Materials and methods2.1 Strains an

Materials and methods
2.1 Strains and media
The Escherichia coli strains HST08 (TaKaRa Bio Inc., Otsu, Japan) was used as a host for recombinant DNA manipulations. Recombinant E. coli cells were cultivated on LuriaBertani (LB) medium (10 g/L tryptone [Nacalai Tesque, Kyoto, Japan], 5 g/L yeast extract [Nacalai Tesque], and 5 g/L NaCl) supplemented with 100 μg/mL ampicillin sodium salt.

The yeast strains P. pastoris GS115 (Life Technologies, Carlsbad, CA, USA) was used as a host for cell surface display of BTL2 from G. thermocatenulatus. Recombinant P. pastoris cells were selected and cultivated using minimal dextrose (MD) medium (13.4 g/L Yeast Nitrogen Base without amino acids [Difco Laboratories, MI, USA], 0.4 mg/L biotin, and 20 g/L glucose) buffered with sodium phosphate (pH 7.0, 100 mM). Flask cultivation was performed using a 500 mL flask with baffles containing 150 mL of medium and a rotary shaker operated at 30 °C and 150 rpm. Cultivation was performed in 2-mL deep, 96-well plates containing 1.2 mL of medium/well, equipped with a gas-permeable seal on a rotary plate shaker operated at 30 °C and 1500 rpm.

2.2 Plasmid construction and

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

วัสดุและวิธีการสายพันธุ์ 2.1 และสื่อEscherichia coli สายพันธุ์ HST08 (TaKaRa ชีวภาพ Inc. โอสึ ญี่ปุ่น) ใช้เป็นโฮสต์สำหรับ manipulations recombinant DNA เซลล์ recombinant E. coli ถูกปลูกบนสื่อกลาง LuriaBertani (ปอนด์) (tryptone 10 g/L [Nacalai Tesque เกียวโต ญี่ปุ่น], 5 แยกยีสต์สารสกัด [Nacalai Tesque], และ 5 g/L NaCl) เสริม ด้วยเกลือโซเดียมโกคอ μ/mL 100สายพันธุ์ยีสต์ P. pastoris GS115 (ชีวิตเทคโนโลยี คาร์ลบาด CA, USA) ใช้เป็นโฮสต์สำหรับเซลล์ผิวจอแสดงผลของ BTL2 จาก G. thermocatenulatus เลือกเซลล์ recombinant P. pastoris และปลูกโดยใช้บัฟเฟอร์ฟอสเฟตโซเดียม (pH 7.0, 100 mM) ปานกลางน้อยเดกซ์โทรส (MD) (13.4 g/L เบสไนโตรเจนยีสต์ไม่ มีกรดอะมิโน [ห้องปฏิบัติการ Difco, MI สหรัฐอเมริกา], ไบโอติน 0.4 mg/L และกลูโคส 20 g/L) ทำขวดเพาะใช้เป็นขวดขนาด 500 มล. มีพุ่งที่ประกอบด้วย 150 มล.ปานกลางและปั่นโรตารี่การดำเนินที่ 30 ° C ถึง 150 รอบต่อนาที ทำการเพาะปลูกใน 2 มล.ลึก 96 หลุมแผ่น 1.2 mL ปานกลาง/ดี ที่ประกอบด้วยพร้อมกับตราแก๊สซึมเข้าไปได้บนปั่นจานหมุนที่ดำเนินที่ 30 ° C และ 1500 rpm2.2 ก่อสร้าง plasmid และ

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

วัสดุและวิธีการ
2.1 สายพันธุ์และสื่อ
Escherichia coli สายพันธุ์ HST08 (Takara Bio อิงค์ Otsu, ญี่ปุ่น) ถูกใช้เป็นเจ้าภาพกิจวัตรดีเอ็นเอ recombinant E. coli เซลล์ได้รับการปลูกฝังใน LuriaBertani (ปอนด์) ขนาดกลาง (10 กรัม / ลิตร Tryptone [Nacalai Tesque เกียวโตญี่ปุ่น], 5 กรัม / ลิตรสารสกัดจากยีสต์ [Nacalai Tesque] และ 5 กรัม / ลิตรโซเดียมคลอไรด์) เสริมด้วย 100 ไมโครกรัม / mL ampicillin เกลือโซเดียม.

ยีสต์สายพันธุ์ P. pastoris GS115 (ไลฟ์เทคโนโลยีส์, คาร์ลส, CA, USA) ถูกนำมาใช้เป็นเจ้าภาพสำหรับการแสดงผลของเซลล์ผิวจาก BTL2 กรัม thermocatenulatus recombinant P. pastoris เซลล์ได้รับการคัดเลือกและการเพาะปลูกโดยใช้เดกซ์โทรสน้อยที่สุด (MD) กลาง (13.4 กรัมฐาน / L ยีสต์ไนโตรเจนโดยไม่ต้องกรดอะมิโน [Difco ห้องปฏิบัติการ, MI, USA] 0.4 มิลลิกรัม / ลิตรไบโอตินและ 20 กรัม / ลิตรกลูโคส) บัฟเฟอร์ กับโซเดียมฟอสเฟต (pH 7.0 100 มิลลิเมตร) การเพาะปลูกขวดถูกดำเนินการโดยใช้ขวดมิลลิลิตร 500 กับแผ่นกั้นที่มี 150 มลกลางและปั่นแบบหมุนทำงานที่อุณหภูมิ 30 องศาเซลเซียสและ 150 รอบต่อนาที การเพาะปลูกที่ได้ดำเนินการใน 2 มิลลิลิตรจานลึก 96 หลุมที่มี 1.2 มลกลาง / ดีพร้อมกับประทับตราก๊าซซึมเข้าไปในเครื่องปั่นจานโรตารี่ดำเนินการวันที่ 30 องศาเซลเซียสและ 1,500 รอบต่อนาที.

2.2 การก่อสร้างและพลาสมิด