PrimersThe DNA fragment to be ampli

Primers

The DNA fragment to be amplified is determined by selecting primers. Primers are short, artificial DNA strands โ€” often not more than 50 and usually only 18 to 25 base pairs long โ€” that are complementary to the beginning or the end of the DNA fragment to be amplified. They anneal by adhering to the DNA template at these starting and ending points, where the DNA polymerase binds and begins the synthesis of the new DNA strand.

The choice of the length of the primers and their melting temperature (Tm) depends on a number of considerations. The melting temperature of a primer -- not to be confused with the melting temperature of the template DNA -- is defined as the temperature at which half of the primer binding sites are occupied. Primers that are too short would anneal at several positions on a long DNA template, which would result in non-specific copies. On the other hand, the length of a primer is limited by the maximum temperature allowed to be applied in order to melt it, as melting temperature increases with the length of the primer. Melting temperatures that are too high, i.e., above 80ยฐC, can cause problems since the DNA polymerase is less active at such temperatures. The optimum length of a primer is generally from 15 to 40 nucleotides with a melting temperature between 55ยฐC and 65ยฐC.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ไพรเมอร์ส่วนดีเอ็นเอขยายถูกกำหนด โดยเลือกไพรเมอร์ ไพรเมอร์จะสั้น ดีเอ็นเอเทียม strands เครดิต €"มักจะไม่เกิน 50 และปกติเฉพาะ 18 ถึง 25 ฐานคู่ยาวเครดิต €" ที่มีจุดเริ่มต้นหรือจุดสิ้นสุดของส่วน DNA ที่ขยายเพิ่มเติม พวกเขาหลอมแบบ โดยยึดมั่นในดีเอ็นเอแม่แบบจุดเหล่านี้เริ่มต้น และสิ้นสุด ที่พอลิเมอเรส DNA binds และเริ่มสังเคราะห์สาระดีเอ็นเอใหม่เลือกความยาวของไพรเมอร์ที่และอุณหภูมิการละลาย (Tm) ขึ้นอยู่กับจำนวนข้อควรพิจารณา อุณหภูมิการละลายของรองพื้น - ไม่ต้องละลายอุณหภูมิของแม่แบบดีเอ็นเอ - ไว้เป็นอุณหภูมิที่ครึ่งหนึ่งของไซต์รวมพื้นครอบครอง ไพรเมอร์ที่สั้นเกินไปจะหลอมแบบที่ตำแหน่งต่าง ๆ บนยาวดีเอ็นเอแม่แบบ ซึ่งจะทำให้สำเนาที่ไม่เฉพาะเจาะจง บนมืออื่น ๆ ความยาวของพื้นที่ถูกจำกัด โดยอุณหภูมิสูงสุดที่อนุญาตให้ใช้เพื่อละลาย มันเป็นการเพิ่มอุณหภูมิกับความยาวของพื้นที่ละลาย ละลายอุณหภูมิที่สูงเกินไป เช่น เหนือ 80ยฐC สามารถทำให้เกิดปัญหาเนื่องจากพอลิเมอเรส DNA อยู่น้อยที่อุณหภูมิดังกล่าว ความยาวสูงสุดที่พื้นได้ทั่วไปจาก 15 นิวคลีโอไทด์ 40 กับอุณหภูมิละลายระหว่าง 55ยฐC และ 65ยฐC

