The same mix of three nalidixic aci

The same mix of three nalidixic acid-resistant (NaP) strains of E. coli 0157:H7 used by Allende et al. (2006), and which were derived from the outbreak strains, F6460, F151 10, H26696, was used. Cultures were kept at - 80°C in Luria-Bertani (LB) broth (Difco Laboratories, Detroit, MI) containing 25% (v/v) glycerol. E. coli 0157:H7 strains were grown at 37°C, shaken in LB broth supplemented with nalidixic acid (Nal) (50 igL') until stationary phase (20 hr growth) and cultured onto LB-Nal agar at 37°C for 24 hr. E. coli 0157:H7 NalR strains were consecutively subcultured twice in 100 mL of LB-Nal broth at 37°C for 24 hr with constant agitation at 175 rpm (1.3 g) to obtain a final 013 reading of about 0.5. The second culture was allowed to adapt to a final temperature of 12°C for 4 hr. Cultures were washed twice by centrifugation (4,000 X g, 15 mm, 4°C) with 0.1% peptone water. The final pellets were resuspended in 5-10 mL of 0.1% peptone water containing 5% horse serum according to the method of Beuchat et al. (2001) and Burnett et al. (2004). The strain cocktail was proportionally diluted in deionized water at 12°C to achieve a final concentration of about 107 cfu ml-' of E. coli 01 57:H7 NalR (confirmed by plating on selective media). The mesh bags of shredded carrots were completely immersed in the inoculum solution and kept under constant agitation for 30 mm. The product was removed from the inoculum solution and maintained at 5°C for approximately 60 min to increase the. number of cells attached to the product. Finally, excess inoculum was removed by centrifugation using a manually-operated enclosed spinner (OXO Good Grips, Elmira, NY) for approximately 20 sec. The entire experiment was carried out in a Biosafety Level 2 Laboratory.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ใช้ผสมผสานกันทั้งสามสายพันธุ์ (NaP) ทนกรดนาลิดิซิกของ E. coli 0157:H7 Allende et al. (2006), และที่ได้มาจากสายพันธุ์ระบาด F6460, F151 10, H26696 วัฒนธรรมถูกเก็บที่ - 80° C ในซุป (ปฏิบัติ Difco ดีทรอยต์ MI) Luria-Bertani (ปอนด์) ที่ประกอบด้วยกลีเซอร 25% (v/v) สายพันธุ์ 0157:H7 e. coli ถูกปลูกที่ 37 ° C เขย่าในซุปปอนด์ที่เสริม ด้วยกรดนาลิดิซิก (Nal) (50 igL') จนถึงระยะเครื่องเขียน (20 ชั่วโมงเจริญเติบโต) และอ่างไปปอนด์ Nal agar ที่ 37 ° C ใน 24 ชั่วโมง