2.12. Caspase 3/7, 8 and 9 assaysCa

2.12. Caspase 3/7, 8 and 9 assays
Caspase activity was measured by using Caspase-Glo

3/7, 8 and 9 assay kits
(Promega Corporation, Australia). Briefly, SK-MEL-28 and A-431 cells (110
4
cells/well) were seeded in a luminometer plate and incubated for 24 h at 37C. Cells
were then treated with different concentrations of individual compounds for 48 h.
To each well, 50ll of caspase-3/7, -8 or -9 reagents were added and the luminescence was recorded every 15 min for 1 h at 28C in a microplate reader (Synergy
4, Bioteck, Millennium Science).
Prior to the Caspase assay, cell number in the same well after treatment was
measured by the Cell Titer Blue assay (Promega Corporation, Australia) to normalize
the result. Briefly, 10ll of the staining was added to each well and incubated for 1 h
at 37C. The fluorescence was recorded at 560(excitation)/590(emission) in a
microplate reader.
The results are presented as relative luminescence unit (RLU)/cell/min.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.12. Caspase 3/7, 8 และ 9 assaysกิจกรรม Caspase ถูกวัดโดย Caspase Gloชุดทดสอบ 3/7, 8 และ 9(Promega Corporation ออสเตรเลีย) สั้น ๆ SK-เมล-28 และ A-431 เซลล์ (1 104seeded จาน luminometer และ incubated ใน 24 ชมที่ 37 C. เซลล์เซลล์/ดี)แล้วก็ถือว่า มีความเข้มข้นต่าง ๆ ของสารแต่ละสำหรับ 48 hดีละ 50ll ของ caspase-3/7, -8 หรือ-9 reagents เพิ่ม และ luminescence การบันทึกทุก ๆ 15 นาทีสำหรับ h 1 ที่ 28 C ในเครื่อง microplate อ่าน (Synergy4, Bioteck มิลเลนเนียมวิทยาศาสตร์)ก่อนทดสอบ Caspase เซลล์หมายเลขในบ่อเดียวกันหลังจากรักษาได้วัด โดยการวิเคราะห์เซลล์ Titer บลู (Promega Corporation ออสเตรเลีย) เพื่อลดขนาดผลลัพธ์ สั้น ๆ เพิ่ม 10ll ของย้อมสีดี และ incubated สำหรับ 1 h แต่ละที่ 37 เซลเซียส Fluorescence ที่ถูกบันทึกใน 560(excitation)/590(emission) ในการอ่าน microplateผลลัพธ์จะแสดงเป็นญาติ luminescence (RLU) หน่วย/เซลล์/min

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.12 caspase 3/7, 8 และ 9
การวิเคราะห์กิจกรรมcaspase วัดโดยใช้
caspase-Glo?
3/7, 8 และ 9 ชุดทดสอบ
(Promega คอร์ปอเรชั่นออสเตรเลีย) สั้น ๆ , SK-MEL-28 A-431 เซลล์ (1 10
4
เซลล์ / ดี) มีเมล็ดในจาน luminometer และบ่มเป็นเวลา 24 ชั่วโมงที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียส เซลล์ได้รับการรักษาแล้วมีความเข้มข้นแตกต่างกันของสารแต่ละบุคคลเป็นเวลา 48 ชม. โดยให้แต่ละคนดี 50ll ของ caspase-3/7 -8 -9 หรือสารเคมีที่ถูกเพิ่มและเรืองแสงได้รับการบันทึกทุก 15 นาทีเป็นเวลา 1 ชั่วโมงที่ 28 องศาเซลเซียสใน อ่าน microplate (Synergy 4 Bioteck มิลเลนเนียมวิทยาศาสตร์). ก่อนที่จะมีการทดสอบ Caspase จำนวนเซลล์ในดีเดียวกันหลังการรักษาได้รับการวัดจากการทดสอบของเซลล์titer สีฟ้า (Promega คอร์ปอเรชั่นออสเตรเลีย) จะปรับผล สั้น ๆ , 10ll ของการย้อมสีที่ถูกเพิ่มเข้ามาในแต่ละดีและบ่มเป็นเวลา 1 ชั่วโมงที่อุณหภูมิ37 องศาเซลเซียส เรืองแสงที่ถูกบันทึกไว้ที่ 560 (การกระตุ้น) / 590 (การปล่อยก๊าซ) ในผู้อ่านmicroplate. ผลที่ได้นั้นจะเป็นหน่วยเรืองแสงสัมพัทธ์ (RLU) / มือถือ / นาที

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.12 . แคสเปส 3 / 7 , 8 และ 9 )
กิจกรรมแคสเปสวัดโดยใช้แคสเปส  ฯ

3 / 7 , 8 และ 9 ) ชุด
( promega Corporation , ออสเตรเลีย ) สั้น ๆ , และ sk-mel-28 a-431 เซลล์ ( 1  10
4
เซลล์ / ดี ) มีเมล็ดในลูมิโนมิเตอร์จานและบ่มเป็นเวลา 24 ชั่วโมงที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียส  เซลล์
แล้วปฏิบัติกับระดับความเข้มข้นของสารประกอบแต่ละ 48 h .
แต่ละดี 50ll ของการศึกษาลักษณะ / 7- 8 - 9 สามารถเพิ่มและการบันทึกทุก 15 นาทีเป็นเวลา 1 ชั่วโมง ที่ 28  C ในพื้นที่ภาคเหนือของประเทศไทย ( อ่าน )
4 bioteck มิลเลนเนียม , วิทยาศาสตร์ ) .
ก่อนที่จะแคสเปสโดยจำนวนเซลล์ในเดียวกันดีหลังการรักษา โดยวัดจากระดับเซลล์
assay ( promega สีฟ้า บริษัท ออสเตรเลีย ) ปกติ
ผล สั้น ๆ10ll ของย้อมเพิ่มแต่ละอย่างดีและบ่มเป็นเวลา 1 ชั่วโมง
37  C นี้เป็นบันทึกที่ 560 ( กระตุ้น ) / 590 ( มลพิษ ) ในพื้นที่ภาคเหนือของประเทศไทยเป็นอ่าน
.
ผลลัพธ์จะแสดงเป็นหน่วยการสัมพัทธ์ ( rlu ) / เซลล์ / min