ่ง HPLC-MS / MS ทำงานและไม่มีความแตกต่างอื่น ๆ ยกเว้นความแตกต่างเล็ก ๆ น้อย ๆ ของเวลาชะระหว่างรูปแบบหนักและเบา มะเดื่อ. 2C เผยให้เห็นว่าอัตราส่วนความเข้มของสัญญาณ EIC ของแสง / คู่ไอออนหนักจะอยู่ที่ประมาณ 0.49 (ตั้งแต่ 0.48-0.50 ค่าเฉลี่ย = 0.49) 1.02 (ตั้งแต่ 1.01-1.05 ค่าเฉลี่ย = 1.02) และ 2.00 (ตั้งแต่ 1.97-2.03, ค่าเฉลี่ย 2.00) สำหรับสัญญาซื้อขายล่วงหน้าปริญญาตรีเมื่อ H / D = 0.5, H / D = 1 และ H / D = 2 กราฟมาตรฐานวางแผนโดยอัตราส่วนสัญญาณของแสง / คู่ไอออนหนักเมื่อเทียบกับอัตราส่วนของปริมาณ (H / D = 10, 5, 2, 1, 0.5, 0.2, 0.1) การจัดแสดงนิทรรศการเชิงเส้นที่ดีกับความลาดชันประมาณ1.0 (ดูรูป 2D). ข้อมูลการประเมินมูลค่าสำหรับ BAs อื่น ๆ ที่แสดงอยู่ในวัสดุเสริมมะเดื่อ S3 และ S4. ผลลัพธ์เหล่านี้ชี้ให้เห็นว่าอนุพันธ์ไอโซโทปรหัสเป็นปริมาณที่เพียงพอสำหรับการที่ถูกต้อง