E. coli สายพันธุ์ NalR 0157:H7 subcultured ติดต่อกันสองครั้งใน 100 mL ของซุป Nal ปอนด์ที่ 37 ° C ใน 24 ชั่วโมงมีอาการกังวลต่อค่าคงที่ที่ 175 rpm (1.3 กรัม) เพื่อให้ได้ที่สุดท้าย 013 อ่านประมาณ 0.5 วัฒนธรรมสองที่สามารถปรับให้เข้ากับอุณหภูมิสุดท้ายของ 12° C สำหรับวัฒนธรรม 4 ชั่วโมงถูกล้างสองครั้ง โดย centrifugation (4000 X g, 15 มม. 4° C) น้ำ peptone 0.1% ขี้สุดท้ายถูก resuspended ใน 5-10 mL น้ำ peptone 0.1% ประกอบด้วยซีรั่มม้า 5% ตามวิธีของ al. et Beuchat (2001) และ al. et Burnett (2004) ค็อกเทลต้องใช้สัดส่วนที่ผสมในน้ำ deionized ที่ 12° C เพื่อให้ได้ความเข้มข้นสุดท้ายประมาณ 107 cfu ml-' ของ E. coli 01 57:H7 NalR (ยืนยัน โดยชุบในสื่อที่ใช้) ถุงตาข่ายใส่แครอทหั่นถูกแช่อยู่ในโซลูชัน inoculum สมบูรณ์ และยังคงอยู่ภายใต้อาการกังวลต่อค่าคงที่สำหรับ 30 มม. ผลิตภัณฑ์ถูกเอาออกจากโซลูชัน inoculum และรักษาที่ 5° C สำหรับการเพิ่มประมาณ 60 นาที จำนวนเซลล์ที่แนบมากับผลิตภัณฑ์ สุดท้าย inoculum เกินถูกเอาออก โดยใช้การหยอดด้วยตนเองควบสปินเนอร์ (Grips ดี OXO, Elmira, NY) ประมาณ 20 วินาที centrifugation ทดลองทั้งหมดถูกดำเนินในห้องปฏิบัติการ 2 ระดับ Biosafety

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ผสมเดียวกันของสาม nalidixic ที่ทนกรด (NAP) สายพันธุ์ของเชื้อ E. coli 0157: H7 ใช้โดยอัลเลนและอัล (2006) และที่ได้มาจากสายพันธุ์ที่ระบาด F6460, F151 10 H26696 ถูกนำมาใช้ วัฒนธรรมที่ถูกเก็บไว้ที่ - 80 องศาเซลเซียสใน Luria-Bertani (LB) น้ำซุป (Difco ห้องปฏิบัติการ, ดีทรอยต์, มิชิแกน) ที่มี 25% (v / v) กลีเซอรอล เชื้อ E. coli 0157: H7 สายพันธุ์ปลูกที่ 37 องศาเซลเซียสเขย่าในน้ำซุป LB เสริมด้วยกรด nalidixic (เอ็น) (50 IGL ') จนกว่าเฟส (20 ชั่วโมงการเจริญเติบโต) และเพาะเลี้ยงบนอาหารเลี้ยงเชื้อ LB-เอ็นที่ 37 องศาเซลเซียส 24 ชั่วโมง เชื้อ E. coli 0157: H7 NalR สายพันธุ์ที่ถูกเลี้ยงอย่างต่อเนื่องเป็นครั้งที่สองใน 100 มิลลิลิตรของน้ำซุป LB-เอ็นที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 24 ชั่วโมงกับการกวนคงที่ที่ 175 รอบต่อนาที (1.3 กรัม) เพื่อให้ได้เป็นครั้งสุดท้าย 013 อ่านประมาณ 0.5 วัฒนธรรมที่สองได้รับอนุญาตให้ปรับตัวเข้ากับอุณหภูมิสุดท้ายของ 12 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 4 ชั่วโมง วัฒนธรรมถูกล้างครั้งที่สองโดยการหมุนเหวี่ยง (4,000 X กรัม, 15 มม, 4 ° C) 0.1% น้ำเปปโตน เม็ดสุดท้ายถูก resuspended ใน 5-10 มิลลิลิตรน้ำเปปโตน 0.1% ที่มีซีรั่มม้า 5% ตามวิธีการของ Beuchat et al, (2001) และเบอร์เน็ตต์, et al (2004) ค๊อกเทลสายพันธุ์ที่ได้รับการปรับลดสัดส่วนในน้ำปราศจากไอออนที่ 