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ไพรเมอร์ชิ้นดีเอ็นเอที่จะขยายจะถูกกำหนดโดยการเลือกไพรเมอร์ ไพรเมอร์สั้นเส้นดีเอ็นเอเทียมโ€ "มักจะไม่เกิน 50 และมักจะมีเพียง 18-25 ฐานคู่ยาวโ€" ที่มีประกอบกับจุดเริ่มต้นหรือจุดสิ้นสุดของชิ้นดีเอ็นเอที่จะขยาย พวกเขาหลอมโดยยึดมั่นในดีเอ็นเอแม่แบบที่เหล่านี้จุดเริ่มต้นและสิ้นสุดที่ผูกดีเอ็นเอโพลิเมอร์และเริ่มการสังเคราะห์ของดีเอ็นเอใหม่. ทางเลือกของความยาวของไพรเมอร์และอุณหภูมิหลอมละลายของพวกเขา (TM) ขึ้นอยู่กับจำนวนของ การพิจารณา อุณหภูมิหลอมละลายของไพรเมอร์ - ไม่ต้องสับสนกับอุณหภูมิหลอมละลายของแม่แบบดีเอ็นเอ - ถูกกำหนดให้เป็นอุณหภูมิที่ครึ่งหนึ่งของไพรเมอร์ในเว็บไซต์ที่มีผลผูกพันจะครอบครอง ไพรเมอร์ที่มีสั้นเกินไปที่จะหลอมที่หลายตำแหน่งเทมเพลทดีเอ็นเอยาวซึ่งจะส่งผลให้สำเนาไม่เฉพาะเจาะจง ในทางกลับกันความยาวของไพรเมอร์ถูก จำกัด ด้วยอุณหภูมิสูงสุดได้รับอนุญาตให้นำมาใช้ในการสั่งซื้อที่จะละลายมันเป็นเพิ่มอุณหภูมิหลอมเหลวที่มีความยาวของไพรเมอร์ ละลายอุณหภูมิที่สูงเกินไปคือเกินกว่า 80 ยฐ C สามารถก่อให้เกิดปัญหาตั้งแต่ดีเอ็นเอโพลิเมอร์มีการใช้งานน้อยกว่าที่อุณหภูมิดังกล่าว ความยาวที่เหมาะสมของไพรเมอร์โดยทั่วไป 15-40 นิวคลีโอที่มีอุณหภูมิหลอมละลายระหว่าง 55 ยฐ C และ 65 ยฐซี

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ไพรเมอร์

ดีเอ็นเอที่จะขยายจะถูกกำหนดโดยการเลือกรองพื้น ไพรเมอร์สั้นเทียมเส้นดีเอ็นเอโ€ " มักจะไม่เกิน 50 และมักจะมีเพียง 18 ถึง 25 คู่เบสยาวโ€ " นั้นจะประกอบไปจุดเริ่มต้นหรือจุดสิ้นสุดของชิ้นส่วนดีเอ็นเอจะถูกขยายขึ้น พวกเขาหลอมโดยตรงกับดีเอ็นเอแม่แบบเหล่านี้ที่เริ่มต้นและสิ้นสุดที่จุดที่ใช้ดีเอ็นเอมัดและเริ่มสังเคราะห์เส้นดีเอ็นเอใหม่

เลือกความยาวของไพรเมอร์และอุณหภูมิหลอมขึ้นอยู่กับการพิจารณาจำนวนของ . ละลายอุณหภูมิของรองพื้น ไม่ต้องสับสนกับอุณหภูมิหลอมเหลวของแม่แบบดีเอ็นเอ -- หมายถึงอุณหภูมิที่ครึ่งหนึ่งของไพรเมอร์ผูกพันเว็บไซต์ครอบครองไพรเมอร์ที่สั้นเกินไปจะหลอมที่ตำแหน่งหลายแม่แบบ DNA ยาว ซึ่งจะส่งผลในสำเนาที่ไม่เฉพาะเจาะจง . บนมืออื่น ๆ , ความยาวของไพรเมอร์จะถูก จำกัด โดยอุณหภูมิสูงสุดที่อนุญาตให้ใช้เพื่อละลายเพราะอุณหภูมิละลายเพิ่มความยาวของไพรเมอร์ ละลายอุณหภูมิที่สูงเกินไป เช่น 80 องศาเหนือ ,สามารถก่อให้เกิดปัญหาเนื่องจากดีเอ็นเอพอลิเมอเรสจะน้อยกว่าการใช้งานที่อุณหภูมิดังกล่าว ความยาวที่เหมาะสมของรองพื้นทั่วไป 15 40 นิวคลีโอไทด์กับละลาย อุณหภูมิระหว่าง 55 และ 65 องศายฐ C