Pure, axenic culturesIf biological

Pure, axenic cultures

If biological contaminants appear in a culture, the best remedy is to isolate a single cell from the culture with a micropipette, and try to establish a new, clean clonal culture. Alternatively the culture can be streaked on an agar plate (see below) in the hope of attaining a colony free of contaminants. Neither of these methods work well, however, for eliminating bacteria that attach firmly to the surface of microalgae. Placing a test tube of microalgal culture in a low-intensity 90 kilocycles/sec ultrasonic water bath for varying lengths of time (a few seconds to tens of minutes) can sometimes physically separate bacteria without killing the algae, making it easier to obtain an axenic culture by micropipette isolation.

Often, however, to achieve an axenic culture, antibiotics must be used. Best results appear to occur when an actively growing culture of algae is exposed to a mixture of penicillin, streptomycin and gentamycin for around 24 hours. This drastically reduces the growth of bacteria while allowing the microalgae to continue to grow, increasing the chances of obtaining an axenic cell when using micropippette or agar streaking isolation. Different algal species tolerate different concentrations of antibiotics, so a range of concentrations should be used (generally 50-500 mg/l). Other antibiotics that can be used include chloramphenicol, tetracycline, and bacitracin. Antibiotic solutions should be made with distilled water and filter-sterilized (0.2µm filter units) into sterile tubes, and should be stored frozen until use. Another approach is to add a range of antibiotic concentrations to a number of subcultures and then select the culture that has surviving algal cells but no surviving bacteria or other contaminants. Sterility of cultures should be checked by microscopic examination and by adding a small amount of sterile bacterial culture medium (eg. 0.1% peptone) to a microalgal culture and observing regularly for bacterial growth. Absence of bacterial growth does not, however, ensure that the microalgal culture is axenic, since the majority of bacteria do not respond to standard enrichments. In reality there is no way of demonstrating that a microalgal culture is completely axenic. In practise, therefore, axenic usually means ‘without demonstrable unwanted prokaryotes or eukaryotes’. Some microalgal cultures may die when made axenic, probably due to the termination of obligate symbiotic relationships with bacteria.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

วัฒนธรรมบริสุทธิ์ axenicสารปนเปื้อนทางชีวภาพแสดงวัฒนธรรม วิธีการรักษาที่ดีที่สุดคือการ แยกเซลล์เดียวจากวัฒนธรรมด้วย micropipette และพยายามสร้างวัฒนธรรม clonal ใหม่ สะอาด อีกวิธีหนึ่งคือ วัฒนธรรมสามารถริ้วบนเป็นแผ่นวุ้น (ดูด้านล่าง) ความหวังของสังคมอาณานิคมปราศจากสารปนเปื้อน ของวิธีการเหล่านี้ทำงานดี อย่างไรก็ตาม ในการกำจัดแบคทีเรียที่แนบแน่นกับพื้นผิวของสาหร่าย วางหลอด microalgal วัฒนธรรมในความเข้มต่ำ 90 kilocycles/sec อัลตราโซนิกอ่างน้ำสำหรับความยาวที่แตกต่างกันของเวลา (กี่วินาทีถึงสิบนาที) สามารถบางครั้งร่างกายแยกแบคทีเรียโดยไม่ต้องฆ่าสาหร่าย จึงทำให้ได้รับการเพาะเลี้ยง โดยแยก micropipetteมักจะ อย่างไรก็ตาม เพื่อให้บรรลุการเพาะ ยาปฏิชีวนะต้องใช้ ผลปรากฏ จะเกิดวัฒนธรรมกำลังเจริญเติบโตของสาหร่ายเมื่อสัมผัสกับส่วนผสมของยาเพนนิซิลลิน streptomycin และ gentamycin ประมาณ 24 ชั่วโมง นี้ช่วยลดการเจริญเติบโตของเชื้อแบคทีเรียในขณะที่สาหร่ายจะยังคงเติบโต ช่วยให้เพิ่มโอกาสของการได้รับการเซลล์ axenic เมื่อใช้ micropippette หรือวุ้นหลากแยก สาหร่ายสายพันธุ์ที่ทนต่อความแตกต่างความเข้มข้นของยาปฏิชีวนะ ดังนั้นช่วงของความเข้มข้นควรจะใช้ (โดยทั่วไป 50-500 mg/l) ยาปฏิชีวนะอื่น ๆ ที่สามารถใช้ ด้วยคคัส เตตราไซคลีน bacitracin แก้ปัญหายาปฏิชีวนะควรทำ ด้วยน้ำกลั่น และกรองฆ่าเชื้อ (0.2µm กรองหน่วย) ลงในหลอดที่ปลอดเชื้อ และควรจะเก็บไว้แช่แข็งจนกว่าจะใช้ วิธีอื่นคือการ เพิ่มความเข้มข้นของยาปฏิชีวนะที่หลากหลายของ subcultures และเลือกวัฒนธรรมที่มีรอดสาหร่ายเซลล์ แต่แบคทีเรียไม่รอดตาย หรือสารปนเปื้อนอื่น ๆ ความแห้งแล้งของวัฒนธรรมควรตรวจสอบ โดยการตรวจด้วยกล้องจุลทรรศน์ และเพิ่มจำนวนเล็ก ๆ ของสารฆ่าเชื้อแบคทีเรีย (เช่น. 0.1% peptone) วัฒนธรรม microalgal และสังเกตอย่างสม่ำเสมอการเติบโตของแบคทีเรีย ของแบคทีเรียไม่ อย่างไรก็ตาม ให้แน่ใจว่า วัฒนธรรม microalgal axenic เนื่องจากส่วนใหญ่ของแบคทีเรียไม่ตอบสนองมาตรฐาน enrichments ในความเป็นจริง จะไม่มีทางตามที่ว่าวัฒนธรรม microalgal axenic สมบูรณ์ ในการฝึก ดังนั้น axenic มักจะหมายถึง 'ไม่ prokaryotes พลอยที่ไม่พึงประสงค์หรือ eukaryotes' บางวัฒนธรรม microalgal ตายเมื่อ axenic อาจเป็น เพราะการสิ้นสุดของ obligate symbiotic สัมพันธ์กับแบคทีเรีย