12 องศาเซลเซียสเพื่อให้บรรลุความเข้มข้นสุดท้ายประมาณ 107 cfu ml- ของเชื้อ E. coli 01 57: H7 NalR (ยืนยันโดยการชุบในสื่อที่เลือก) ถุงตาข่ายของแครอทหั่นถูกแช่อย่างสมบูรณ์ในการแก้ปัญหาเชื้อและเก็บไว้ภายใต้ความปั่นป่วนอย่างต่อเนื่องเป็นเวลา 30 มิลลิเมตร สินค้าจะถูกลบออกจากสารละลายเชื้อและการบำรุงรักษาที่ 5 องศาเซลเซียสประมาณ 60 นาทีเพื่อเพิ่ม จำนวนของเซลล์ที่แนบมากับสินค้า ในที่สุดเชื้อส่วนเกินถูกลบออกโดยการหมุนเหวี่ยงใช้ด้วยตนเองดำเนินการปิดล้อมปั่น (OXO Grips ดี Elmira, นิวยอร์ก) ประมาณ 20 วินาที การทดลองทั้งหมดถูกดำเนินการในความปลอดภัยทางชีวภาพระดับ 2 ห้องปฏิบัติการ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การผสมกันของสามสะพานกรุงธนทน ( NAP ) สายพันธุ์ของเชื้อ E . coli O157 : H7 ใช้ Allende et al . ( 2006 ) และที่ได้มาจากการระบาดสายพันธุ์ f6460 f151 , 10 , h26696 , ใช้ วัฒนธรรมที่ถูกเก็บที่อุณหภูมิ - 80 องศา C ในลุเรียแบร์ตานิ ( LB ) ซุป ( difco ห้องปฏิบัติการ , Detroit , MI ) บรรจุ 25 เปอร์เซ็นต์ ( v / v ) กลีเซอรอล . เชื้ออีโคไล O157 : H7 สายพันธุ์ ปลูกที่ 37 ° C , เขย่าในน้ำซุปเติมปอนด์สะพานกรุงธน ( นานาชาติ ) ( 50 IGL ' ) จนถึงระยะ stationary ( เติบโต 20 ชั่วโมง ) และเลี้ยงบนปอนด์ นาล วุ้นที่ 37 °องศาเซลเซียสเป็นเวลา 24 ชั่วโมง E . coli O157 : H7 nalr สายพันธุ์ ตามลำดับ subcultured 2 ครั้ง ใน 100 มิลลิลิตรของน้ำซุปที่ 37 ° C ปอนด์จำหน่าย 24 ชั่วโมงด้วยอัตราคงที่ที่ 175 รอบต่อนาที ( 1.3 กรัม ) เพื่อให้ได้สุดท้าย 013 อ่านประมาณ 0.5 วัฒนธรรมที่สองคืออนุญาตให้เข้ากับอุณหภูมิสุดท้ายของ 12 ° C เป็นเวลา 4 ชั่วโมง วัฒนธรรมที่ถูกล้างสองครั้งโดยการเหวี่ยงแยก ( 4000 x G , 15 มม. , 4 ° C ) 0.1 % ตามลำดับ น้ำ เม็ดสุดท้ายถูก resuspended ใน 5-10 มิลลิลิตรของน้ำที่ประกอบด้วย 0.1% extract 5% ม้าเซรั่มตามวิธีการของ beuchat et al . ( 2001 ) และ Burnett et al . ( 2004 ) สายพันธุ์ค็อกเทลคือสัดส่วนเจือจางในน้ำคล้ายเนื้อเยื่อประสานที่ 12 °องศาเซลเซียสเพื่อให้บรรลุขั้นสุดท้าย ความเข้มข้นของเกี่ยวกับ 107 CFU ml - ' ของ E . coli ( 01 : 57 ) nalr ( ยืนยันโดยการชุบบนสื่อ ) ถุงตาข่าย แครอทหั่นฝอยถูกแช่ในสารละลายเชื้อและเก็บไว้ภายใต้การควบคุมการกวน 30 มิลลิเมตร ผลิตภัณฑ์ที่ถูกลบออกจากเชื้อและโซลูชั่นรักษาที่ 5 องศา C ประมาณ 60 นาทีเพื่อเพิ่ม . จำนวนเซลล์ที่แนบมากับสินค้า ในที่สุด โดยส่วนเกินออกโดยการเหวี่ยงแยกใช้ด้วยตนเองดำเนินการปิดปินเนอร์ ( OXO Grips ดีเอลไมรา , NY ) ประมาณ 20 วินาที การทดสอบทั้งหมดได้ดำเนินการใน 2 ระดับความปลอดภัยทางชีวภาพในห้องปฏิบัติการ