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

เพียววัฒนธรรม axenic

หากสารปนเปื้อนทางชีวภาพปรากฏในวัฒนธรรมรักษาที่ดีที่สุดคือการแยกเซลล์เดียวจากการเพาะเลี้ยงที่มี micropipette และพยายามที่จะสร้างใหม่วัฒนธรรม clonal สะอาด อีกวิธีหนึ่งคือวัฒนธรรมที่สามารถลายบนจานเลี้ยงเชื้อ (ดูด้านล่าง) ในความหวังของการบรรลุอาณานิคมฟรีของสารปนเปื้อน ทั้งวิธีการเหล่านี้ทำงานได้ดี แต่สำหรับการขจัดแบคทีเรียที่แนบแน่นกับพื้นผิวของสาหร่ายทะเลขนาดเล็ก วางหลอดทดลองของวัฒนธรรมสาหร่ายในความเข้มต่ำ 90 กิโลไซเคิล / วินาทีอ่างน้ำล้ำแตกต่างกันสำหรับความยาวของเวลา (ไม่กี่วินาทีไปนับนาที) สามารถแบคทีเรียบางครั้งแยกกันโดยไม่ต้องฆ่าสาหร่ายทำให้มันง่ายที่จะได้รับ axenic วัฒนธรรมโดยแยก micropipette.

อย่างไรก็ตามบ่อยครั้งเพื่อให้เกิดวัฒนธรรม axenic ยาปฏิชีวนะต้องใช้ ปรากฏผลลัพธ์ที่ดีที่สุดที่จะเกิดขึ้นเมื่อมีการเจริญเติบโตอย่างแข็งขันวัฒนธรรมของสาหร่ายจะสัมผัสกับส่วนผสมของยาปฏิชีวนะ, streptomycin และ Gentamycin ประมาณ 24 ชั่วโมง เช่นนี้ช่วยลดการเจริญเติบโตของเชื้อแบคทีเรียในขณะที่ให้สาหร่ายทะเลขนาดเล็กจะยังคงเติบโตเพิ่มโอกาสของการได้รับเซลล์ axenic เมื่อใช้ micropippette หรือวุ้นลายเส้นแยก สายพันธุ์สาหร่ายที่แตกต่างกันทนต่อความเข้มข้นแตกต่างกันของยาปฏิชีวนะดังนั้นช่วงของความเข้มข้นควรใช้ (โดยทั่วไป 50-500 mg / l) ยาปฏิชีวนะอื่น ๆ ที่สามารถนำมาใช้ ได้แก่ chloramphenicol, tetracycline และ Bacitracin การแก้ปัญหายาปฏิชีวนะควรจะทำด้วยน้ำกลั่นและ (หน่วยกรอง0.2μm) กรองฆ่าเชื้อเข้าไปในหลอดฆ่าเชื้อและควรเก็บไว้แช่แข็งจนใช้ อีกวิธีหนึ่งคือการเพิ่มช่วงของความเข้มข้นของยาปฏิชีวนะไปยังหมายเลขของวัฒนธรรมและจากนั้นเลือกวัฒนธรรมที่ยังหลงเหลืออยู่ในเซลล์สาหร่าย แต่ไม่มีเชื้อแบคทีเรียที่มีชีวิตรอดหรือสารปนเปื้อนอื่น ๆ การฆ่าเชื้อของวัฒนธรรมที่ควรได้รับการตรวจสอบโดยการตรวจด้วยกล้องจุลทรรศน์และโดยการเพิ่มจำนวนเล็ก ๆ ของอาหารเลี้ยงเชื้อแบคทีเรียฆ่าเชื้อ (เช่น. 0.1% เปปโตน) กับวัฒนธรรมสาหร่ายและการสังเกตอย่างสม่ำเสมอสำหรับการเจริญเติบโตของเชื้อแบคทีเรีย กรณีที่ไม่มีการเจริญเติบโตของแบคทีเรียไม่ได้ แต่ให้แน่ใจว่าวัฒนธรรมคือสาหร่าย axenic เนื่องจากส่วนใหญ่ของเชื้อแบคทีเรียที่ไม่ตอบสนองต่อ enrichments มาตรฐาน ในความเป็นจริงมีวิธีการแสดงให้เห็นว่าวัฒนธรรมคือสาหร่าย axenic สมบูรณ์ ในทางปฏิบัติจึง axenic มักจะหมายถึง 'โดยไม่ต้องแสดงให้เห็น prokaryotes ที่ไม่พึงประสงค์หรือยูคาริโอ' บางวัฒนธรรมสาหร่ายอาจตายเมื่อทำ axenic อาจเป็นเพราะการสิ้นสุดของความสัมพันธ์ทางชีวภาพหนี้บุญคุณกับเชื้อแบคทีเรีย